【摘要】：目的： IBS（腸易激綜合征）是臨床上常見的一種功能紊亂性腸道疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，缺乏特異性的形態(tài)學(xué)改變及生化異常。本研究通過miRNA基因芯片技術(shù)分析比較IBS患者和正常人血清miRNA表達(dá)以尋找IBS的血清miRNA表達(dá)譜，通過實(shí)時(shí)定量PCR與生物信息學(xué)分析，達(dá)到對(duì)IBS血清miRNA表達(dá)譜的鑒定與功能分析的目的，為今后進(jìn)一步研究IBS的miRNA調(diào)控機(jī)制及分子診斷工具奠定分子基礎(chǔ)。 方法： （1）miRNA基因芯片檢測(cè)：miRNA基因芯片檢測(cè)便秘型IBS、腹瀉型IBS、正常人混合血清標(biāo)本，以尋找差異表達(dá)的miRNA。 （2）miRNA生物信息學(xué)分析：基于差異表達(dá)的miRNA，在TargetScan6.0數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行預(yù)測(cè)，得到差異miRNA調(diào)控的所有靶基因，基于NovelBio數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GO注釋和Pathway注釋，得到基因參與的所有GO和PathwayTerm，采用Fisher檢驗(yàn)計(jì)算每個(gè)GO和Pathway Term的顯著性水平，從而篩選出差異基因富集的顯著性GO和Pathway Term。分別將各組關(guān)注的顯著性GO和顯著性Pathway所對(duì)應(yīng)的基因提取出來(lái)，用提取出的各類基因與其所對(duì)應(yīng)的miRNA分別構(gòu)建miRNA-靶基因網(wǎng)絡(luò)。 （3）實(shí)時(shí)定量PCR分析：經(jīng)生物信息學(xué)分析得到在IBS中起核心調(diào)控作用的miRNA，采用實(shí)時(shí)定量PCR分析血清標(biāo)本中這些miRNA的表達(dá)，最后與miRNA基因芯片結(jié)果相比較。 研究結(jié)果： （1）血清miRNA表達(dá)譜 基因芯片結(jié)果通過Limma算法篩選差異表達(dá)的miRNA。與正常人相比，便秘型IBS患者14個(gè)血清miRNA存在顯著性表達(dá)差異，腹瀉型IBS患者24個(gè)血清miRNA存在顯著性表達(dá)差異，便秘型IBS和腹瀉型IBS患者均表達(dá)hsa-miR-449a、hsa-miR-210、hsa-miRPlus-I181b-2*（表3.2）。 （2）miRNA生物信息學(xué)分析 通過生物信息學(xué)分析，我們獲得3組與IBS相關(guān)的顯著性GO（便秘型IBS相關(guān)-神經(jīng)改變GO，信號(hào)通路GO，生化GO）、（腹瀉型IBS相關(guān)-神經(jīng)改變GO，信號(hào)通路GO，生化GO）及（便秘型IBS組-腹瀉型IBS組共有的差異miRNA相關(guān)-神經(jīng)發(fā)育與疼痛GO，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)GO，生化GO）（附錄A）。用以上顯著性GO對(duì)應(yīng)的各類基因與其所對(duì)應(yīng)的miRNA分別構(gòu)建miRNA-靶基因網(wǎng)絡(luò)（圖3.3），得到網(wǎng)絡(luò)中起核心調(diào)控作用的miRNA（表3.3）和被miRNA調(diào)控的關(guān)鍵靶基因。 （3）實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證miRNA miRNA-靶基因網(wǎng)絡(luò)中起核心調(diào)控作用的miRNA行實(shí)時(shí)定量PCR分析（圖3.4和表3.4，圖3.5和表3.5，圖3.6和表3.6），實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示miRNA表達(dá)趨勢(shì)與基因芯片分析結(jié)果一致（圖3.7，圖3.8，圖3.9）。 結(jié)論： （1）經(jīng)基因芯片及生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)了與IBS關(guān)系密切的血清miRNA表達(dá)譜。便秘型IBS組表達(dá)上調(diào)較顯著的miRNA為hsa-miR-3130-3p、hsa-miR-30c、hsa-miR-555，表達(dá)下調(diào)較顯著的miRNA為hsa-miR-210、hsa-miR-499a、hsa-miR-4289；腹瀉型IBS組表達(dá)上調(diào)較顯著的miRNA為hsa-miR-484、hsa-miR-3170、hsa-miR-335，表達(dá)下調(diào)較顯著的miRNA為hsa-miR-188-5p、hsa-miR-196a、hsa-miR-500a；兩組共同表達(dá)hsa-miR-210、hsa-miR-499a。 （2）通過定量PCR驗(yàn)證了miRNA表達(dá)與miRNA基因芯片結(jié)果一致，證明miRNA基因芯片結(jié)果是可靠的。 （3）特定的血清miRNA表達(dá)譜可能為診斷IBS提供一種新的非侵入性生物標(biāo)志。 （4）IBS患者相關(guān)miRNA可能通過神經(jīng)系統(tǒng)、生化、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)相關(guān)的多個(gè)靶基因和信號(hào)通路調(diào)節(jié)腦腸軸的變化、內(nèi)臟敏感性、腸道分泌功能及腸道平滑肌動(dòng)力而參與IBS發(fā)病。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R574
【圖文】：

便秘型IBS組、腹瀉型IBS組、正常對(duì)照組間miRNA表達(dá)的熱圖

圖 3.4 便秘型 IBS組 VS 對(duì)照組 miRNA實(shí)時(shí)定量 PCR 分析結(jié)果表 3.4 便秘型 IBS組 VS 對(duì)照組 miRNA實(shí)時(shí)定量 PCR 分析結(jié)果miRNA 名稱 正常組平均 2-"

本文編號(hào)：2713697