【摘要】：第1章肝螺桿菌感染不同品系實(shí)驗(yàn)室小鼠模型的建立及其特征分析 目的：應(yīng)用H.hepaticus標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC51450感染不同品系實(shí)驗(yàn)室小鼠，觀察H.hepaticus在不同消化道組織的定植狀況及其病理特征，建立穩(wěn)定的H.hepaticus感染實(shí)驗(yàn)室小鼠模型。 方法：選取已經(jīng)證實(shí)無(wú)H.hepaticus感染的SPF級(jí)雄性BALB/cCr、SCID/Cr、 C57BL/6Cr小鼠各30只口服灌飼H.hepaticus標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC51450菌液0.2毫升（1×108CUF/ml），連續(xù)3次，每次間隔48小時(shí)，對(duì)照組灌飼等量的PBS。于末次接種H.hepaticus后第1、3、6、9、12個(gè)月時(shí)，禁食12h后處死小鼠，每組5只。眼球取血后應(yīng)用ELISA法檢測(cè)血清H.hepaticus-IgG抗體水平；分別取小鼠食管、胃、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、肝臟及胰腺組織，行病理組織學(xué)檢查、微需氧菌分離培養(yǎng)鑒定及H.hepaticus特異性16SrRNA基因擴(kuò)增。 結(jié)果：BALB/cCr小鼠血清H.hepaticus-IgG抗體檢出率最高，從感染后1個(gè)月至感染后12個(gè)月，在每間隔3個(gè)月的分析中，檢出率均為100%；C57BL/6Cr小鼠血清H.hepaticus-IgG抗體檢出率在40~60%之間；在SCID/Cr小鼠血清中無(wú)論是感染后的1個(gè)月，還是至12個(gè)月均未檢測(cè)出H.hepaticus-IgG抗體。無(wú)論是BALB/cCr小鼠還是C57BL/6Cr小鼠，H.hepaticus-IgG抗體水平均在感染后6個(gè)月達(dá)最高峰，以后逐漸下降。BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后1個(gè)月時(shí)盲腸定植率為80%，此后持續(xù)在盲腸定植，從3至12個(gè)月盲腸定植率均為100%，此外在結(jié)腸、回腸以及空腸亦有不同程度的定植，定植率不超過(guò)60%；BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠自H.hepaticus感染后3個(gè)月起可在肝組織中發(fā)現(xiàn)H.hepaticus定植，BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠肝臟定植率均在20~40%之間。而C57BL/6Cr小鼠H.hepaticus感染后1至12個(gè)月盲腸、結(jié)腸、回腸、空腸亦有不同程度的定植，但定植率低于BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠；C57BL/6Cr小鼠僅在H.hepaticus感染后6個(gè)月時(shí)有1只小鼠肝組織中發(fā)現(xiàn)H.hepaticus定植，定植率為20%。H.hepaticus感染各品系小鼠胃、食管及胰腺組織和各PBS對(duì)照組小鼠的不同消化道組織中均未發(fā)現(xiàn)H.hepaticus的定植。各品系小鼠H.hepaticus感染后不同消化道組織H.hepaticus特異性16SrRNA基因陽(yáng)性率高于定植率；H.hepaticus感染的BALB/cCr和SCID/Cr小鼠肝臟、盲腸及結(jié)腸病理組織學(xué)評(píng)分明顯高于C57BL/6Cr小鼠（P＜0.01），BALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后6個(gè)月內(nèi)隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)肝臟病理組織學(xué)評(píng)分逐漸增加（P＜0.05；P＜0.01），6個(gè)月至12個(gè)月肝臟病理組織學(xué)評(píng)分有加重的趨勢(shì)，但無(wú)明顯差異；而B(niǎo)ALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后3個(gè)月盲腸及結(jié)腸病理組織學(xué)評(píng)分明顯高于1個(gè)月時(shí)的組織學(xué)評(píng)分（P＜0.05；P＜0.01），3至12個(gè)月盲腸及結(jié)腸病理組織學(xué)評(píng)分無(wú)明顯差異。 結(jié)論：H.hepaticus感染在小鼠消化道的定植部位為下消化道及肝臟，盲腸是其起始的定植部位；BALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后肝臟、盲腸及結(jié)腸病理組織學(xué)改變較C57BL/6Cr小鼠更為明顯，病理組織學(xué)改變隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸加重；不同品系小鼠對(duì)H.hepaticus的易感性不同，BALB/cCr、SCID/Cr小鼠接種H.hepaticus后可獲得較好的H.hepaticus感染小鼠模型。 第2章慢性乙型病毒性肝炎患者血清肝螺桿菌抗體陽(yáng)性率分析 目的：通過(guò)對(duì)慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率進(jìn)行調(diào)查，探討H.hepaticus感染在慢性乙型病毒性肝炎發(fā)生發(fā)展中可能的致病作用。 方法：采用病例對(duì)照研究方法對(duì)356例慢性乙型病毒性肝炎患者H.pylori抗原完全吸收前后血清H.hepaticus-IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，分析血清H.hepaticu-IgG抗體陽(yáng)性率與年齡、性別、HBV載量及病程等因素之間的關(guān)系。對(duì)照組為同期性別和年齡相匹配的312例健康體檢者。 結(jié)果：吸收試驗(yàn)前慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率明顯高于健康體檢者（P＜0.05）；H.pylori抗原吸收試驗(yàn)后慢性乙型病毒性肝炎患者及健康體檢者血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率較吸收試驗(yàn)前明顯下降，但慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率仍高于健康體檢者（P＜0.05）。慢性乙型病毒性肝炎患者及健康體檢者在不同性別及不同年齡組之間血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率無(wú)明顯差異（P＞0.05）；慢性乙型病毒性肝炎患者在不同HBV載量組之間血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率無(wú)明顯差異（P＞0.05）。隨著乙型肝炎肝硬化患者Child-Pugh分級(jí)的增高其血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率增加（P0.05）。 結(jié)論：慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率增高，且隨著乙型肝炎肝硬化患者Child-Pugh分級(jí)的增高其血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率增加；慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗體陽(yáng)性率與年齡、性別及不同HBV載量之間無(wú)明顯關(guān)系；H.hepaticus感染可能與慢性乙型肝炎的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。 第3章細(xì)胞致死性膨脹毒素在肝螺桿菌感染不同品系實(shí)驗(yàn)室小鼠慢性肝損傷中致病作用探討 目的：應(yīng)用H.hepaticus標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC51450感染不同品系實(shí)驗(yàn)室小鼠，觀察細(xì)胞致死性膨脹毒素在H.hepaticus誘導(dǎo)的肝臟病理?yè)p傷中的致病作用。 方法：選取已經(jīng)證實(shí)無(wú)H.hepaticus感染的SPF級(jí)雄性BALB/cCr、SCID/Cr及C57BL/6Cr小鼠各30只，口服灌飼H.hepaticus標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC51450菌液0.2毫升（1×108CUF/ml），連續(xù)3次，每次間隔48小時(shí)。于最后一次接種H.hepaticus后1、3、6、9、12個(gè)月時(shí)，禁食12h后處死小鼠，每組5只。隨機(jī)留取各組小鼠的肝臟組織分為2份，分別行H.hepaticuscdtB基因擴(kuò)增并測(cè)序及病理組織學(xué)檢查。 結(jié)果：BALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后3個(gè)月時(shí)肝組織中擴(kuò)增出cdtB基因，BALB/cCr小鼠肝組織cdtB基因陽(yáng)性率為11/25（44%）；SCID/Cr小鼠肝組織cdtB基因陽(yáng)性率為12/25（48%）；C57BL/6Cr小鼠H.hepaticus感染后肝組織cdtB基因陽(yáng)性率僅為3/25（12%）。cdtB基因目的片段約為193bp，PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果與genebank上H.hepaticusATCC51449cdtB基因序列比較同源性為99%；BALB/cCr、SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后cdtB基因陽(yáng)性者的肝臟病理組織評(píng)分明顯高于cdtB基因陰性者（P＜0.01）。 結(jié)論：H.hepaticus感染不同品系小鼠肝組織中不同程度地?cái)U(kuò)增出H.hepaticus cdtB基因， CDT作為H.hepaticus分泌的一種毒素，可能在H.hepaticus誘導(dǎo)的慢性肝損傷中發(fā)揮一定的致病作用。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R512.62

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