發(fā)布時(shí)間：2020-06-13 01:25

【摘要】：目的構(gòu)建pGC-FU-survivin慢病毒質(zhì)粒,旨在下一步實(shí)驗(yàn)中利用survivin蛋白的表達(dá)影響原代肝細(xì)胞的增殖。方法從高表達(dá)survivin的小鼠淋巴瘤細(xì)胞株YAC-I中獲取存活素(survivin)基因,連接到pcDNA3.1(+)質(zhì)粒上,雙酶切及雙向測(cè)序鑒定。構(gòu)建pGC-FU-survivin慢病毒載體,從基因水平和蛋白質(zhì)水平鑒定含有survivin的目的片段表達(dá)。經(jīng)包裝、純化,獲得效價(jià)較高的病毒顆粒進(jìn)行下一步生物學(xué)功能研究。結(jié)果雙酶切及測(cè)序證實(shí)從YAC-I中獲得的survivin基因連接到pcDNA3.1(+)質(zhì)粒上,除第317位堿基由腺苷酸突變?yōu)樾叵汆奏ね?其余均與NCBI基因文庫(kù)中survivin基因切合,該突變不影響蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)生理功能。構(gòu)建pGC-FU-survivin表達(dá)質(zhì)粒的陽(yáng)性克隆菌株轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后,熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)綠色熒光,Western blot結(jié)果見(jiàn)一與標(biāo)準(zhǔn)品大小相同的條帶。在293T細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝,最終純化出pGC-FU-survivin慢病毒顆粒。結(jié)論借助T載體及pcDNA3.1(+)質(zhì)粒,成功地在pGC-FU慢病毒表達(dá)質(zhì)粒上建立了pGC-FU-survivin慢病毒表達(dá)質(zhì)粒。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張瑞;郭善禹;;肝臟功能重建的細(xì)胞來(lái)源[J];世界華人消化雜志;2007年11期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 聶廣;;從“毒損肝絡(luò)”假說(shuō)到肝病辨證體系的重構(gòu)[A];全國(guó)第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨國(guó)家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會(huì)議論文匯編[C];2008年

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1 張明;胞外蛋白酶抑制劑基因expi對(duì)大鼠肝再生的作用研究[D];河南師范大學(xué);2010年

2 高斯媛;pGC-FU-存活素慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建[D];華中科技大學(xué);2010年

3 高源;肝切除術(shù)后血清轉(zhuǎn)氨酶變化影響因素的臨床研究[D];青島大學(xué);2009年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李紹青;管利東;王韞芳;白慈賢;岳慧敏;閆舫;南雪;施雙雙;司徒鎮(zhèn)強(qiáng);裴雪濤;;人脂肪來(lái)源的干細(xì)胞體外培養(yǎng)特性及分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的研究[J];自然科學(xué)進(jìn)展;2006年04期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬巧玉，，張永明;急性重型病毒性肝炎22例臨床觀察[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;1996年03期

2 趙文利,孔祥英,劉力健;李斯特菌病并免疫性肝功能衰竭、肝性腦病搶救成功1例[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年04期

3 管彩霞;;乙型肝炎病毒感染所致肝功能衰竭的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)臨床預(yù)后的分析[J];山西醫(yī)藥雜志;2010年08期

4 陳波;;異甘草酸鎂治療病毒性肝炎180例臨床觀察[J];交通醫(yī)學(xué);2010年05期

5 張曉紅,馬會(huì)慧,崇雨田,肖杰生,姚集魯;慢性乙肝患者停用拉米夫定后出現(xiàn)肝功能衰竭的危險(xiǎn)因素[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2005年03期

6 古烈元;利福平與異煙肼合用治療肺結(jié)核發(fā)生肝功能衰竭1例死亡的教訓(xùn)[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1994年03期

7 韓德五;腸源性內(nèi)毒素血癥與肝功能衰竭[J];臨床肝膽病雜志;1996年01期

8 崔建軍;周伯平;戴煒;;拉米夫定阻斷慢性乙型肝炎進(jìn)展的臨床對(duì)照研究[J];中華肝臟病雜志;2006年04期

9 李保森;鄒正升;張偉;趙軍;常彬霞;唐彥;尚麗丹;;215例急性和亞急性重型肝炎臨床特征對(duì)比性分析[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2006年03期

10 ;簡(jiǎn)訊[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);1990年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 ;Association of special skin lesion due to hot resistant Trichophyton rubrum and its variation in molecular biology[A];Final Program Abstracts & Papers Book of International Forum 2003 Academic Conference of Dermatology of the Integration of TCM with Western Medicine[C];2003年

2 孔祥平;任向榮;;RNA干擾抑制乙型肝炎病毒的研究進(jìn)展[A];2006年慢性乙型肝炎治療進(jìn)展研討會(huì)資料匯編[C];2006年

3 吳金明;黃智銘;吳建勝;陳向榮;林菊生;;MxA基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及體外抗HBV作用研究[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化專業(yè)第八次學(xué)術(shù)年會(huì)暨省中西醫(yī)結(jié)合消化系疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

4 鞠瑛;侯楠;張曉寧;趙地;劉瑩;朱法良;高立芬;馬春紅;;慢性乙型肝炎患者NK細(xì)胞中TIM-3的表達(dá)及其作用研究[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

5 朱函坪;姚蘋蘋;徐芳;翁景清;謝榮輝;朱智勇;;漢坦病毒Z10株N蛋白的表達(dá)及其在HFRS早期診斷中的應(yīng)用[A];2006年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 溫志立;楊鐵一;付唆林;徐鏗;譚德明;;HBV基因型與乙型病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制關(guān)系的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

7 雷艷君;高晨;安潤(rùn);陳建明;石琦;姜慧英;韓俊;董小平;;一種新的HPV的檢測(cè)方法及巨大疣患者感染的HPV-2變異株啟動(dòng)子活性的研究[A];第七屆全國(guó)病毒學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第二屆武漢現(xiàn)代病毒學(xué)國(guó)際研討會(huì)論文集[C];2007年

8 樊和斌;楊東亮;;中國(guó)旱獺Ⅰ型干擾素受體的克隆及其功能的初步研究[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

9 鄭煜煌;張春迎;何艷;李慧;諶資;劉猛;周華英;劉純;李靖;尹偉;袁宏麗;;不同變異位點(diǎn)的HIV-1 vpr重組真核表達(dá)載體對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡作用的觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四次全國(guó)艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國(guó)熱帶病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

10 劉琴;;59例重型病毒性肝炎心電圖分析[A];2002全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前7條

1 高國(guó)起;乙肝基因治療研究獲進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

2 程書(shū)權(quán);關(guān)注拉米夫定的不良反應(yīng)[N];健康報(bào);2003年

3 美訊;美調(diào)查顯示應(yīng)加強(qiáng)對(duì)丙肝的認(rèn)識(shí)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

4 本報(bào)記者 王峰;乙肝用藥 適可而止[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2001年

5 本報(bào)記者 楊銳;丙肝：危害不亞于乙肝[N];健康時(shí)報(bào);2003年

6 ;豬肝細(xì)胞型生物人工肝治療后豬逆轉(zhuǎn)錄病毒感染人體的追蹤觀察[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

7 孫靜媛;乙肝病人防止重疊感染戊肝病毒[N];健康報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 尹光文;尖銳濕疣組織中survivin、bax、caspase-3和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡、臨床預(yù)后關(guān)系研究[D];鄭州大學(xué);2006年

2 趙艷豐;鴨乙型肝炎病毒感染鴨原代肝細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析及鴨Annexin A2在DHBV感染中作用的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

3 應(yīng)松成;胞嘧啶脫氨酶APOBEC3G和APOBEC3F抗病毒調(diào)控機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2007年

4 呂麗萍;hTERT修飾的成人肝細(xì)胞及其對(duì)肝炎病毒易感性的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

5 洪梅;艾滋病的靶向基因治療[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

6 郜玉峰;外源性microRNA阻斷HBV和HBV復(fù)制相關(guān)的宿主基因表達(dá)對(duì)HBV復(fù)制水平的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

7 王洪武;雙陰性T細(xì)胞在小鼠病毒性暴發(fā)型肝炎中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2009年

8 鞠瑛;Tim-3在HBV慢性感染中的表達(dá)及作用研究[D];山東大學(xué);2009年

9 虞瑛姿;胞嘧啶脫氨酶APOBEC3DE和APOBEC3B對(duì)乙型肝炎病毒抑制研究[D];浙江大學(xué);2011年

10 劉水平;HCV 5'NCR和NS3絲氨酸蛋白酶蛋白酶共調(diào)控SEAP表達(dá)的細(xì)胞模型的建立及初步應(yīng)用[D];中南大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高斯媛;pGC-FU-存活素慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建[D];華中科技大學(xué);2010年

2 許向前;Livin、Survivin和Fas在尖銳濕疣組織中表達(dá)及相互關(guān)系研究[D];暨南大學(xué);2009年

3 陳豪;乙肝病毒X基因（HBVX）慢病毒載體的構(gòu)建和鑒定[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

4 李t熑

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