【摘要】： 研究背景 多種慢性肝病可由肝纖維化發(fā)展為肝硬化,門靜脈高壓是肝硬化的主要特征之一。肝硬化狀態(tài)下,肝內(nèi)血管阻力的增加是導(dǎo)致門靜脈高壓的重要因素。肝星狀細胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝細胞外基質(zhì)的主要細胞,HSC活化在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展以及門脈高壓形成一系列過程中起關(guān)鍵作用�；罨腍SC轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞和成纖維細胞,不斷增殖,并獲得收縮性。當后者發(fā)生強烈收縮,致使肝竇直徑縮小,肝內(nèi)血管阻力增大;同時可引起肝組織瘢痕攣縮,進一步增加肝內(nèi)血管阻力,導(dǎo)致門靜脈高壓�？梢�,HSC收縮的調(diào)控機制是門靜脈高壓機理研究的重要一環(huán)。近年來,肝內(nèi)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(therenin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)已成為肝纖維化研究領(lǐng)域的熱點,隨著對RAAS認識的不斷深化,發(fā)現(xiàn)了RAAS的許多新組分,如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)、血管緊張素1-7(Ang-(1-7))、Ang-(1-7)的受體Mas等。它們構(gòu)成的ACE2-Ang(1-7)-Mas受體軸,成為RAAS的另一重要分支,對ACE-AngⅡ-AT1R軸具有顯著的抑制作用。肝內(nèi)ACE-AngⅡ-AT1R軸與門靜脈高壓的形成有密切關(guān)系。目前未見有關(guān)ACE2-Ang(1-7)-Mas受體軸對HSC收縮調(diào)控的研究報道。HSC活化后轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞樣細胞,具有平滑肌細胞的特征,提示HSC收縮和平滑肌細胞收縮的分子機制是類似的,可通過鈣離子依賴性和非鈣離子依賴性兩種通路完成收縮。在非鈣途徑中,Rho-Rock通路對HSC收縮的調(diào)控機制是近年研究的熱點。本研究通過觀察Ang-(1-7)對HSC收縮及Rho-Rock信號通路上各元件表達的影響來闡明其對HSC收縮調(diào)控的影響。 目的探討血管緊張素1-7(angiotensin1-7,Ang-(1-7))對大鼠HSC收縮以及由Rho激酶介導(dǎo)的非Ca~(2+)依賴性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。方法①將HSC-T6細胞株給予Ang-(1-7)1μmol/L處理,聚硅酮膜法直觀檢測HSC的收縮性;②將HSC-T6細胞株給予Ang-(1-7)10μmol/L處理,免疫印跡法檢測肌球蛋白輕鏈(myosin light chain,MLC)、磷酸化MLC和α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達水平。觀察Ang-(1-7)、AngⅡ(angiotensinⅡ)、Ang-(1-7)MAS受體阻斷劑A779、AngⅡ和Ang-(1-7)對磷酸化MLC和α-SMA表達水平的影響;③逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測Rho-Rock通路中Rock2(Rho kinase2)、RhoAGTP、RhoGEF(Rho Guanine Nucleotide Exchange Factors,RhoGEF)的表達。結(jié)果AngⅡ處理組磷酸化MLC蛋白的表達顯著增強(P=0.000)。Ang-(1-7)可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的HSC的收縮。AngⅡ+Ang-(1-7)處理組可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的MLC蛋白磷酸化水平(P=0.000),而Ang-(1-7)處理組磷酸化MLC蛋白水平顯著高于Ang-(1-7)+A779處理組,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。AngⅡ處理組α-SMA蛋白的表達顯著增強(P=0.000),AngⅡ+Ang-(1-7)處理組可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的α-SMA蛋白表達水平,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。AngⅡ組RhoGEF mRNA顯著高于陰性對照組(P=0.000),Ang-(1-7)+AngⅡ組RhoGEF mRNA比AngⅡ組的表達顯著減弱(P=0.000),Ang-(1-7)組RhoGEF mRNA顯著低于陰性對照組(P=0.000),差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。AngⅡ組Rock2 mRNA顯著高于陰性對照組(P=0.000),Ang-(1-7)+AngⅡ組Rock2 mRNA比AngⅡ組的表達顯著減弱(P=0.000),Ang-(1-7)組Rock2 mRNA顯著低于陰性對照組(P=0.000),Ang-(1-7)+A779組Rock2 mRNA的表達顯著低于Ang-(1-7)組,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。AngⅡ組RhoAGTP mRNA顯著高于陰性對照組(P=0.000),Ang-(1-7)+AngⅡ組RhoAGTP mRNA比AngⅡ組的表達顯著減弱(P=0.000),Ang-(1-7)組RhoAGTP mRNA顯著低于陰性對照組(P=0.000),Ang-(1-7)+A779組RhoAGTP mRNA的表達顯著低于Ang-(1-7)組,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。結(jié)論Ang-(1-7)可通過Rho-Rock信號通路抑制AngⅡ誘導(dǎo)的HSC收縮。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R575.2
【圖文】：

圖1:肋小Rock通路對HSC收縮的調(diào)控機制示意圖，肝內(nèi)腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)已成為肝纖維化研表明，肝臟等局部組織器官具有的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(AD一血管緊張素Hl型受體(ATIR)軸是RAS的主要途徑。隨

陰性對照組(xlOO)

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2720157