【摘要】：研究目的 腸易激綜合征(irritable bowel syndrome, IBS)是常見(jiàn)的功能性腸道疾病,嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量。迄今為止,其發(fā)病機(jī)制尚未闡明。目前認(rèn)為IBS發(fā)病可能與腸道動(dòng)力異常、內(nèi)臟感覺(jué)異常、黏膜微炎癥、感染、神經(jīng)-內(nèi)分泌調(diào)控異常、遺傳、飲食不耐受等多種因素相關(guān),其中胃腸動(dòng)力和內(nèi)臟感覺(jué)的異常被認(rèn)為是IBS發(fā)病的主要病理生理學(xué)基礎(chǔ)。蛋白酶激活受體(protease-activated receptors, PARs)屬于與G蛋白相偶聯(lián)、有七個(gè)跨膜單位的受體家族,包括4個(gè)亞型。PARs在體內(nèi)分布較廣泛,尤其是胃腸道,被激活后可產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng),參與調(diào)控胃腸道平滑肌運(yùn)動(dòng)、胃腸感覺(jué)及黏膜炎癥等多種功能,其在功能性胃腸病發(fā)病過(guò)程中的作用近年來(lái)倍受關(guān)注。然而,當(dāng)前大部分實(shí)驗(yàn)多應(yīng)用于動(dòng)物模型,在人體上的研究相對(duì)較少。因此,本研究通過(guò)觀察蛋白酶激活受體超家族在IBS患者結(jié)腸黏膜中的表達(dá)變化,從而進(jìn)一步探討PARs在IBS疾病過(guò)程中的可能作用。 研究方法 研究對(duì)象選自上海長(zhǎng)海醫(yī)院消化內(nèi)科門(mén)診及住院人群。(1)正常組：選取18例健康者作為正常對(duì)照,平均年齡為53.11±13.65歲,其中男性14人,女性4人。所有健康受試者均無(wú)胃腸道疾病病史及臨床癥狀。(2)腹瀉型腸易激綜合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome, D-IBS)組：按照羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)入選28例D-IBS患者作為研究對(duì)象,平均年齡為49.044±13.73歲,其中男性15人,女性13人。(3)便秘型腸易激綜合征(constipation-predominant irritable bowel syndrome, C-IB S)組：按照羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)入選12例C-IBS患者作為研究對(duì)象,平均年齡為51.08±±10.11歲,其中男性5人,女性7人。三組人群在年齡及性別上無(wú)差別。三組均無(wú)明顯陽(yáng)性體征,常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查及輔助檢查排除器質(zhì)性疾病,行結(jié)腸鏡檢查均顯示未見(jiàn)明顯異常,并于乙狀結(jié)腸與直腸連接部乙狀結(jié)腸側(cè)鉗取結(jié)腸黏膜組織,應(yīng)用蛋白印跡法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)蛋白酶激活受體超家族的表達(dá)變化。 結(jié)果 采用蛋白印跡方法,PAR2及PAR4在D-IBS患者的結(jié)腸黏膜中的表達(dá)與正常組相比均明顯增加,其灰度值分別為(0.99±0.67 vs 0.63±0.38,P=0.038；0.37±0.14 vs0.25±0.11,P=0.013)；同時(shí),實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果與蛋白印跡方法的結(jié)果相一致(5.71±2.54 vs 4.15±1.87,P=0.040；5.51±2.27 vs 3.77±2.06,P=0.031)。然而,兩種方法的檢測(cè)結(jié)果均顯示,D-IBS患者組與正常對(duì)照組相比,結(jié)腸黏膜中PAR1的表達(dá)在兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.83±0.27 vs 0.72±0.36,P=0.300；6.70±2.37 vs6.00±2.65,P=0.514)。此外,PAR2蛋白以及PAR4基因在D-IBS組和C-IBS組中的表達(dá)無(wú)明顯差異(0.08±0.07 vs 0.07±0.06,P=0.908；3.28±0.95 vs 2.14±0.62,P=0.204)。 結(jié)論 PARs的表達(dá),尤其是PAR2、PAR4,在IBS患者的結(jié)腸黏膜中明顯增高,提示其可能在IBS疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮某些作用,與患者的某些癥狀如腹痛、腹脹等密切相關(guān)。因此,PARs有可能成為IBS新的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R574
【圖文】：

(三 )westernblot示PARZ在D一IBS與C一IBS組表達(dá)無(wú)差異D一xBS與C一xBS組患者乙狀結(jié)腸勃膜總蛋白被提取，行 westernblotting檢測(cè)。內(nèi)參選擇GAPDH。兩組在55kd處可見(jiàn)特異性的蛋白條帶(圖1一7)。使用ImageJ1410圖像分析軟件對(duì)條帶的灰度值進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，D一IBS與C一IBS組患者的結(jié)腸勃膜均可見(jiàn)PARZ的蛋白表達(dá)，其在D一IBS患者結(jié)腸勃膜中的表達(dá)相對(duì)灰度值為0.08士0.07，而C一IBS組為0.07士0.06，兩組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸=0.908)(圖l一8)。

喇肉憋卿拐翔常，繃腳洋徽攀37KD圖2一l兩組結(jié)腸勃膜PAR4的蛋白表達(dá)01勻月nU.二Od<口O利PeN一一eLU﨑OUuo一ssa﨎xad比寸d<a>一祠.一a比!BSContro!圖2一2兩組結(jié)腸勃膜隊(duì)R4的蛋白表達(dá)變化，與正常組相比*尸二0.013(二)westernb一ot示甩RI在D一IBS結(jié)腸的表達(dá)無(wú)顯著增高D一IBs患者乙狀結(jié)腸勃膜總蛋白被提取，行 westembtotting檢測(cè)。內(nèi)參選擇GAPDH。兩組在66kd處可見(jiàn)特異性的蛋白條帶(圖2一3)。使用 ImagcJ1.410圖像分析軟件對(duì)條帶的灰度值進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，正常組和D一IBS患者的結(jié)腸勃膜均可見(jiàn)PARI的蛋白表達(dá)，其在D一IBS患者結(jié)腸勃膜中的表達(dá)相對(duì)灰度值為0.83士

66KDGAPDH37KD圖2一3兩組結(jié)腸勃膜PARI的蛋白表達(dá)n

本文編號(hào)：2753887