【摘要】：非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已超越慢性病毒性肝炎成為我國的第一大肝臟疾病,嚴重危害人類健康。從起初的簡單脂肪性病變,發(fā)展為脂肪性肝炎,隨著病情程度加深,逐漸出現(xiàn)肝臟的纖維化,最終導致肝硬化,以及肝癌的發(fā)生。非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)患者有高達20%幾率演變?yōu)楦斡不�。目�?臨床尚缺乏針對性的有效治療措施。揭示NASH的發(fā)病機制,發(fā)現(xiàn)治療的靶點,將大大促進該病的防治。蛋氨酸-膽堿缺乏飲食(methionine and choline deficient diet,MCD)模型,是研究NASH的經(jīng)典動物模型。飼料中缺乏蛋氨酸和膽堿可導致肝內轉運甘油三酯的極低密度脂蛋白合成受阻,同時抗氧化物質谷胱甘肽的合成也受到阻礙,從而誘使肝內大量甘油三酯沉積導致脂肪變性,并激發(fā)脂質過氧化和氧化應激ROS水平的升高,伴隨機體抗氧化屏障受損。雙重打擊最終導致肝臟炎癥的發(fā)生和細胞凋亡,引發(fā)嚴重的NASH。ABRO1是去泛素化酶BRISC復合體的重要成員之一。它作為支架蛋白負責募集BRCC36,MERIT40和BRE,是BRISC復合體去K63位泛素化活性必須的成分。前期研究報道,ABRO1參與了多種生物學過程的調控如DNA損傷修復、缺血再灌注損傷、細胞周期調控等,并在I型干擾素受體引發(fā)的免疫應答等方面發(fā)揮了重要作用。本論文利用ABRO1敲除小鼠觀察了ABRO1在MCD誘導NASH發(fā)生發(fā)展的作用。Western-blot和Real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn),在MCD模型中肝臟ABRO1表達上調;HE染色、油紅染色和肝內甘油三酯檢測發(fā)現(xiàn),敲除ABRO1小鼠肝臟中MCD誘導的脂積累顯著低于正常小鼠。檢測血清轉氨酶水平、肝內炎性細胞浸潤、肝內相關炎性因子的表達和分泌發(fā)現(xiàn),ABRO1缺失顯著降低MCD誘導的肝臟炎癥反應。此外,馬松染色和caspase-3免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),敲除ABRO1小鼠MCD誘導的肝內纖維化和細胞凋亡顯著降低。這些結果表明ABRO1敲除顯著抑制了MCD誘導的NASH發(fā)生發(fā)展。為揭示ABRO1的作用機制,我們采用骨髓移植建立了骨髓嵌合體小鼠,結果發(fā)現(xiàn),接受了正常小鼠骨髓細胞移植的ABRO1敲除受體小鼠失去了其原本抵抗MCD誘導NASH的能力,提示ABRO1敲除主要通過影響骨髓來源細胞抵抗MCD誘導的NASH。進一步,我們利用BRCC3(BRISC復合體的酶活性亞基)敲除小鼠觀察了ABRO1的作用是否依賴BRISC復合體,結果發(fā)現(xiàn)與ABRO1敲除不一樣,敲除BRCC3后對MCD誘導的脂肪變性沒有顯著影響,僅對后期的炎癥反應存在一定影響,說明ABRO1敲除抵抗MCD誘導的NASH可能不依賴BRISC活性,而是與ABRO1不依賴BRISC復合體的功能相關。這些研究為認識ABRO1促進NASH發(fā)生發(fā)展分子機制的認識提供了重要的功能線索。綜上所述,本論文發(fā)現(xiàn)ABRO1敲除小鼠顯著抵抗MCD誘導的NASH的發(fā)生發(fā)展,機制研究揭示ABRO1主要通過不依賴BRISC復合體的方式,影響了骨髓來源細胞(最可能是肝內免疫細胞)的功能而發(fā)揮作用。我們的研究揭示了NASH新的發(fā)病機制,為NASH的防治提供了新的思路。進一步的研究將聚焦在ABRO1在人類NASH中的作用和其分子機制。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R575.1
【圖文】：

1.1 非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的“過去”與“現(xiàn)在”非酒精性脂肪性肝炎（non -alcohol fatty steatohepatitis，NASH）是一種嚴重的非酒精性脂肪肝�。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD），被廣泛認為是世界范圍內慢性肝病的重要原因。隨著時間的推移，由于各種風險因素逐漸出現(xiàn)，比如體重增加、糖尿病、高血壓、絕經(jīng)、以及相關遺傳因素等，都會進一步促進 NASH的發(fā)展，最終導致肝纖維化、肝硬化和肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的發(fā)生發(fā)展[1]。正如我們所知道的，簡單的肝臟脂肪變性和后期發(fā)展的 NASH 有很大不同，最主要的是后者具有不同程度的肝臟纖維化和嚴重的肝內炎癥反應。雖然大多數(shù)簡單的脂肪變性發(fā)展為更加嚴重疾病的幾率很小，但是 NASH 卻有較高的幾率進一步發(fā)展為肝硬化和終末期肝�。‵ig 1）。

圖 2 NASH“二次打擊”學說分子機制[18]Fig2 The hypothesis of Two-hits in NASH[18]1.4 NASH 的熱點治療策略NASH 一直處于缺乏有效的藥物治療和臨床治療的現(xiàn)狀，是研究這種疾病新治療方法的主要動機。隨著科研工作者們幾十年來的關注與探索，目前對于 NASH的新興分子機制和治療策略的研究熱點主要包括（Fig 3）：核轉錄因子的調控;脂毒性和氧化應激的靶向藥物研究;調節(jié)細胞能量穩(wěn)態(tài)、代謝以及炎癥應答。

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本文編號：2735209