【摘要】：目的:探討HBV cccDNA、HBV tDNA在HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為臨床上原發(fā)性肝細(xì)胞癌的預(yù)防和治療提供理論根據(jù)。 方法:應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)33例慢性HBV感染病人肝穿組織(慢性HBV感染組)、60例HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌病人癌組織(肝癌組)、及其癌旁組織(癌旁組)肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA和HBV tDNA載量,HE染色和免疫組化法定性檢測(cè)肝細(xì)胞HBsAg、HBcAg、炎癥活動(dòng)度和纖維化分級(jí)。用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)分析,分別進(jìn)行肝癌組織、癌旁組織、慢性HBV感染肝組織細(xì)胞HBV cccDNA、HBV tDNA與血清HBVDNA的相關(guān)分析,比較三種組織肝細(xì)胞HBV cccDNA、HBV tDNA、cccDNA/HBV tDNA的差異,分別比較三組肝細(xì)胞HBsAg、HBcAg不同表達(dá)模式間HBV cccDNA、HBV tDNA載量,進(jìn)行HBV cccDNA、HBV tDNA載量與炎癥活動(dòng)度和纖維化程度的相關(guān)分析。 結(jié)果:(1)肝癌組織肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA、tDNA載量和血清HBV DNA水平無(wú)明顯相關(guān)(分別為r=0.165、P=0.206, r=0.122、P=0.352);慢性HBV感染組織肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA、tDNA載量和血清HBV DNA水平成低度正相關(guān)(分別為r=0.356、P=0.042,r=0.496、P=0.003)。(2)癌組織肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA、HBV tDNA載量均高于癌旁組織(P=0.000、0.042) ,與慢性HBV感染組沒(méi)有顯著差異(P=0.4、0.446);慢性HBV感染組織中HBV cccDNA、HBV tDNA載量顯著高于癌旁組織(P=0.041、0.001)(3)癌組織肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA /HBV tDNA值均高于癌旁和慢肝組(P=0.025、0.011),慢性HBV感染組織細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA/HBV tDNA值與癌旁組織無(wú)明顯差異(P=0.752);(4)4例血清HBV DNA、HBsAg陰性及HBcAb陽(yáng)性的肝癌患者癌及癌旁組織中均檢測(cè)到HBV cccDNA的存在,且HBVcccDNA/HBV tDNA值均較高,最高達(dá)0.973;(5)肝癌組、癌旁組和慢性HBV感染組肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA、HBV tDNA載量在HBsAg、HBcAg不同表達(dá)模式間沒(méi)有明顯差異(P值均0.05);(6)肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA和HBV tDNA載量與肝組織炎癥活動(dòng)度和纖維化程度沒(méi)有相關(guān)性(P值均0.05)。 結(jié)論:(1)HBV病毒復(fù)制活躍時(shí),血清HBV DNA與肝細(xì)胞HBV cccDNA相應(yīng)升高。對(duì)于肝癌細(xì)胞,盡管HBVcccDNA轉(zhuǎn)錄rc DNA活性不高,即使血清HBV DNA不能檢出,甚至HBsAg陰性,在肝細(xì)胞仍可檢測(cè)到高載量的HBV cccDNA。(2) HBV在肝癌發(fā)生中起主要作用的可能是cccDNA而不是rcDNA。(3)HBsAg和HBcAg表達(dá)模式反映肝細(xì)胞內(nèi)cccDNA、tDNA的動(dòng)力學(xué)不敏感。(4)肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA和HBV tDNA并非導(dǎo)致肝組織病變的直接原因。
【圖文】：

圖 1-1 HBV cccDNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線2.4.3 HBV tDNA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)用質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品制作 HBV tDNA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線，反應(yīng)體系、條同 HBV cccDNA 體系，標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)為 109、108、107、106、105所得曲線回歸方程式為：Y（CT）=45.717-3.241X，R2=0.995，如1-2 所示：

圖 1-2 HBV tDNA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線2.4.4 β-2M 標(biāo)準(zhǔn)品的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線取 5μl 肝組織核酸抽提物，加入 20μl 的反應(yīng)體系中。反應(yīng)條件為：94 ℃ 3min；94 ℃ 30s、54℃ 30s、72℃ 1min共35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5min。反應(yīng)所得PCR液使用TIANGEN普通PCR產(chǎn)物純化試劑盒進(jìn)行純化，按說(shuō)明書操作。取 5μl 純化產(chǎn)物溶于 45μl 去離子水中。用紫外線分光光度計(jì)檢測(cè)，取 OD260 值，，計(jì)算出濃度，并做成系列梯度的標(biāo)準(zhǔn)品，濃度（copies/μl）分別為：109、108、107、106、105。制作 β-2M 標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得曲線回歸方程式為：Y（CT）=42.32-3.415X，R2=0.996，如圖 1-3 所示：
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R735.7;R512.62

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 馬艷麗;任萬(wàn)華;主余華;孫寶泉;董振芳;;定量檢測(cè)乙型肝炎病毒cccDNA的臨床意義[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2006年01期

2 馬艷麗;任萬(wàn)華;董振芳;主余華;;乙型肝炎病毒cccDNA定量與乙型肝炎臨床及病理關(guān)系[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2005年06期

3 周平,張木森,蔡慶,陳友純,李曉娟,于建國(guó),關(guān)鍵,劉春靈;PCR檢測(cè)HBV感染患者血清HBV DNA的臨床意義[J];華人消化雜志;1998年03期

4 Johnny Sze;;HBV cccDNA in patients' sera as an indicator for HBV reactivation and an early signal of liver damage[J];World Journal of Gastroenterology;2004年01期

本文編號(hào)：2707222