【摘要】：非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已超越慢性病毒性肝炎成為我國的第一大肝臟疾病,嚴(yán)重危害人類健康。從起初的簡單脂肪性病變,發(fā)展為脂肪性肝炎,隨著病情程度加深,逐漸出現(xiàn)肝臟的纖維化,最終導(dǎo)致肝硬化,以及肝癌的發(fā)生。非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)患者有高達(dá)20%幾率演變?yōu)楦斡不�。目�?臨床尚缺乏針對性的有效治療措施。揭示NASH的發(fā)病機(jī)制,發(fā)現(xiàn)治療的靶點(diǎn),將大大促進(jìn)該病的防治。蛋氨酸-膽堿缺乏飲食(methionine and choline deficient diet,MCD)模型,是研究NASH的經(jīng)典動物模型。飼料中缺乏蛋氨酸和膽堿可導(dǎo)致肝內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)甘油三酯的極低密度脂蛋白合成受阻,同時(shí)抗氧化物質(zhì)谷胱甘肽的合成也受到阻礙,從而誘使肝內(nèi)大量甘油三酯沉積導(dǎo)致脂肪變性,并激發(fā)脂質(zhì)過氧化和氧化應(yīng)激ROS水平的升高,伴隨機(jī)體抗氧化屏障受損。雙重打擊最終導(dǎo)致肝臟炎癥的發(fā)生和細(xì)胞凋亡,引發(fā)嚴(yán)重的NASH。ABRO1是去泛素化酶BRISC復(fù)合體的重要成員之一。它作為支架蛋白負(fù)責(zé)募集BRCC36,MERIT40和BRE,是BRISC復(fù)合體去K63位泛素化活性必須的成分。前期研究報(bào)道,ABRO1參與了多種生物學(xué)過程的調(diào)控如DNA損傷修復(fù)、缺血再灌注損傷、細(xì)胞周期調(diào)控等,并在I型干擾素受體引發(fā)的免疫應(yīng)答等方面發(fā)揮了重要作用。本論文利用ABRO1敲除小鼠觀察了ABRO1在MCD誘導(dǎo)NASH發(fā)生發(fā)展的作用。Western-blot和Real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn),在MCD模型中肝臟ABRO1表達(dá)上調(diào);HE染色、油紅染色和肝內(nèi)甘油三酯檢測發(fā)現(xiàn),敲除ABRO1小鼠肝臟中MCD誘導(dǎo)的脂積累顯著低于正常小鼠。檢測血清轉(zhuǎn)氨酶水平、肝內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤、肝內(nèi)相關(guān)炎性因子的表達(dá)和分泌發(fā)現(xiàn),ABRO1缺失顯著降低MCD誘導(dǎo)的肝臟炎癥反應(yīng)。此外,馬松染色和caspase-3免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),敲除ABRO1小鼠MCD誘導(dǎo)的肝內(nèi)纖維化和細(xì)胞凋亡顯著降低。這些結(jié)果表明ABRO1敲除顯著抑制了MCD誘導(dǎo)的NASH發(fā)生發(fā)展。為揭示ABRO1的作用機(jī)制,我們采用骨髓移植建立了骨髓嵌合體小鼠,結(jié)果發(fā)現(xiàn),接受了正常小鼠骨髓細(xì)胞移植的ABRO1敲除受體小鼠失去了其原本抵抗MCD誘導(dǎo)NASH的能力,提示ABRO1敲除主要通過影響骨髓來源細(xì)胞抵抗MCD誘導(dǎo)的NASH。進(jìn)一步,我們利用BRCC3(BRISC復(fù)合體的酶活性亞基)敲除小鼠觀察了ABRO1的作用是否依賴BRISC復(fù)合體,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與ABRO1敲除不一樣,敲除BRCC3后對MCD誘導(dǎo)的脂肪變性沒有顯著影響,僅對后期的炎癥反應(yīng)存在一定影響,說明ABRO1敲除抵抗MCD誘導(dǎo)的NASH可能不依賴BRISC活性,而是與ABRO1不依賴BRISC復(fù)合體的功能相關(guān)。這些研究為認(rèn)識ABRO1促進(jìn)NASH發(fā)生發(fā)展分子機(jī)制的認(rèn)識提供了重要的功能線索。綜上所述,本論文發(fā)現(xiàn)ABRO1敲除小鼠顯著抵抗MCD誘導(dǎo)的NASH的發(fā)生發(fā)展,機(jī)制研究揭示ABRO1主要通過不依賴BRISC復(fù)合體的方式,影響了骨髓來源細(xì)胞(最可能是肝內(nèi)免疫細(xì)胞)的功能而發(fā)揮作用。我們的研究揭示了NASH新的發(fā)病機(jī)制,為NASH的防治提供了新的思路。進(jìn)一步的研究將聚焦在ABRO1在人類NASH中的作用和其分子機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575.1
【圖文】：

1.1 非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的“過去”與“現(xiàn)在”非酒精性脂肪性肝炎（non -alcohol fatty steatohepatitis，NASH）是一種嚴(yán)重的非酒精性脂肪肝�。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD），被廣泛認(rèn)為是世界范圍內(nèi)慢性肝病的重要原因。隨著時(shí)間的推移，由于各種風(fēng)險(xiǎn)因素逐漸出現(xiàn)，比如體重增加、糖尿病、高血壓、絕經(jīng)、以及相關(guān)遺傳因素等，都會進(jìn)一步促進(jìn) NASH的發(fā)展，最終導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化和肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的發(fā)生發(fā)展[1]。正如我們所知道的，簡單的肝臟脂肪變性和后期發(fā)展的 NASH 有很大不同，最主要的是后者具有不同程度的肝臟纖維化和嚴(yán)重的肝內(nèi)炎癥反應(yīng)。雖然大多數(shù)簡單的脂肪變性發(fā)展為更加嚴(yán)重疾病的幾率很小，但是 NASH 卻有較高的幾率進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化和終末期肝�。‵ig 1）。

圖 2 NASH“二次打擊”學(xué)說分子機(jī)制[18]Fig2 The hypothesis of Two-hits in NASH[18]1.4 NASH 的熱點(diǎn)治療策略NASH 一直處于缺乏有效的藥物治療和臨床治療的現(xiàn)狀，是研究這種疾病新治療方法的主要動機(jī)。隨著科研工作者們幾十年來的關(guān)注與探索，目前對于 NASH的新興分子機(jī)制和治療策略的研究熱點(diǎn)主要包括（Fig 3）：核轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控;脂毒性和氧化應(yīng)激的靶向藥物研究;調(diào)節(jié)細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)、代謝以及炎癥應(yīng)答。

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3 張煊宜;詹軼群;楊曉明;尹榮華;;ABRO1基因敲除小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞的永生化及其LPS/TLR4通路活化的檢測[J];軍事醫(yī)學(xué);2018年04期

4 汪煜;張文;張潔;任廣明;楊曉明;尹榮華;;敲除ABRO1不影響小鼠肝巨噬細(xì)胞重建[J];軍事醫(yī)學(xué);2018年10期

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1 張建宏;ABRO1通過增強(qiáng)USP7和p53相互作用穩(wěn)定p53[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

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本文編號：2735209