【摘要】：研究背景炎癥性腸病(IBD)的發(fā)病率成逐年上升的趨勢,其確切發(fā)病機制目前為止仍不是十分清楚。除與個體生物的遺傳易感性密切相關之外,還有可能受到腸道菌群失調、免疫調節(jié)失衡或是腸組織炎性損傷等多種因素的綜合影響。尤其是脾臟中的T淋巴細胞和腸組織巨噬細胞在IBD的發(fā)病過程中起到關鍵作用。丁酸鹽作為腸黏膜益生菌代謝產物短鏈脂肪酸中重要的一種,不僅可以在腸腔內提供能量和營養(yǎng)物質,還可以對整個腸道起到很好的調節(jié)和保護作用。但丁酸鹽在調節(jié)IBD具體發(fā)病機制以及對IBD進行保護和治療等方面目前為止研究較少,因此更加值得對此進行深入研究。目的本實驗用TNBS誘導的BALB/c小鼠建立起可以模擬人類IBD發(fā)病機制的結腸炎模型,并在建模過程中同時給予丁酸鹽溶液和等量的丁酸梭菌菌液進行灌胃,從而對丁酸鹽是否調節(jié)了結腸炎小鼠脾臟組織中Th1/Th2的免疫平衡,以及是否抑制了腸道內中性粒細胞的增殖和M1/M2型巨噬細胞的平衡等進行了初步研究。之后進一步對丁酸鹽是否調節(jié)了脾臟組織中PD-1/PD-L1信號途徑進行了深入研究,更加說明了丁酸鹽在結腸炎小鼠中具有一定的調節(jié)和保護作用,同時也為IBD在臨床上的治療和應用提供新的方法與依據(jù)。方法將60只雄性BALB/c小鼠隨機分為(1)正常對照組、(2)TNBS模型組、(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組四組。飼養(yǎng)過程中對各組小鼠進行體重、死亡率等一般狀況的檢查并進行DAI評分,三周后處死全部小鼠并對各組小鼠結腸組織進行HE染色和HI評分比較。之后用ELISA試劑盒檢測各組小鼠腸組織MPO的表達水平和血清內IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β和IL-10的濃度。并在各組小鼠脾臟組織中用Western Blot方法檢測Foxp3蛋白的表達以及用qPCR方法檢測PD-1和PD-L1的mRNA表達量。最后在各組小鼠結腸組織中用免疫組化方法檢測CD86和CD206的表達情況和ELISA方法檢測趨化因子受體和配體CCL2、CCR2、CCL17和CX3CR1的表達量。本實驗的所有數(shù)據(jù)均用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行處理。計量數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標準差(x±s)的方式表示,多組數(shù)據(jù)間采用單因素方差分析方法,方差分析有意義時再進一步用LSD-t檢驗進行兩兩比較。對各組免疫組化結果的比較采用卡方檢驗。檢驗水準為α=0.05,p0.05時認為具有統(tǒng)計學意義。結果(1)正常對照組小鼠一般狀況良好,體重輕度增加,無死亡現(xiàn)象并且DAI評分和HI評分均在正常范圍內。(2)TNBS模型組與(1)正常對照組小鼠相比一般狀況較差,死亡率有所增高體重也有所減輕,并且DAI和HI評分也出現(xiàn)升高。而(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比其一般狀況、體重和死亡率等指標均有所緩解,DAI評分和HI評分也相對降低。差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。與(1)正常對照組小鼠相比,(2)TNBS模型組腸組織MPO的ELISA值有所升高,血清內IFN-γ和IL-17的ELISA值升高,而TGF-β和IL-10的ELISA值有所降低。(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比腸組織MPO的ELISA值有所恢復,血清內IFN-γ和IL-17的ELISA值相對降低,并且TGF-β和IL-10的ELISA值同樣有所回升。差別具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。但是四組小鼠血清內IL-4的ELISA值比較沒有較大差別(p0.05)。(2)TNBS模型組與(1)正常對照組小鼠相比,脾臟組織中Foxp3的表達量有所降低,并且PD-1和PD-L1的mRNA表達量也相應降低。而(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比脾臟組織中Foxp3的表達相對增高,并且PD-1和PD-L1的mRNA表達量也有所回升。差別具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(2)TNBS模型組與(1)正常對照組小鼠相比,結腸組織內CD86的免疫組化表達量有所增加,CD206的免疫組化表達量相對降低。腸組織CCL2和CCR2的ELISA值均出現(xiàn)增高并且CCL17和CX3CR1的ELISA值均有所降低。而(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比CD86的免疫組化表達量相對減少,CD206的免疫組化表達量出現(xiàn)回升。并且腸組織CCL2和CCR2的ELISA值出現(xiàn)降低,CCL17和CX3CR1的ELISA值相對增高。差別具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論1.丁酸鹽既可以初步改善結腸炎小鼠中的臨床表現(xiàn)和基本病理情況,還可以改善和調節(jié)脾臟組織中Treg細胞的數(shù)量和相應的免疫平衡,同時抑制結腸組織內中性粒細胞的增殖和巨噬細胞分型的失衡。2.丁酸鹽可以通過誘導脾臟組織中PD-1/PD-L1信號通路的方式從而促進了Treg細胞的增殖。并可以在結腸組織中通過抑制巨噬細胞表面趨化因子受體和配體表達量的方式從而對結腸組織中M1/M2型巨噬細胞數(shù)量的平衡進行調節(jié)。3.丁酸梭菌作為腸道內重要益生菌中的一種,也可以在TNBS誘導的結腸炎小鼠模型中起到與上述丁酸鹽相類似的保護調節(jié)作用。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R574.62
【圖文】：

各組小鼠的平均體重曲線（g/天）

各組結腸組織HE染色結果（×100）

【參考文獻】

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1 Ling Zhang;Lingling Zhang;Xiu'an Zhan;Xinfu Zeng;Lin Zhou;Guangtian Cao;An'guo Chen;Caimei Yang;;Effects of dietary supplementation of probiotic,Clostridium butyricum,on growth performance,immune response,intestinal barrier function,and digestive enzyme activity in broiler chickens challenged with Escherichia coli K88[J];Journal of Animal Science and Biotechnology;2016年01期

2 Fang-Yan Wang;Jia-Ming Liu;Hai-Hua Luo;Ai-Hua Liu;Yong Jiang;;Potential protective effects of Clostridium butyricum on experimental gastric ulcers in mice[J];World Journal of Gastroenterology;2015年27期

3 Yasushi Yoshimatsu;Akihiro Yamada;Ryuichi Furukawa;Koji Sono;Aisaku Osamura;Kentaro Nakamura;Hiroshi Aoki;Yukiko Tsuda;Nobuo Hosoe;Nobuo Takada;Yasuo Suzuki;;Effectiveness of probiotic therapy for the prevention of relapse in patients with inactive ulcerative colitis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年19期

4 Gian Eugenio Tontini;Maurizio Vecchi;Luca Pastorelli;Markus F Neurath;Helmut Neumann;;Differential diagnosis in inflammatory bowel disease colitis:State of the art and future perspectives[J];World Journal of Gastroenterology;2015年01期

5 Lili Magyari;Erzsebet Kovesdi;Patricia Sarlos;Andras Javorhazy;Katalin Sumegi;Bela Melegh;;Interleukin and interleukin receptor gene polymorphisms in inflammatory bowel diseases susceptibility[J];World Journal of Gastroenterology;2014年12期

6 Roberto Berni Canani;Margherita Di Costanzo;Ludovica Leone;Monica Pedata;Rosaria Meli;Antonio Calignano;;Potential beneficial effects of butyrate in intestinal and extraintestinal diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2011年12期

7 Man-Chin Hua;Tzou-Yien Lin;Chien-Chang Chen;;Probiotic Bio-Three induces Th1 and anti-inflammatory effects in PBMC and dendritic cells[J];World Journal of Gastroenterology;2010年28期

8 Tomas T Ding;;Therapeutic effects of Clostridium butyricum on experimental colitis induced by oxazolone in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2009年15期

9 Sofia Tedelind;Fredrik Westberg;Martin Kjerrulf;Alexander Vidal;;Anti-inflammatory properties of the short-chain fatty acids acetate and propionate:A study with relevance to inflammatory bowel disease[J];World Journal of Gastroenterology;2007年20期

本文編號：2742889