發(fā)布時(shí)間：2020-06-19 02:08

【摘要】： 研究背景 多種慢性肝病可由肝纖維化發(fā)展為肝硬化,門(mén)靜脈高壓是肝硬化的主要特征之一。肝硬化狀態(tài)下,肝內(nèi)血管阻力的增加是導(dǎo)致門(mén)靜脈高壓的重要因素。肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞,HSC活化在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展以及門(mén)脈高壓形成一系列過(guò)程中起關(guān)鍵作用�；罨腍SC轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,不斷增殖,并獲得收縮性。當(dāng)后者發(fā)生強(qiáng)烈收縮,致使肝竇直徑縮小,肝內(nèi)血管阻力增大;同時(shí)可引起肝組織瘢痕攣縮,進(jìn)一步增加肝內(nèi)血管阻力,導(dǎo)致門(mén)靜脈高壓�？梢�(jiàn),HSC收縮的調(diào)控機(jī)制是門(mén)靜脈高壓機(jī)理研究的重要一環(huán)。近年來(lái),肝內(nèi)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(therenin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)已成為肝纖維化研究領(lǐng)域的熱點(diǎn),隨著對(duì)RAAS認(rèn)識(shí)的不斷深化,發(fā)現(xiàn)了RAAS的許多新組分,如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)、血管緊張素1-7(Ang-(1-7))、Ang-(1-7)的受體Mas等。它們構(gòu)成的ACE2-Ang(1-7)-Mas受體軸,成為RAAS的另一重要分支,對(duì)ACE-AngⅡ-AT1R軸具有顯著的抑制作用。肝內(nèi)ACE-AngⅡ-AT1R軸與門(mén)靜脈高壓的形成有密切關(guān)系。目前未見(jiàn)有關(guān)ACE2-Ang(1-7)-Mas受體軸對(duì)HSC收縮調(diào)控的研究報(bào)道。HSC活化后轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞,具有平滑肌細(xì)胞的特征,提示HSC收縮和平滑肌細(xì)胞收縮的分子機(jī)制是類(lèi)似的,可通過(guò)鈣離子依賴(lài)性和非鈣離子依賴(lài)性?xún)煞N通路完成收縮。在非鈣途徑中,Rho-Rock通路對(duì)HSC收縮的調(diào)控機(jī)制是近年研究的熱點(diǎn)。本研究通過(guò)觀(guān)察Ang-(1-7)對(duì)HSC收縮及Rho-Rock信號(hào)通路上各元件表達(dá)的影響來(lái)闡明其對(duì)HSC收縮調(diào)控的影響。 目的探討血管緊張素1-7(angiotensin1-7,Ang-(1-7))對(duì)大鼠HSC收縮以及由Rho激酶介導(dǎo)的非Ca~(2+)依賴(lài)性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。方法①將HSC-T6細(xì)胞株給予Ang-(1-7)1μmol/L處理,聚硅酮膜法直觀(guān)檢測(cè)HSC的收縮性;②將HSC-T6細(xì)胞株給予Ang-(1-7)10μmol/L處理,免疫印跡法檢測(cè)肌球蛋白輕鏈(myosin light chain,MLC)、磷酸化MLC和α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)表達(dá)水平。觀(guān)察Ang-(1-7)、AngⅡ(angiotensinⅡ)、Ang-(1-7)MAS受體阻斷劑A779、AngⅡ和Ang-(1-7)對(duì)磷酸化MLC和α-SMA表達(dá)水平的影響;③逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)Rho-Rock通路中Rock2(Rho kinase2)、RhoAGTP、RhoGEF(Rho Guanine Nucleotide Exchange Factors,RhoGEF)的表達(dá)。結(jié)果AngⅡ處理組磷酸化MLC蛋白的表達(dá)顯著增強(qiáng)(P=0.000)。Ang-(1-7)可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的HSC的收縮。AngⅡ+Ang-(1-7)處理組可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的MLC蛋白磷酸化水平(P=0.000),而Ang-(1-7)處理組磷酸化MLC蛋白水平顯著高于A(yíng)ng-(1-7)+A779處理組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。AngⅡ處理組α-SMA蛋白的表達(dá)顯著增強(qiáng)(P=0.000),AngⅡ+Ang-(1-7)處理組可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的α-SMA蛋白表達(dá)水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。AngⅡ組RhoGEF mRNA顯著高于陰性對(duì)照組(P=0.000),Ang-(1-7)+AngⅡ組RhoGEF mRNA比AngⅡ組的表達(dá)顯著減弱(P=0.000),Ang-(1-7)組RhoGEF mRNA顯著低于陰性對(duì)照組(P=0.000),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。AngⅡ組Rock2 mRNA顯著高于陰性對(duì)照組(P=0.000),Ang-(1-7)+AngⅡ組Rock2 mRNA比AngⅡ組的表達(dá)顯著減弱(P=0.000),Ang-(1-7)組Rock2 mRNA顯著低于陰性對(duì)照組(P=0.000),Ang-(1-7)+A779組Rock2 mRNA的表達(dá)顯著低于A(yíng)ng-(1-7)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。AngⅡ組RhoAGTP mRNA顯著高于陰性對(duì)照組(P=0.000),Ang-(1-7)+AngⅡ組RhoAGTP mRNA比AngⅡ組的表達(dá)顯著減弱(P=0.000),Ang-(1-7)組RhoAGTP mRNA顯著低于陰性對(duì)照組(P=0.000),Ang-(1-7)+A779組RhoAGTP mRNA的表達(dá)顯著低于A(yíng)ng-(1-7)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。結(jié)論Ang-(1-7)可通過(guò)Rho-Rock信號(hào)通路抑制AngⅡ誘導(dǎo)的HSC收縮。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R575.2
【圖文】：

圖1:肋小Rock通路對(duì)HSC收縮的調(diào)控機(jī)制示意圖，肝內(nèi)腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)已成為肝纖維化研表明，肝臟等局部組織器官具有的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(AD一血管緊張素Hl型受體(ATIR)軸是RAS的主要途徑。隨

陰性對(duì)照組(xlOO)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 龔浩;王宇;張忠濤;李建設(shè);周延忠;;血管緊張素Ⅱ及其受體拮抗劑對(duì)肝星狀細(xì)胞收縮的影響[J];中華肝膽外科雜志;2006年10期

2 李旭,孟瑩,姜泊,楊希山,王衛(wèi)衛(wèi),郭丹,賴(lài)卓勝,張振書(shū);血管緊張素Ⅱ和醛固酮對(duì)肝星狀細(xì)胞核因子κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年06期

3 李旭,孟瑩,蔡紹曦,楊希山,張藝軍,吳平生;血管緊張素Ⅱ和醛固酮對(duì)肝星狀細(xì)胞細(xì)胞外通路調(diào)控的體外研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年26期

本文編號(hào)：2720157