【摘要】：目的采用質(zhì)粒示蹤技術(shù)觀察ANP大鼠不同時點腸黏膜損傷細菌易位,探討腸黏膜損傷與細菌易位的相關(guān)性,為SAP腸源性感染評估及其防治提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。 方法健康SD大鼠n=70,隨機(抽簽法)分成2組:ANP組(實驗組,A組),n=40;SO組(假手術(shù)組,S組),n=30。A、S組大鼠再分別按3h、6h、12h、24h、36h時點隨機分成5個亞組,A組大鼠各亞組n=8,S組大鼠各亞組n=6。A、S兩組大鼠喂飼示蹤菌PUC18質(zhì)粒大腸桿DH-5α每天1次(10 ml/kg)×2d,于喂飼示蹤菌第2天開始采集糞便標(biāo)本×3d。將每次采集的糞便標(biāo)本置放于含100μg/L氨芐青霉素的LB瓊脂培養(yǎng)皿上培養(yǎng),觀察有耐藥菌生長后即行細菌擴增、質(zhì)粒提取、酶切及酶切產(chǎn)物電泳。細菌擴增質(zhì)粒提取酶切產(chǎn)物與示蹤質(zhì)粒PUC18酶切產(chǎn)物電泳條帶相同證實示蹤菌已定植。確認示蹤菌定植后,A組大鼠逆行胰膽管勻速泵入5%牛磺膽酸鈉(0.1ml/100g,0.2ml/min)建立ANP模型,S組大鼠開腹僅翻動十二指腸建立SO模型。兩組大鼠均在建模后按3h、6h、12h、24h、36h時點門靜脈取血檢測血AMY、Ca~(2+)、DAO、ET濃度;觀察腹腔大體情況;切取小腸和胰腺組織HE染色行組織病理學(xué)檢查并行組織病理學(xué)評分;腸系膜淋巴結(jié)、腹水、門脈血、胰腺組織進行細菌培養(yǎng)及示蹤菌的鑒定。 結(jié)果(1)腹腔大體觀察:A組大鼠隨時點延長出現(xiàn)胰腺點片狀出血、壞死,大片皂化斑,血性、淡紅色腹水,胃腸脹氣、擴張;S組大鼠各時點均未見上述改變。 (2)血AMY:A、S組大鼠比較:A組大鼠各時點血AMY濃度均高于S組各時點, P0.05。A組大鼠組間各時點比較:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h,P0.05;②A6h低于A12h、A36h, P0.05,A6h低于A24h,P0.05;③A12h低于A24h、A36h,P0.05;④A24h高于A36h,P0.05。S組大鼠組間各時點比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。 (3)血Ca~(2+):A、S組大鼠比較:A組大鼠各時點血Ca~(2+)濃度均低于S組各時點,P0.05。A組大鼠組間各時點比較:①A3h高于A6h,P0.05,A3h高于A12h、A24h、A36h,P0.05;②A6h高于A12h,P0.05,A6h高于A24h、A36h,P0.05;③A12h高于A24h、A36h,P0.05;④A24h高于A36h,P0.05。S組大鼠組間各時點比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。 (4)胰腺組織病理學(xué)檢查(HE染色):A組大鼠:①A3h:胰腺組織輕度水腫,腺泡細胞輕度腫脹,點狀出血,少量炎癥細胞浸潤,腺葉結(jié)構(gòu)正常;②A6h:胰腺組織中度水腫,腺泡細胞腫脹明顯,片狀出血,較多炎癥細胞浸潤,腺葉結(jié)構(gòu)輪廓尚清晰;③A12h:胰腺組織水腫明顯,腺泡細胞腫脹明顯,片狀出血及少量壞死,大量炎癥細胞浸潤,部分腺葉正常結(jié)構(gòu)消失;④A24h:胰腺組織水腫、出血及壞死明顯,大量炎癥細胞浸潤,大部分腺葉正常結(jié)構(gòu)消失;⑤A36h:胰腺組織大部分出血及壞死,大量炎癥細胞浸潤,腺葉正常結(jié)構(gòu)基本消失。S組大鼠:胰腺組織未見上述病理改變。 (5)小腸組織病理學(xué)檢查(HE染色):A組大鼠:①A3h:腸絨毛排列整齊,輕度水腫,無頂部上皮細胞脫落,腸上皮下間隙正常,少量炎性細胞浸潤;②A6h:腸絨毛中度水腫,頂部上皮細胞一部分脫落,腸上皮下間隙擴大,較多炎性細胞浸潤;③A12h:腸絨毛排列不整齊,水腫明顯,頂部上皮細胞部分脫落,腸上皮下間隙擴大,大量炎性細胞浸潤;④A24h:腸絨毛頂部上皮細胞大量壞死脫落,腸上皮下間隙明顯擴大,大量炎性細胞侵潤;⑤A36h:腸絨毛變短,排列不規(guī)則并兩兩融合,頂部上皮細胞大量壞死脫落、局灶性潰瘍,腸上皮下間隙明顯擴大,大量炎性細胞浸潤。S組大鼠:小腸組織未見上述病理改變。 (6)胰腺組織病理學(xué)評分:A、S組大鼠比較:A組大鼠各時點評分均高于S組相應(yīng)時點, P0.05。A組大鼠組間各時點比較:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h、A24h、A36h ,P0.05;③A12h低于A24h、A36h ,P0.05;④A24h低于A36h ,P0.05。S組大鼠組間各時點比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,P 0.05。 (7)小腸組織病理學(xué)評分: A、S組大鼠比較:①A3h高于S3h, P0.05;②A6h、A12h、A24h、A36h均高于S組相應(yīng)各時點,P0.05。A組大鼠組間各時點比較:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h、A24h、A36h ,P0.05;③A12h低于A24h、A36h ,P0.05;④A24h低于A36h , P0.05。S組大鼠組間各時點比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,P0.05。 (8)血DAO濃度:A、S組大鼠比較:A3h高于S3h,P 0.05;A6h、A12h、A24h、A36h均高于S組同時點,P0.05。A組大鼠組間各時點比較:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h, P0.05,A6h低于A24h、A36h ,P0.05;③A12h低于A24h、A36h ,P0.05;④A24h低于A36h , P0.05。S組大鼠組間各時點比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,P 0.05。 (9)血ET濃度:A、S組大鼠比較:A3h高于S3h,P 0.05;A6h、A12h、A24h、A36h均高于S組同時點,P0.05。A組大鼠組間各時點比較:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h、A24h、A36h,P0.05;③A12h低于A24h、A36h,P0.05;④A24h低于A36h,P0.05。S組大鼠組間各時點比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,P 0.05。 (10)細菌培養(yǎng):A3h腸系膜淋巴結(jié)、腹水、門脈血、胰腺組織細菌培養(yǎng)均呈陰性結(jié)果;A6h腸系膜淋巴結(jié)細菌培養(yǎng)陽性,腹水、門脈血、胰腺組織培養(yǎng)為陰性;A12h腸系膜淋巴結(jié)、腹水細菌培養(yǎng)陽性,門脈血、胰腺組織培養(yǎng)為陰性;A24h、A36h腸系膜淋巴結(jié)、腹水、門脈血、胰腺組織細菌培養(yǎng)均呈陽性。S組大鼠各時點腸系膜淋巴結(jié)、腹水、門脈血、胰腺組織細菌培養(yǎng)均呈陰性。A組大鼠組間各時點腸系膜淋巴結(jié)、腹水、門脈血、胰腺組織細菌培養(yǎng)總陽性率比較:①A6h低于A12h,無顯著性差異,A6h低于A24h、A36h,有顯著性差異;②A12h低于A24h,無顯著性差異,A12h低于A36h,有顯著性差異;③A24h低于A36h,無顯著性差異。 (11)相關(guān)性分析:①A組大鼠胰腺組織病理學(xué)評分與小腸組織病理學(xué)評分呈正相關(guān)關(guān)系,P0.05;②A組大鼠血漿DAO濃度與小腸組織病理學(xué)評分呈正相關(guān)關(guān)系,P0.05;③A組大鼠血漿ET濃度與小腸組織病理學(xué)評分呈正相關(guān)系, P0.05;④A組大鼠血漿DAO濃度與血漿ET濃度呈正相關(guān)關(guān)系,P0.05。 結(jié)論(1)大鼠ANP成模后6h出現(xiàn)腸黏膜損傷,損傷程度隨時點延長加重,細菌易位率隨時點延長升高。 (2)大鼠ANP成模后6h腸系膜淋巴結(jié)檢出示蹤菌,早于腹水及門脈血示蹤菌檢出時間。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R576
【圖文】：

12h 4/8 3/8 0/8 0/8 32 21.875c24h 6/8 5/8 4/8 2/8 32 53.125d36h 8/8 6/8 6/8 5/8 32 78.1253h 0/8 0/8 0/8 0/8 24 06h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 012h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 024h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 036h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 0A3h細菌培養(yǎng)陰性；)與A12h比較，P>0.00714； 2) 與A24h比較，P<0.00714；) 與A36h比較，P<0.00714；)與 A 24h 比較，P>0.00714；2) 與 A36h 比較,P<0.00714；)與 A36h 比較，P>0.00714；關(guān)性分析A 組大鼠胰腺組織病理學(xué)評分與小腸組織病理學(xué)評分進行相關(guān)性分析，呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r=0.805， P<0.05。［圖 7］

.3 A 組大鼠血漿 ET 濃度與小腸組織病理學(xué)評分進行相關(guān)分析，呈正相，相關(guān)系數(shù) r=0.913，P<0.05。［圖 9］圖 8ANP 組大鼠血漿 DAO 濃度與小腸組織病理學(xué)評分散點圖

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 黃碩;清胰湯對急性壞死性胰腺炎大鼠胃排空和小腸推進率的影響[D];南華大學(xué);2012年

本文編號：2741379