【摘要】：目的:探討O-GlcNAc糖基化及OGA在非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝臟脂肪代謝的作用機制。方法:1.免疫組化檢測NAFLD標本中O-GlcNAc的表達,建立NAFLD細胞模型,Western Blot檢測OGA和O-GlcNAc的表達。2.以過表達OGA的慢病毒轉染L0_2細胞,獲得過表達OGA的L0_2細胞;以OGA抑制劑PUGNAc作用L0_2細胞,獲得低表達OGA的L0_2細胞;油紅o染色檢測OA刺激的各組細胞模型的脂肪生成能力,qRT-PCR及Western Blot檢測SREBP1c及脂肪合成酶ACC1、FASN、SCD1的表達。3.免疫共沉淀和放線菌酮(cycloheximide,CHX)實驗探究過表達OGA的L0_2細胞模型中OGA對SREBP1的調控作用。結果:1.20例健康對照組肝臟中,13例標本O-GlcNAc為弱表達,7例標本為強表達,60例NAFLD患者肝臟脂肪變中,11例標本O-GlcNAc為弱表達,49例標本為強表達。Spearman相關性分析r=0.441,P0.01,NAFLD細胞模型中,OGA、OGT蛋白和O-GlcNAc水平上升。均提示O-GlcNAc表達與NAFLD的脂肪代謝呈正相關。2.OGA過表達后L0_2細胞脂肪合成減少,OGA抑制后L0_2細胞脂肪合成增加。OGA過表達后L0_2細胞SREBP1c表達和脂肪合成酶ACC1、FASN、SCD1表達水平均下降,OGA抑制后L0_2細胞OGA、OGT、O-GlcNAc、SREBP1c表達和脂肪合成酶ACC1、FASN、SCD1表達水平均升高。3.免疫共沉淀結果提示OGA和SREBP1有相互作用,OGA過表達后,SREBP1糖基化水平降低;CHX實驗顯示,OGA過表達細胞中SREBP1c蛋白在8h降解,提示OGA影響SREBP1c蛋白穩(wěn)定性。結論:O-GlcNAc糖基化與NAFLD疾病相關,其去糖酶OGA可以通過減少SREBP1c表達降低肝臟脂肪合成代謝。
【學位授予單位】：西安醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R575

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本文編號：2736192