發(fā)布時間：2020-06-26 21:52

【摘要】： 目的： 1、構(gòu)建穩(wěn)定、可靠、符合肝硬化門脈高壓疾病自然演變過程的大鼠動物模型，研究該模型肝臟病變和門靜脈高壓性血管病變的進(jìn)展情況。 2、研究胰島素樣生長因子1(IGF-1)在肝硬化門脈高壓大鼠中的表達(dá)改變，探討IGF-1在肝硬化門脈高壓性血管病變中的作用。 3、研究IGF-1基因啟動子的多態(tài)性，以及啟動子的多態(tài)性對IGF-1基因表達(dá)的影響和在肝硬化門脈高壓性血管病變機(jī)制中的作用。 方法： 1、應(yīng)用CCL4(四氯化碳)腹腔注射法制作肝硬化門脈高壓性血管病變模型，以HE染色、Masson三色染色、透射電鏡、CT掃描觀察大鼠肝臟及其門靜脈的病變，并測量門靜脈壓力以了解該模型血液動力學(xué)變化情況。 2、應(yīng)用RT-RealTime-PCR和免疫組織化學(xué)檢測病變大鼠肝臟組織IGF-1的mRNA和蛋白水平，應(yīng)用ELISA方法測定病變大鼠血清IGF蛋白的含量水平，并與正常大鼠組相比較。 3、應(yīng)用序列特異性引物PCR和非對稱性PCR擴(kuò)增肝硬化組大鼠IGF-1基因啟動子，應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢驗(yàn)IGF-1基因啟動子多態(tài)性。 結(jié)果： 1、腹腔注射CCL4后大鼠肝臟組織經(jīng)HE染色后可見肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝小葉重建，纖維組織增生，肝內(nèi)假小葉廣泛形成，同時伴有明顯的匯管區(qū)纖維組織增生等肝硬化病理表現(xiàn)；門靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞呈結(jié)節(jié)樣增生，平滑肌細(xì)胞肥大，成纖維細(xì)胞和膠原纖維增多；經(jīng)CT掃描發(fā)現(xiàn)肝硬化組和對照組大鼠肝臟體積分別為9741±2715mm~3和12898±3081 mm~3，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)測壓后發(fā)現(xiàn)肝硬化組和正常組大鼠門靜脈壓力分別為7．6±2．6mmHg，12．4±3．6 mmHg，兩組間差異有顯著性意義。 2、經(jīng)免疫組化檢測兩組肝臟組織IGF-1蛋白表達(dá)分別為0．40±0．13和0．68±0．19，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)RT-Real Time-PCR檢測兩組肝臟組織IGF-1 mRNA分別為3．95±2．26和6．12±3．14，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)ELISA方法測定兩組大鼠血清IGF蛋白分別為687±137 ng／ml和919±183 ng／ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)相關(guān)線性分析，肝細(xì)胞IGF-1濃度、血清IGF-1濃度以及肝細(xì)胞IGF-1 mRNA濃度對門靜脈壓力值存在負(fù)相關(guān)。 3、經(jīng)序列特異性引物PCR和非對稱性PCR擴(kuò)增肝硬化組大鼠I6F-1基因啟動子后，基因芯片技術(shù)檢驗(yàn)IGF-1基因啟動子發(fā)現(xiàn)，在肝硬化組大鼠，-10位點(diǎn)堿基多態(tài)性導(dǎo)致肝臟IGF-1蛋白含量分別為0．44±0．13(AI)和0．34±0．10(AI)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；-35位點(diǎn)堿基多態(tài)性導(dǎo)致門靜脈壓力分別為13．0±3．5(mmHg)和9．6±2．6(mmHg)，兩組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1、CCL4性肝硬化門脈高壓血管病變模型穩(wěn)定、類似人類自然病程；門靜脈系統(tǒng)血流動力學(xué)改變明顯，是研究門脈高壓癥的理想模型。 2、在肝硬化門脈高壓大鼠模型中，隨著肝臟體積的不斷縮小、門靜脈壓力的不斷升高，肝臟組織及血清IGF-1蛋白和基因轉(zhuǎn)錄水平不斷下降。IGF-1是肝硬化門脈高壓的保護(hù)性因子。 3、IGF-1基因啟動子區(qū)域-10，-35位點(diǎn)堿基的變異可以導(dǎo)致大鼠IGF-1基因啟動子活性的改變，從而影響到IGF-1基因的表達(dá)改變引起的門脈高壓血管病變的變化。IGF-1基因啟動子多態(tài)性導(dǎo)致不同的個體在肝硬化門脈高壓病程中的反應(yīng)多態(tài)性。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R575.2
【圖文】：

圖1.2實(shí)驗(yàn)組大鼠有大量腹水圖1.4正常肝小葉結(jié)構(gòu)，匯管區(qū)無纖維組織增圖1.5實(shí)驗(yàn)組大鼠肝組織匯管區(qū)相鄰膽管間隔形成圖1.6匯管區(qū)纖維組織增生，肝小葉結(jié)構(gòu)纖紊亂

圖1.2實(shí)驗(yàn)組大鼠有大量腹水圖1.4正常肝小葉結(jié)構(gòu)，匯管區(qū)無纖維組織增圖1.5實(shí)驗(yàn)組大鼠肝組織匯管區(qū)相鄰膽管間隔形成圖1.6匯管區(qū)纖維組織增生，肝小葉結(jié)構(gòu)纖紊亂

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本文編號：2730939