【摘要】：NF-κB信號通路廣泛參與了多種生物學過程的調控，包括細胞增殖、存活、凋亡、免疫反應、炎癥等，該信號通路的異�；罨蓪е露喾N疾病。角蛋白CK8是中間纖維的組成成分，其過表達與腫瘤發(fā)生密切相關。前期我們發(fā)現CK8可抑制TNF誘導的NF-κB信號通路的活化，提示CK8是NF-κB通路的負調因子。本研究對CK8在負調控NF-κB通路中的作用及分子機制進行了深入研究，并探討其負調NF-κB通路所介導的生理病理學意義。 本文首先引進了CK8-/-小鼠，并對其基因型及表達進行了鑒定。發(fā)現敲除CK8可導致小鼠發(fā)生嚴重的結腸炎伴隨結腸增生，同時多臟器出現炎細胞浸潤。同時，我們進一步利用CK8敲除小鼠從體內水平驗證了CK8對NF-B通路的負調控作用。利用AOM+DSS誘導的結腸癌模型，評價了CK8敲低小鼠在結腸癌發(fā)生中的作用，結果表明CK8敲低對誘導劑更加敏感，腸系膜淋巴結中CD4+CD69+T細胞比例明顯增多，提示CK8敲除可能在結腸癌發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。 我們進一步對CK8負調控NF-κB信號通路的作用機制進行了深入研究。利用堿性磷酸酶報告基因實驗發(fā)現CK8可以劑量依賴的方式抑制TNF誘導的NF-κB信號通路活化；CK8過表達可抑制TNF誘導的IκB磷酸化的影響；EMSA實驗證實CK8可降低NF-B的DNA結合能力；Realtime PCR實驗證實過表達CK8抑制NF-κB下游靶基因如IL-1的表達。此外，還發(fā)現CK8對Toll樣受體5（TLR5）的激動劑鞭毛蛋白CLB502誘導的NF-κB活化也有明顯的抑制作用，并具有劑量依賴效應；進一步發(fā)現CK8對NF-κB通路的抑制作用發(fā)生在IKK復合體水平。我們還發(fā)現CK8可通過調控E3泛素連接酶對NEMO的泛素化修飾，進而實現對NF-κB的負調控作用。 為進一步探討CK8負調控NF-κB通路的作用機制，構建了人CK8RNAi慢病毒載體，為后續(xù)實驗奠定了基礎。為驗證CK8敲除小鼠表型的特異性，我們還進一步制備了小鼠CK8過表達慢病毒。 綜上，本研究明確了細胞角蛋白CK8對NF-κB信號通路的負調控作用，揭示CK8抑制TRAF2與NEMO之間相互作用可能是其發(fā)揮作用的重要機制，同時發(fā)現CK8缺失可導致小鼠體內NF-κB信號通路異常活化，小鼠自發(fā)發(fā)生結腸炎伴隨結腸增生。
【學位授予單位】：天津大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R574.62

【共引文獻】

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本文編號：2777034