【摘要】： 肝纖維化是肝臟對(duì)各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應(yīng),表現(xiàn)為肝內(nèi)膠原纖維異常增生,肝細(xì)胞變性壞死,肝組織結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞。臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都已證明,肝纖維化是慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)途徑。因此探討肝纖維化時(shí)的病理改變對(duì)深入研究肝纖維化的形成機(jī)制具有重要意義。 用于肝纖維化研究的動(dòng)物模型有:中毒性肝損傷模型、膽汁性肝損傷模型、免疫性肝損傷性肝纖維化模型等,而本研究則選用小鼠膽總管結(jié)扎致肝纖維化的動(dòng)物模型。該模型因具有操作簡單、穩(wěn)定可靠等特點(diǎn),成為研究中非常常用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。在小鼠體內(nèi)行膽總管結(jié)扎術(shù)后,可引起膽汁肝內(nèi)淤積。當(dāng)肝細(xì)胞受到刺激后,趨化因子和細(xì)胞因子釋放、中性粒細(xì)胞等募集到肝臟,進(jìn)而出現(xiàn)肝細(xì)胞凋亡、壞死、肝性炎癥,細(xì)胞增殖等一系列相關(guān)反應(yīng)。 在本課題中,我們通過膽總管結(jié)扎手術(shù)成功建立并評(píng)價(jià)了小鼠膽汁淤積性肝纖維化模型,并以此為體內(nèi)模型研究肝纖維化形成過程中的病理改變,本實(shí)驗(yàn)選用與炎癥相關(guān)的KC-1、MIP-2、ICAM-1和MPO作為評(píng)價(jià)肝性炎癥浸潤的指標(biāo),用與增殖相關(guān)的抗原PCNA、Ki-67和CK-19作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖的指標(biāo),用TUNEL染色和病理切片作為評(píng)價(jià)凋亡和壞死的指標(biāo),研究膽汁淤積性肝纖維化形成中肝性炎癥、細(xì)胞增殖、凋亡和壞死情況。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示:膽總管結(jié)扎后,隨著趨化因子和細(xì)胞因子的升高,炎癥細(xì)胞浸潤,導(dǎo)致肝損傷。與假手術(shù)組相比,模型組肝性炎癥、細(xì)胞增殖、凋亡和壞死均顯著增加。提示肝纖維化的形成是多因素、多環(huán)節(jié)相互作用和調(diào)控的結(jié)果,但其確切機(jī)制尚未完全闡明。 Fox(forkhead/winged helix transcription factor)基因家族是2000年才統(tǒng)一命名的功能多樣的“翼螺旋”轉(zhuǎn)錄因子,該家族成員具有一個(gè)高度保守的Forkhead結(jié)構(gòu)域,具有DNA結(jié)合、轉(zhuǎn)錄活化和轉(zhuǎn)錄抑制等功能。已有研究結(jié)果表明肝星形細(xì)胞(hepatic stellate cell, HSC)激活是肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié),而TGF-β1/Smads信號(hào)通路是調(diào)控HSC活化的主要通路。FoxC1調(diào)控的部分靶基因有Smad2、BMP-7、TGF-β1等,提示FoxC1參與了TGF-β1信號(hào)通路。FoxL1是表達(dá)于胃腸道間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子,其Forkhead區(qū)域與FoxC1在核苷酸水平的同源性高達(dá)83%,由此提示:FoxL1可能通過參與TGF-β1/Smads信號(hào)通路,在調(diào)控肝纖維化形成過程中發(fā)揮重要作用。 在課題中我們采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色技術(shù)以及Western blotting技術(shù),全面地探討FoxL1在肝纖維化進(jìn)程中各時(shí)間點(diǎn)的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。研究結(jié)果顯示:在小鼠膽總管結(jié)扎術(shù)后第1天至14天,隨著時(shí)間的延長,肝組織中FoxL1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平逐漸增高,第7天表達(dá)至最高峰。以上結(jié)果提示FoxL1極有可能在HSC活化和肝纖維化形成的早期發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R575.22
【圖文】：

肝纖維化模型組和假手術(shù)組肝組織HE染色（20×）

Sham BDL-14d圖 1-3 α-SMA 免疫組化染色（20×）FIG.1-3 . Immunohistochemical staining of the rat liver by using anti- α-SMA (NeoMarkers) insham-operated control (C) mice and bile duct ligated (BDL) mice, reveals significant increase ofα-SMA-staining cells (dark brown) in the BDL rat liver from 2 weeks.

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉梁英;李孝生;萬曉強(qiáng);;川芎嗪和大黃酸對(duì)肝細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];中華肝臟病雜志;2006年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 林靜;HBx在肝癌細(xì)胞p53依賴性和非依賴性凋亡通路中的作用靶點(diǎn)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 周偉;肝細(xì)胞增殖、凋亡與肝纖維化逆轉(zhuǎn)的關(guān)系及機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

2 劉梁英;川芎嗪、大黃酸聯(lián)用對(duì)轉(zhuǎn)化生長因子β_1和甘油三酯致肝細(xì)胞損傷的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2722870