發(fā)布時(shí)間：2020-07-30 19:08

【摘要】： 本研究旨在探討原發(fā)性膽汁性肝硬化中T細(xì)胞microRNA(miRNA)表達(dá)譜及其調(diào)控機(jī)制。首先采用芯片和定量PCR技術(shù)分析并驗(yàn)證原發(fā)性膽汁性肝硬化中T細(xì)胞miRNA的表達(dá)譜;然后培養(yǎng)自身抗原PDC-E2特異性T細(xì)胞,研究特定miRNA對(duì)其自身反應(yīng)性的調(diào)控作用;接著建立原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型,研究特定miRNA對(duì)小鼠PBC樣病變的調(diào)控作用;最后通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和生物學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,探討特定miRNA可能的靶基因及其作用位點(diǎn)。結(jié)果表明,與正常對(duì)照組相比,PBC患者T細(xì)胞中有23個(gè)miRNA低表達(dá),僅有2個(gè)miRNA高表達(dá);miR-1et-7b、miR-17-5p、miR-20a和miR-346表達(dá)可抑制自身抗原特異性T細(xì)胞增殖和IFN-γ、TNF-α的分泌,而miR-129和miR-451可促進(jìn)細(xì)胞增殖和IFN-γ、TNF-α的分泌;在小鼠中輸入Ad-miR-17-5p或Ad-miR-346可延緩由poly I:C誘發(fā)產(chǎn)生的PBC樣病變;miR-17-5p、miR-346的靶基因分別為T(mén)NFRSF21、BCL-6,作用位點(diǎn)分別為T(mén)NFRSF21 3'UTR區(qū)335-342位和BCL-63'UTR區(qū)576-583及893-900位。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R575.2
【圖文】：

A.分離后T細(xì)胞;B.分離洗脫液中T細(xì)胞PBMC經(jīng)過(guò)磁珠分離得到的CD3+T細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)純度達(dá)到96.3%。如圖1一1所示，經(jīng)磁珠分離后T細(xì)胞純度達(dá)到963%，分離洗脫液中T細(xì)胞僅占0.3%，經(jīng)磁珠分離所得到的T細(xì)胞完全符合后續(xù)的實(shí)驗(yàn)要求。 3.2RNA的純度與濃度

%瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA的完整性

T細(xì)胞miRNA芯片雜交后的掃描圖像

【引證文獻(xiàn)】

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1 劉曉;胡志德;鄧安梅;仲人前;;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者單核細(xì)胞內(nèi)miR-302e表達(dá)降低及意義[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年02期

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1 唐裕杰;Micro RNA對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化患者來(lái)源Th17細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2775957