【摘要】：目的:以C57BL/6J小鼠為研究對象,不同劑量EPA、DHA預(yù)處理后,通過飲水給予葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium,DSS)構(gòu)建潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)動物模型,比較EPA、DHA干預(yù)對小鼠UC的影響。從腸黏膜屏障維護、炎癥通路活化和腸上皮增殖修復(fù)三個方面對EPA、DHA影響小鼠腸炎的機制進行探討,為明確EPA、DHA在UC防治中的應(yīng)用價值提供科學(xué)依據(jù)。方法:8周齡雄性小鼠按照體重隨機分為7組:正常對照組、模型對照組、陽性藥物對照組、DHA低劑量組、DHA高劑量組、EPA低劑量組和EPA高劑量組。DHA、EPA低、高劑量組分別按照100mg/kg?bw、400mg/kg?bw的劑量灌胃給予相應(yīng)脂肪酸,其余三組予以溶劑(10%阿拉伯樹膠溶液)灌胃,干預(yù)一個月。造模開始后,空白對照組全程正常飲水,其余6組通過飲水給予兩周期DSS暴露(第一周期:6日2%DSS飲水+15日正常飲水;第二周期:6日2%DSS飲水+8日正常飲水)以構(gòu)建小鼠UC模型;期間DHA、EPA干預(yù)組繼續(xù)每日脂肪酸干預(yù),正常對照組和模型對照組每日接受溶劑(10%阿拉伯樹膠溶液)灌胃,陽性藥物對照組每日予以500 mg/kg?bw柳氮磺吡啶灌胃。造模期間每日記錄小鼠體重、腹瀉程度及便血情況,計算疾病活動指數(shù)(DAI),動態(tài)評估UC程度。實驗第36日處死小鼠,解剖分離結(jié)腸組織,觀察結(jié)腸長度及水腫程度,HE染色評價腸組織炎性細胞浸潤程度,阿利新藍染色評估腸黏膜杯狀細胞黏液分泌,氣相色譜法檢測腸組織脂肪酸構(gòu)成。蛋白印跡法檢測腸黏膜緊密連接、黏附性連接相關(guān)蛋白及其上游ERK、Akt,Hedgehog通路和黏蛋白TFF3水平;趨化因子MCP-1,炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α,炎性細胞標(biāo)志物F4/80、MPO,炎癥通路NLRP3/IL-1β、IL-6/Stat3、TLR4/NF-κB、TNF-α/NF-κB相關(guān)蛋白水平;增殖相關(guān)Wnt/β-catenin通路蛋白DVL2、p-GSK3β、β-catenin、c-myc、Cyclin-D1、PCNA以及凋亡相關(guān)蛋白p53、Caspase-3水平,以揭示EPA、DHA影響UC作用機制。結(jié)果:EPA、DHA干預(yù)可提高小鼠結(jié)腸EPA、DHA含量。EPA明顯改善DSS所致的小鼠體重丟失,降低DAI評分,減輕DSS所致的結(jié)腸充血、水腫,抑制結(jié)腸組織炎性細胞浸潤,相較之下DHA的效果不明顯。腸黏膜屏障相關(guān)蛋白結(jié)果顯示,EPA明顯抑制Akt、ERK活化,提高Hedgehog通路蛋白SHH、SMO水平,促進緊密連接蛋白Claudin-1、Occludin表達;促進c-myc介導(dǎo)的E-cadherin生成,增強腸上皮細胞黏附性連接,保護腸黏膜機械性屏障。EPA可明顯上調(diào)黏蛋白TFF3表達,增加杯狀細胞數(shù)量、促進黏液分泌,維持腸黏膜黏液屏障完整,相反DHA的作用不明顯。對炎癥相關(guān)蛋白檢測結(jié)果顯示,EPA明顯降低腸上皮趨化因子MCP-1和炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,抑制中性粒細胞和巨噬細胞浸潤(標(biāo)志物MPO、F4/80表達下降),下調(diào)NLRP3/IL-1β、IL-6/Stat3、TLR4/NF-κB、TNF-α/NF-κB炎癥通路蛋白表達。蛋白印跡結(jié)果還顯示,EPA可上調(diào)增殖相關(guān)Wnt/β-catenin通路及下游靶蛋白c-myc、Cyclin-D1、PCNA表達,增加凋亡相關(guān)蛋白p53、Caspase-3水平。結(jié)論:1.EPA顯著抑制DSS誘導(dǎo)的小鼠UC,相較之下,DHA效果不明顯。EPA在UC防治中更具應(yīng)用價值。2.EPA通過抑制Akt、ERK活化,上調(diào)Hedgehog通路,促進緊密連接蛋白表達;促進c-myc介導(dǎo)的黏附性連接蛋白E-cadherin表達,維護腸黏膜機械性屏障的完整性;通過促進TFF3表達,增加杯狀細胞黏液合成,維持腸黏膜黏液屏障。3.EPA抑制DSS誘導(dǎo)的腸上皮炎性細胞浸潤和炎癥因子表達,抑制NLRP3/IL-1β、IL-6/Stat3、TLR4/NF-κB、TNF-α/NF-κB炎癥通路活化。4.EPA通過增強細胞凋亡,上調(diào)Wnt/β-catenin通路蛋白表達,促進損傷細胞的清除和腸上皮的再生修復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R574.62

【參考文獻】

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1 陳凡;林琳;張紅杰;葉曉霞;趙偉志;王濤;楊希寧;;潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸黏膜修復(fù)中HGF,c-Met,EGFR的作用[J];世界華人消化雜志;2006年06期

本文編號：2776057