發(fā)布時間：2020-06-14 05:42

【摘要】：目的：研究結締組織生長因子（Connective tissue growth factor，CTGF）和基質金屬蛋白酶組織抑制因子-1（Tissue inhibitor of metalloproteinase-1，，TIMP-1）短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）轉錄質粒重組體對肝纖維化大鼠肝臟組織CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-ⅢmRNA基因轉錄及CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白表達情況的影響，探索抗肝纖維化的機制，為肝纖維化的基因治療探索新思路。方法：50只清潔級Wistar雄性大鼠被隨機分為A組：雙重RNA干擾組；B組：CTGF干擾組；C組：TIMP-1干擾組；D組：空載質粒治療對照組；E組：模型對照組。每組大鼠腹腔注射1％DMN溶液，每次注射80μl／100g，每周連續(xù)注射3次，共3周。從第3周末開始尾靜脈高壓注射質粒干擾：A組注射psiRNA-GFP-Com（含有CTGF和TIMP-1)，B組注射psiRNA-GFP-CTGF，C組：注射psiRNA-GFP-TIMP-1，D組注射空載質粒psiRNA-DUO-GFPzeo，E組：不注射。每2周注射1次，共4次。所有大鼠于實驗第12周末處死，收集肝組織備用。各組肝臟組織中性甲醛固定后HE染色檢測肝組織病理形態(tài)學改變，免疫組織化學檢測各組肝組織中CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白表達情況。抽提各組肝臟組織RNA并逆轉錄成cDNA通過熒光定量PCR檢測各組肝臟組織的CTGF mRNA、TIMP-1mRNA、Col-Ⅰ mRNA及Col-Ⅲ mRNA的轉錄情況。結果：與模型對照組（E組）相比，空載質粒治療組（D組）CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ mRNA及肝臟組織中的CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白的表達均無差異，A組、B組、C組CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ mRNA的轉錄降低，肝臟組織中CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白的含量減少，其中雙重RNA干擾組psiRNA-GFP Com質粒轉染（A組）肝纖維化大鼠后其對Col-Ⅰ mRNA的轉錄及肝組織中Ⅰ型膠原的蛋白含量的抑制程度優(yōu)于單干擾組質粒轉染（P＜0.01或P＜0.05）。結論：1.針對CTGF和/或TIMP-1的RNA干擾可明顯抑制肝纖維化大鼠的CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ基因表達及相關蛋白的分泌。2.雙重聯(lián)合RNA干擾作為抗肝纖維化基因治療的方法，其治療效果可能會優(yōu)于單個RNA干擾。 【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R575.2

【圖文】：

圖 1-1 DNA 濃度和純度示意圖 圖 1-2 DNA 濃度和純度示意圖Fig1-1 & Fig1-2 The concentration and purity determine of DNA2 N-二甲基亞硝胺（DMN）誘導大鼠肝纖維化模型建立2.1 大鼠一般情況實驗前各組大鼠進食正常，體毛有光澤，活動可，反應好，大、小便正常。大鼠在實驗一周后，出現(xiàn)體毛無光澤，體重增長緩慢；實驗兩周后出現(xiàn)活動減少，尿黃，便溏；實驗三周后，有14只大鼠出現(xiàn)死亡，死亡率為28％。2.2 取肝臟組織行HE染色，鏡下可見肝細胞變性、壞死，竇周纖維化，匯管區(qū)纖維化擴大，小葉間有纖維間隔（圖2），證實DMN（N-二甲基亞

圖 1-1 DNA 濃度和純度示意圖 圖 1-2 DNA 濃度和純度示意圖Fig1-1 & Fig1-2 The concentration and purity determine of DNA2 N-二甲基亞硝胺（DMN）誘導大鼠肝纖維化模型建立2.1 大鼠一般情況實驗前各組大鼠進食正常，體毛有光澤，活動可，反應好，大、小便正常。大鼠在實驗一周后，出現(xiàn)體毛無光澤，體重增長緩慢；實驗兩周后出現(xiàn)活動減少，尿黃，便溏；實驗三周后，有14只大鼠出現(xiàn)死亡，死亡率為28％。2.2 取肝臟組織行HE染色，鏡下可見肝細胞變性、壞死，竇周纖維化，匯管區(qū)纖維化擴大，小葉間有纖維間隔（圖2），證實DMN（N-二甲基亞

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本文編號：2712373