發(fā)布時間：2020-06-19 09:32

【摘要】：研究背景炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一組病因不明的特發(fā)性腸道炎癥性疾病,其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增高趨勢,異常的免疫反應在IBD發(fā)病過程中起著重要的作用。過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferatorsactivated receptor,PPAR)是核激素受體家族中的配體激活受體,PPARγ屬于其中一種亞型,主要分布在脂肪組織、腸道、脾臟等處。已有的研究表明PPARγ可以調(diào)節(jié)炎性因子的表達,促進組織修復,腸道內(nèi)PPARγ的表達降低可能導致炎癥的發(fā)生,但其在葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium,DSS)誘導的小鼠結腸炎中的具體作用機制目前尚不十分清楚。目的本實驗通過在DSS誘導的結腸炎小鼠體內(nèi)預防性應用PPARγ激動劑,旨在探究PPARγ激動劑能否抑制Toll樣受體4(toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信號通路,能否影響基質(zhì)金屬蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP7)的表達,并調(diào)節(jié)緊密連接相關蛋白。通過檢測血清及組織中相關炎性分子及蛋白的表達,探究PPARγ在實驗性結腸炎中的作用。方法SPF級雄性BALB/c小鼠48只,隨機分為4組,每組12只。(1)正常對照組:自由進食及飲水,不進行干預。(2)DSS模型組:實驗第1~3天自由進食及飲水,同(1)。實驗第4天開始自由飲用2.75%DSS溶液(按5ml/只/天的飲水量配置,現(xiàn)配現(xiàn)用),自由進食至實驗結束。(3)DSS+NS組:實驗第1天開始給與每只小鼠200ul生理鹽水(normal saline,NS)灌胃,自由進食及飲水。實驗第4天開始自由飲用2.75%DSS溶液,自由進食,繼續(xù)按相同用量給與該組小鼠生理鹽水灌胃,直至實驗結束。(4)DSS+RSG組:實驗1天開始,給與每只小鼠200ul PPARγ激動劑羅格列酮(rosiglitazone,RSG)溶液灌胃(20mg/kg/天),自由進食及飲水。實驗第4天開始自由飲用2.75%DSS溶液,自由進食,繼續(xù)按相同用量給與該組小鼠RSG灌胃,直至實驗結束。每日監(jiān)測小鼠體重變化,觀察各組小鼠精神狀態(tài)及大便情況,計算疾病活動指數(shù)(disease activity index,DAI)評分。實驗第11天處死全部小鼠,收集血清及結腸組織,ELISA檢測血清中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)水平。結腸組織HE染色后統(tǒng)計組織化學評分(histochemical score,HI),免疫組化法檢測結腸組織中TLR4、閉鎖小帶蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、閉合蛋白(occludin)的表達,Western Blot檢測結腸組織中NF-κB、MMP7的表達。結果1.對照組小鼠一般狀況良好,體重輕度增加,結腸長度正常。DSS組和DSS+NS組小鼠精神萎靡,一般狀況差,體重下降較明顯,結腸明顯縮短,DAI及HI評分均較對照組明顯升高(p0.05),但兩個模型組之間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。DSS+RSG組體重下降及結腸長度縮短均較DSS組和DSS+NS組有所緩解,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),DAI及HI評分也較上述兩組降低(p0.05)。2.DSS組及DSS+NS組小鼠血清中TNF-α、IL-6較正常對照組明顯增加(p0.05),但兩組之間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),與上述兩個模型組相比,DSS+RSG組小鼠血清中TNF-α、IL-6水平有所降低(p0.05)。3.免疫組化結果提示,與正常對照組相比,DSS組和DSS+NS組小鼠結腸組織中TLR4表達明顯增加,ZO-1及occludin蛋白表達量則有所降低,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05),兩個模型組之間上述蛋白的表達無明顯差異(p0.05)。與上述兩個模型組相比,DSS+RSG組結腸組織中TLR4的表達降低,ZO-1及occludin蛋白表達增加,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。4.Western Blot結果顯示,DSS組及DSS+NS組結腸組織中NF-κB、MMP7的含量均較正常對照組明顯升高(p0.05),兩個模型組之間無明顯差異。DSS+RSG組與上述兩個模型組相比,NF-κB、MMP7蛋白的表達均降低(p0.05)。結論1.在DSS誘導的結腸炎小鼠體內(nèi),預防性應用PPARγ激動劑可以抑制TLR4/NF-κB信號通路,調(diào)節(jié)多種炎性因子的表達。2.PPARγ激動劑可以抑制MMP7的表達,改善炎癥狀態(tài)下受損的腸道屏障功能。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R574.62
【圖文】：

（2）DSS 組和（3）DSS+NS 組小鼠在飲用 2.75%DSS 溶液 3~4后出現(xiàn)體重下降，精神萎靡，運動量減少，毛發(fā)枯燥以及稀便或血便等情況且隨著實驗進展，上述現(xiàn)象逐漸加重，實驗第 10 天開始出現(xiàn)小鼠死亡現(xiàn)象，實驗結束DSS組共有1只小鼠死亡，DSS+NS組共有2只小鼠死亡。（4）DSS+R組出現(xiàn)體重下降及大便性狀改變較 DSS 組和 DSS+NS 組晚，且體重下降程度及便血等癥狀也較兩個實驗組輕，至實驗結束未出現(xiàn)小鼠死亡現(xiàn)象。各組小的體重變化情況見圖 1.1，DAI 評分見表 1.1。表 1.1 各組小鼠 DAI 及 HI 評分分組 DAI 評分 HI 評分正常對照組 0.67±0.82 0.83±0,75DSS 組 7.83±1.47*5.50±1.87*DSS+NS 組 8.17±1.60*6.00±1.79*DSS+RSG 組 5.33±1.37*#2.67±0.82*#注：*：與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義，p<0.05。#：與 DSS 組相比差異有計學意義，p<0.05。

各組小鼠結腸組織學改變及 HI 評分將各組小鼠結腸完全分離后發(fā)現(xiàn)，（1）正常對照組小鼠結腸黏膜光滑潰瘍等。與正常對照組相比，（2）DSS 組和（3）DSS+NS 組結腸長短，扭曲變形，腸腔內(nèi)可見血性附著物，同時可見腸黏膜糜爛。（4）DSS腸縮短程度較輕，可見結腸黏膜充血，但程度較模型組輕。具體可見圖將組織石蠟切片置于光學顯微鏡下觀察，可見（1）正常對照組小鼠結整連續(xù)，腺體及上皮細胞排列規(guī)律，隱窩結構完整，未見明顯炎性細（2）DSS 組和（3）DSS+NS 組結腸黏膜連續(xù)性中斷，腺體結構紊亂壞，杯狀細胞減少，同時可見大量炎性細胞浸潤。（4）DSS+RSG 組重程度較（2）、（3）組輕，鏡下可見腺體排列稍紊亂，隱窩破壞較炎性細胞浸潤也較上述兩組有所好轉，具體見圖 2.2。依據(jù)各組小鼠鏡行 HI 評分，具體見表 1.1。Con DSS

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本文編號：2720606