【摘要】：我國作為乙型病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)歷來為世界所關(guān)注,尤其肝炎所導(dǎo)致的肝纖維化、肝硬化甚至肝癌更是成為科研臨床工作者的共識。盡管已經(jīng)采取了一系列措施來減緩這一進程,但是效果不甚理想。如何及時地預(yù)測和診斷炎癥向纖維化的進展一直是個難題,傳統(tǒng)的診斷方法包括臨床癥狀與體征、影像學(xué)和組織病理檢查,但因為特異度、靈敏度不高或病人依存性差等原因在臨床的應(yīng)用上受到一些限制。本課題的目的在于嘗試使用蛋白組學(xué)的方法(表面增強激光解吸／離子化時間飛行質(zhì)譜技術(shù))對正常人及纖維化各個病理分期的血清樣本進行對比,篩選出能反映肝纖維化程度的差異蛋白,并構(gòu)建相對應(yīng)的診斷模型,為臨床建立早期診斷肝纖維化的實驗方法提供新的線索。 第一部分乙肝肝纖維化和健康組之間差異蛋白的篩選 目的：篩選診斷肝纖維化外周血清特異性的差異蛋白峰。 方法：采用表面增強激光解吸／離子化時間飛行質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)技術(shù)檢測20例健康者和61例肝纖維化患者的血清蛋白質(zhì)表達譜,肝纖維化病理診斷依據(jù)2000年西安會議標準,其中S1期31例,S2/3期25例,S4期5例。直接應(yīng)用研究對象的外周血清通過SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測蛋白質(zhì)譜,然后對檢測出的蛋白質(zhì)譜應(yīng)用biomarker Wizard軟件比較分析,篩選出可能反映肝纖維化的差異表達蛋白質(zhì)譜峰。 結(jié)果：在健康組與肝纖維化S1期患者外周血蛋白質(zhì)譜比較后發(fā)現(xiàn)19個差異蛋白峰,其中6個上調(diào),13個下調(diào)；健康組與肝纖維化S2/3期患者外周血蛋白質(zhì)譜比較后發(fā)現(xiàn)15個差異蛋白峰,8個為上調(diào),7個下調(diào)；健康組與肝纖維化S4期患者外周血蛋白質(zhì)譜比較后發(fā)現(xiàn)14個差異蛋白峰,9個上調(diào),5個下調(diào)；肝纖維化S1期與S2/3期比較后發(fā)現(xiàn)11個差異蛋白峰,5個上調(diào),6個下調(diào)；肝纖維化S1期與S4期比較后發(fā)現(xiàn)9個差異蛋白峰,其中7個上調(diào),2個下調(diào)；肝纖維化S2/3期與S4期比較后發(fā)現(xiàn)3個差異蛋白峰,均為上調(diào)。質(zhì)荷比為M8471的蛋白質(zhì)在整個纖維化期持續(xù)下調(diào),質(zhì)荷比為M5304的蛋白質(zhì)在整個纖維化期持續(xù)上調(diào)。 結(jié)論：質(zhì)荷比為M8471和M5304的蛋白質(zhì)可能是潛在的肝纖維化外周血清標志物。 第二部分肝纖維化SELDI診斷模型的建立 目的：建立肝纖維化各個分期最佳的SELDI診斷模型。 方法：用Biomarker Pattern軟件對已發(fā)現(xiàn)的差異蛋白峰做線性分類分析,經(jīng)過進一步優(yōu)化實驗參數(shù)確定最佳的肝纖維化SELDI診斷模型。 結(jié)果：用質(zhì)荷比峰M4799聯(lián)合M6125建立的區(qū)分健康組與肝纖維化S1期的診斷模型準確率為87%,特異度為80%,靈敏度為87%；用質(zhì)荷比峰M6215建立的區(qū)分健康組與肝纖維化S2/3期的診斷模型準確率為84%,特異度為65%,靈敏度為84%；用質(zhì)荷比峰M8591建立的區(qū)分健康組與肝纖維化S4期的診斷模型準確率為92%,特異度為90%,靈敏度為100%；用質(zhì)荷比峰M6123建立的區(qū)分肝纖維化S1期與S2/3期的診斷模型準確率為75%,特異度為67%,靈敏度為76%；用質(zhì)荷比峰M4603建立的區(qū)分肝纖維化S1與S4期的診斷模型準確率為92%,特異度為84%,靈敏度為100%：用質(zhì)荷比峰M4799建立的區(qū)分肝纖維化S2/3與S4期的診斷模型準確率為100%,特異度為100%,靈敏度為80%。 結(jié)論：SELDI-TOF-MS結(jié)合決策樹技術(shù)篩選到的蛋白標志物,有望成為肝纖維化早期診斷、疾病預(yù)測和預(yù)后分析的靶標,課題組下一步將進行純化、鑒定、功能研究和臨床驗證等工作。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R575.2
【圖文】：

并快速精確地繪制出蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖，其中縱坐標為蛋白質(zhì)相對含量，橫坐標為蛋白質(zhì)質(zhì)荷比，紅色標記為ciphergenproteinehip軟件在2，O00Da一20，000Da范圍內(nèi)自動采集的蛋白峰值(見圖1一4)。將所有樣本2000M/Z以上的質(zhì)荷比峰，用BiomarkwiZard軟件過濾噪音，設(shè)置系數(shù):初次噪音過濾值為5，第二次為2，最小聞值10%。

并快速精確地繪制出蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖，其中縱坐標為蛋白質(zhì)相對含量，橫坐標為蛋白質(zhì)質(zhì)荷比，紅色標記為ciphergenproteinehip軟件在2，O00Da一20，000Da范圍內(nèi)自動采集的蛋白峰值(見圖1一4)。將所有樣本2000M/Z以上的質(zhì)荷比峰，用BiomarkwiZard軟件過濾噪音，設(shè)置系數(shù):初次噪音過濾值為5，第二次為2，最小聞值10%。

【參考文獻】

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本文編號：2733259