【摘要】： 腸功能障礙可使整個機體處于較為嚴重的營養(yǎng)不良狀態(tài)。而在目前的治療方案中,腸外營養(yǎng)支持可改善患者的營養(yǎng)狀況,維護腸屏障功能,但長期腸外營養(yǎng)可出現(xiàn)肝功能損害和骨質(zhì)疏松癥等并發(fā)癥。腸移植可從根本上治愈腸功能障礙,但其的較高的總體的失敗率和高費用又限制了其在臨床中的廣泛開展。 骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)是來源于中胚層的多能祖細胞,具有自我更新和向中胚層其它細胞分化的能力。在機體組織受損傷時,經(jīng)骨髓動員到達損傷部位,可在局部微環(huán)境誘導下分化為特異的組織細胞,參與自身修復。加之骨髓間充質(zhì)干細胞具有的低免疫原性、取材方便,易培養(yǎng),增殖快的特點,已使之成為組織工程中理想的種子細胞。骨髓間充質(zhì)干細胞作為細胞治療和基因治療的種子細胞,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于心血管、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸和創(chuàng)傷等方面的基礎(chǔ)研究,部分成果已用于臨床。而在骨髓間充質(zhì)干細胞治療腸道方面,國內(nèi)外相關(guān)研究較少,本課題將骨髓間充質(zhì)干細胞治療應(yīng)用于腸功能障礙的大鼠模型,并觀察其在腸道內(nèi)的定植和療效。 研究目的 1、完成雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞分離、培養(yǎng)、鑒定、染色工作。 2、制備腹部開放傷合并海水浸泡的大鼠模型,并完善相關(guān)指標的檢測,證實其存在腸功能障礙,為后續(xù)的骨髓間充質(zhì)干細胞回輸治療和檢測奠定基礎(chǔ)。 3、采用熒光標記和基因標記雙示蹤的方法來觀察回輸?shù)男坌源笫蟮墓撬栝g充質(zhì)干細胞在雌性大鼠致傷腸道內(nèi)的定植,并檢測空腸組織中的丙二醛(malondialdehydeMDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase SOD)含量。 研究方法 1、分離、培養(yǎng)、鑒定、染色雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞。 2、制備腹部開放傷合并海水浸泡致腸功能障礙的雌性大鼠模型,檢測不同時間段空腸組織中的MDA和SOD的含量,制作HE染色病理切片。 3、致傷模型建立后即通過鼠尾靜脈將以CM-DiI染色標記的雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞輸入治療組的雌性大鼠體內(nèi),對照組僅輸入生理鹽水。 4、治療結(jié)束后分別于3天、7天、14天、28天、56天分批取空腸組織,制備冰凍切片在熒光顯微鏡觀察供體細胞在腸道的定植,組織勻漿后行RT-PCR檢測雄性大鼠的性別決定基因(sex determination region Y gene SRY)和MDA和SOD含量。 結(jié)果 1、與正常對照組比較,腹部開放傷合并海水浸泡結(jié)束后1小時至第3天的腸組織中MDA含量呈進行性上升,而SOD含量則出現(xiàn)進行性下降,隨后二者與對照組的差異呈逐漸減小的趨勢,14天后與對照組比較已無明顯差異。 2、雌性大鼠腸組織中SRY的RT-PCR檢測結(jié)果為：3天陽性率為50%,7天陽性率66.6%,14天陽性率33.3%,28天和56天陽性率為16.6%。 3、骨髓間充質(zhì)干細胞治療組第3天和第7天的空腸組織中的MDA、SOD含量較之對照組有統(tǒng)計學差異。 結(jié)論 1、腹部開放傷合并海水浸泡可導致大鼠腸功能障礙。MDA和SOD是反映腸組織氧自由基損傷和抗氧化修復能力較好的指標. 2、移植的雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞可在雌性大鼠致傷腸組織內(nèi)定植,但隨著時間延長,存活細胞數(shù)量逐漸下降。 3、骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療可加速腸道損傷的恢復,其發(fā)揮療效主要是通旁分泌的形式促進機體內(nèi)源性修復,而不是直接分化受損組織細胞。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R574;R457.7
【圖文】：

CM一DII染色后BMSCS(懸浮)義40

CM一Dll染色J而BMSCS(夕!，I}壁)K4OO

1、腸粘膜病理組織學改變:海水浸泡后腸粘膜損傷明顯，HE染色觀察到粘膜厚度和絨毛高度較之正常對照組均有顯著減少，可見較多的淋巴細胞浸潤，絨毛內(nèi)淋巴管和毛細血管擴張。(圖1、2)圖1、正常對照組腸絨毛HEX40可見少量淋巴細胞浸潤，未見小血管擴張。圖2、BZ組模型建立3d后 HEX40腸絨毛水腫，上皮細胞萎縮，淋巴管和毛細血.管擴張，紅細胞聚集。2、C組大鼠空腸組織中MDA和SOD檢測結(jié)果(表l)表l、MDA和SOD含量t匕較萬士，實驗組檢測項目對照組 llhh33hh1122hh2244hh33dd77dd1144dd MDA(nmol/mgPro) SOD(U/mgPro) 1.99均 23236卻41#4.8牡0.49*6.09士0.42*6.78士0一20*7.6肚0.56*2.2肚0.11#2.04均.45 4.32土 0.463.8肚 0.46#2.07士0.18*1.90切.23*1.47士0.13*1.01士0.22*3.91士0.19#4.36士0.43#:與正常對照組比較尸<0.05*:與正常對照組比較尸<0.01從表中可看出，打撈出水后lh被測指標即出現(xiàn)明顯變化，隨著時間推移與對照組的差異進一步明顯，MDA在3d達到變化的峰值

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本文編號：2776229