【摘要】： 背景和目的 脂肪肝是代謝綜合癥的表現(xiàn),早期表現(xiàn)為單純性脂肪變性,其后可能還會發(fā)生脂肪性肝炎,肝纖維化,肝硬化。它的高發(fā)病率越來越受到重視。積極研究開發(fā)治療脂肪肝的高效、價廉、方便、安全的藥物意義重大。本課題探討建立脂肪肝體外模型和動物模型,觀察姜黃素衍生物JZ2、SFR1和四氫姜黃素對體內外脂肪肝模型的保護作用。 方法 (1)采用油酸作用于肝癌細胞HepG2和人正常肝細胞株L02的方法在體外建立脂肪肝細胞模型,并應用MTT法篩選姜黃素衍生物JZ2、SFR1及四氫姜黃素作用于肝細胞的非細胞毒濃濃度,以油紅O染色,觀察不同給藥組非細胞毒濃度對細胞內脂滴形成情況,并檢測細胞上清液的ALT、AST及γ-GT。從而觀察藥物在體外抗脂肪肝的作用效果。(2)通過給予高脂飼料、腹腔注射四環(huán)素的復合方式建立小鼠脂肪肝的模型,同時給予不同劑量的姜黃素衍生物JZ2、SFR1和四氫姜黃素固體分散劑,于實驗第36天,取血及肝組織,計算肝指數(shù)、檢測血脂及肝功:血清TG、CHO、LDL-C、HDL-C、ALT、AST,肝臟內脂質:肝勻漿TG、CHO;采用肝臟冰凍切片及油紅0染色、病理切片等手段觀察肝臟的病理變化。從而觀察藥物在小鼠體內抗脂肪肝的療效。 結果 1.(1)通過MTT法篩選出姜黃素衍生物JZ2、SFR1的非細胞作用濃度為100 ug/ml、200 ug/ml、300 ug/ml、400 ug/ml,四氫姜黃素的非細胞作用濃度為10 ug/ml、20 ug/ml、30 ug/ml;(2)油紅O染色后,在光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)80 ug/ml油酸刺激HepG2細胞24小時后,模型組細胞內有大量的紅色脂滴積聚,48小時后紅色脂滴開始減少;60 ug/ml油酸刺激L02細胞24小時后,模型組細胞內有大量的紅色脂滴積聚,72小時后細胞紅色脂滴開始減少。間隔24小時兩次給藥,藥物作用于HepG2細胞48、72小時均未見脂滴減少;藥物作用于L02細胞48小時未見脂滴減少;藥物作用于L02細胞72小時隨著作用濃度的增加細胞內的脂滴逐漸減少。(3)用ImagePro Plus6.0圖像分析軟件分析藥物對油酸刺激48h后L02細胞的油紅O染色圖片,各給藥組與模型組比較,脂滴顯著減少(P㩳0.05)。其中四氫姜黃素30ug/ml,JZ2300ug/ml,SFR1400ug/ml差異有極顯著性區(qū)別(P㩳0.01)(4)檢測細胞上清液中ALT、AST、γ-GT,表明四氫姜黃素對肝功能影響較小,JZ2、SFR1對肝功能均有一定影響。 2.(1)通過給予高脂飼料、腹腔注射150mg/kg四環(huán)素的復合方式成功建立了小鼠脂肪肝的模型,與正常組相比,模型組小鼠的肝指數(shù)、血清TG、CHO、LDL-C、ALT、AST以及肝勻漿TG、CHO均顯著升高(P0.05)。肝臟冰凍切片油紅0染色、肝臟病理切片及HE染色也證實其發(fā)生了脂肪肝病變;(2)與模型組相比,四氫姜黃素固體分散劑對CHO、LDL-C、HDL-C有降低趨勢,但在低劑量組作用更顯著,部分數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學意義,對TG作用不明顯。在肝指數(shù)、肝內脂質特別是TG、肝功ALT、AST方面都有下降作用,且有明顯的劑量依賴關系。200mg/kg組、300mg/kg組對肝指數(shù)、肝內脂質(TG)、肝功ALT的改善具有統(tǒng)計學意義。冰凍切片油紅0染色及病理切片也證明四氫姜黃素對小鼠脂肪肝的保護作用。(3)與模型組比較,姜黃素衍生物JZ2在高、低劑量組對血脂TG、CHO、LDL-C有不同程度的降低,部分數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學意義, TG、HDL-C在低劑量組作用更好。SFR1高低劑量對血脂CHO、LDL-C不同程度的降低,部分數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學意義,但對TG影響不理想。兩藥對小鼠的肝指數(shù)、肝臟內脂質無明顯作用。冰凍切片油紅0染色及病理切片與模型組比較沒有明顯區(qū)別。 結論 (1)建立了較穩(wěn)定的脂肪肝體外篩藥模型:油酸刺激L02細胞48小時,在油酸刺激前24小時藥物給藥一次,24小時后與油酸一起再給藥一次,可以篩選出藥物的體外抗脂肪肝作用。(2)建立了小鼠脂肪肝模型:高脂飼料、腹腔注射150mg/kg四環(huán)素。(3)姜黃素衍生物JZ2、SFR1與四氫姜黃素均具有一定干預脂肪肝體外模型的作用,有效減少細胞內脂滴的形成,四氫姜黃素四氫姜黃素對肝功影響較小,JZ2、SFR1對肝功影響均較大。(4)姜黃素衍生物JZ2、SFR1在1000mg/kg內對血脂有改善作用,但對脂肪肝沒有保護作用。(5)四氫姜黃素固體分散劑對血脂有改善作用,但在低劑量100mg/kg作用更顯著,對脂肪肝有保護作用。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R575.5;R96
【圖文】：

復方蛋氨酸膽堿對油酸刺激

22圖 1-4 藥物對油酸刺激 48h 后 L02 細胞內脂滴的影響油紅 O 染色，A：正常組（×100） B：模型組（×100） C：正常組（×400） D模型組（×400） E：復方蛋氨酸膽堿 200 ug/ml（×400） F：復方蛋氨酸膽堿

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