【摘要】： 目的:探討四氯化碳引起的Wistar大鼠藥物性肝損害(drug-induced liver injury,DILI)發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的免疫學(xué)機(jī)制;評(píng)價(jià)甘草酸二銨(Diammonium Glycyrrhizinate,DGL)及腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine,SAMe)對(duì)大鼠藥物性肝損害的療效。 方法: 選取Wistar大鼠80只(200±20g,雌雄各半)。正常飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成A、B、C、D、E、F、G、H組,共8組,每組10只。A組單純給予生理鹽水灌胃,B、C、D、E 4組首次皮下注射50%四氯化碳油溶劑5ml/kg,之后皮下注射50%四氯化碳油溶劑2.5ml/kg,每周2次,制造藥物性肝損害模型,共四周。C、D、E組3組造模同時(shí)分別給予甘草酸二銨375mg/kg/d、腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d及甘草酸二銨375mg/kg/d聯(lián)合腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃,共四周。F、G、H組3組首次皮下注射50%四氯化碳油溶劑5ml/kg,之后皮下注射50%四氯化碳油溶劑2.5ml/kg,每周2次,制造藥物性肝病模型,兩周后停用四氯化碳油溶劑,分別給予甘草酸二銨375mg/kg/d、腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d及甘草酸二銨375mg/kg/d聯(lián)合腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃,共兩周。造模兩周時(shí)隨機(jī)在A、B、C、D、E 5組各取兩只大鼠禁食后股動(dòng)脈放血處死,四周后全部大鼠禁食后股動(dòng)脈放血處死。分別檢測(cè):(1)血清肝功能指標(biāo):谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)及白蛋白(ALB)(2)肝組織病理HE染色。(3)免疫指標(biāo):免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、補(bǔ)體C3(complement C3)及T淋巴細(xì)胞亞群(包括CD4+及CD8+)的水平測(cè)定。其中血清肝功能指標(biāo)使用全自動(dòng)生化分析儀;T淋巴細(xì)胞亞群采取Expo32ADC分析方法;免疫球蛋白及補(bǔ)體C3采用免疫比濁法測(cè)定。 結(jié)果: 1動(dòng)物生存狀態(tài)觀察 模型組大鼠精神狀態(tài)差,體重與其它組比較明顯減輕(P0.05),皮毛枯稿、干澀,初期喜靜少動(dòng),動(dòng)作遲緩,嗜睡,后期出現(xiàn)翻轉(zhuǎn)現(xiàn)象及躁動(dòng)等行為失常現(xiàn)象;體重增加緩慢。對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好,皮毛濃密、光潔,體態(tài)自如;體重正常。各藥物組老鼠狀態(tài)較正常組稍遜,比模型組好。 2肝組織病理學(xué)改變: 造模兩周后取A、B、C、D、E組各兩只大鼠觀察肝組織HE染色病理學(xué)改變:A組可見(jiàn)肝細(xì)胞正常,肝板走行較好,無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn);B組可見(jiàn)肝細(xì)胞明顯腫脹變性,肝板走行擁擠,散在脂肪空泡及點(diǎn)灶狀壞死,肝竇輕度淤血擴(kuò)張;C組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹變性,散在分布脂肪空泡及點(diǎn)灶狀壞死;D組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹變性,彌漫分布的脂肪空泡變性,彌漫分布的點(diǎn)灶狀壞死,肝板走行擁擠紊亂;E組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹變性,彌漫分布的脂肪空泡,少量點(diǎn)灶狀壞死。 四周后各組肝組織HE染色病理學(xué)改變:A組可見(jiàn)肝細(xì)胞正常,肝板走行較好,無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。B組可見(jiàn)彌漫分布的點(diǎn)灶狀壞死,肝細(xì)胞明顯腫脹變性,可見(jiàn)明顯毛細(xì)小膽栓,間質(zhì)反應(yīng)活躍。C組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹變性,點(diǎn)灶狀壞死較明顯,零散分布的脂肪空泡。D組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹變性,偶見(jiàn)點(diǎn)狀壞死,散在地脂肪空泡,部分肝細(xì)胞漿膽色素沉積。E組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹變性較明顯,可見(jiàn)少量壞死灶,散在分布的脂肪空泡,部分肝細(xì)胞漿膽色素沉積。F組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹變性,可見(jiàn)散在點(diǎn)灶狀壞死,零散分布的脂肪空泡,肝板走行尚可。G組可見(jiàn)散在脂肪空泡,少量點(diǎn)灶狀壞死,可見(jiàn)小膽栓及但色素沉積,間質(zhì)反應(yīng)活躍。H組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹變性,可見(jiàn)散在點(diǎn)灶狀壞死,零散分布的脂肪空泡,肝板走行尚可。 3免疫指標(biāo) 3.1細(xì)胞免疫的指標(biāo)(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+) A、B、C、D、E、F、G、H組8組CD8+分別為:17.18±2.58、23.46±3.08、16.31±6.19、17.09±10.70、19.91±7.09、17.26±3.77、15.77±3.54、16.00±3.76;A、B、C、D、E、F、G、H組8組CD4+/CD8+分別為:2.41±0.59、1.55±0.24、2.47±0.72、2.92±1.87、2.25±0.59、2.93±0.76、3.30±1.04、3.33±0.78;B組CD8+、CD4+/CD8+水平與A組CD8+、CD4+/CD8+水平比有明顯差別(P0.05);B組CD8+、CD4+/CD8+與C、D、E組無(wú)明顯差別(P0.05); A、B、C、D、E、F、G、H組8組CD4+分別為:40.78±5.37、35.75±3.70、37.01±7.33、37.29±9.34、42.27±9.77、48.65±7.89、49.35±9.68、50.87±6.22;B組CD4+與A、C、D、E組CD4+均無(wú)明顯差別(P0.05); 3.2體液免疫的指標(biāo)(IgA、IgG、IgM及補(bǔ)體C3) A、B、C、D、E、F、G、H組8組血清IgM水平分別為:0.13±0.02、0.45±0.17、0.20±0.06、0.21±0.09、0.18±0.05、0.14±0.02、0.14±0.04、0.13±0.04;B組血清IgM的水平與A、C、E組比較均有明顯升高(P0.05);B組血清IgM的水平與D組相比無(wú)明顯差別(P0.05); A、B、C、D、E組血清IgA、IgG的水平無(wú)明顯差別(P0.05); A、B、C、D、E、F、G、H組8組血清補(bǔ)體C3水平分別為:0.30±0.14、0.18±0.13、0.47±0.05、0.36±0.16、0.47±0.06、0.26±0.13、0.15±0.09、0.19±0.12。B組血清補(bǔ)體C3水平與C、E組相比較均有明顯升高(P0.05);B組血清補(bǔ)體C3水平與A、D組比無(wú)明顯差別(P0.05); 4肝功能指標(biāo)(AST、ALT、TBIL及ALB): B組血清ALT、AST、TBIL的水平與A、C、D、E組相比較均有明顯升高(P0.05),B組血清ALB的水平與A、C、D、E組相比較有明顯降低(P0.05),A、C、D、E組血清ALT、AST、TBIL、ALB水平無(wú)明顯差別(P0.05);A、F、G、H組血清ALT、AST、ALB、TBIL的水平無(wú)明顯差別(P0.05)。 結(jié)論: 1應(yīng)用四氯化碳皮下注射的方法可以成功制作大鼠藥物性肝病模型。 2細(xì)胞免疫及體液免疫均參與了藥物性肝損害的發(fā)病過(guò)程。在細(xì)胞免疫方面,CD8+及CD4+/CD8+與藥物性肝損害的發(fā)病關(guān)系密切;在體液免疫方面,IgM與藥物性肝損害發(fā)病過(guò)程有關(guān),但尚不能確定IgA、IgG及補(bǔ)體C3是否參與了藥物性肝損害的發(fā)病過(guò)程。 3甘草酸二銨及腺苷蛋氨酸對(duì)藥物性肝病均有明顯的保肝降酶作用,其中,甘草酸二銨的保肝作用可能與改善體液免疫有一定關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R595.3;R575

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本文編號(hào)：2724304