【摘要】：[目的] 建立以及鑒定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞L02/HBX ,在獲得陽性克隆細(xì)胞后,通過RT-PCR,western-blot對PDCD5的mRNA與蛋白的檢測,研究乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein, HBx)對凋亡蛋白PDCD5的表達(dá)。 [方法] (1)復(fù)蘇及培養(yǎng)L02細(xì)胞,應(yīng)用G418篩選L02細(xì)胞,得到細(xì)胞最低致死濃度。 (2)建立轉(zhuǎn)染HBx基因的L02 (L02/HBX)細(xì)胞系,并通過RT-PCR,western-blot進(jìn)行鑒定,確定HBx基因轉(zhuǎn)染成功。 (3)通過Real-time PCR和Western Blot檢測轉(zhuǎn)染HBx基因后PDCD5mRNA和蛋白表達(dá); [結(jié)果] (1)復(fù)蘇并培養(yǎng)L02細(xì)胞,經(jīng)G418篩選得知,當(dāng)G418濃度在500-700ug/ml時,L02細(xì)胞全部死亡;當(dāng)G418濃度在500ug/ml以下時,L02細(xì)胞均可存活。所以經(jīng)過試驗(yàn)得出L02細(xì)胞的最低致死濃度為500ug/ml。 (2)將HBx基因轉(zhuǎn)入L02肝細(xì)胞中,以500ug/ml G418篩選出轉(zhuǎn)染HBx的陽性克隆L02細(xì)胞。以RT-PCR和western-blot檢測HBx mRNA和蛋白的表達(dá),確保成功建立轉(zhuǎn)染HBx基因的L02 (L02/HBX)細(xì)胞系。 (3)轉(zhuǎn)染HBx基因的L02細(xì)胞中PDCD5 mRNA和蛋白中的表達(dá)水平上調(diào)。 [結(jié)論] HBx上調(diào)凋亡蛋白PDCD5的表達(dá)進(jìn)一步顯示了其同細(xì)胞凋亡的關(guān)系是非常復(fù)雜的,可能對細(xì)胞凋亡具有雙重調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R512.62
【圖文】：

結(jié) 果度的確定 培養(yǎng)約 2 周，在 500-700μg/ml 范圍內(nèi) L02 細(xì)胞全部的內(nèi)尚有活細(xì)胞，得出致死 L02 細(xì)胞的 G418 的最g/ml的G418的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞2周，轉(zhuǎn)染的L0團(tuán)塊存活，而對照組細(xì)胞組全部死亡。（圖1）

Westernblot檢測L02/HBx細(xì)胞和對照細(xì)胞中HBx蛋白的表達(dá).1:β-actin

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2734202