【摘要】： 研究背景 脂肪肝已經(jīng)成為發(fā)達國家和富裕地區(qū)慢性肝病的首要病因,在我國是僅次于乙肝病毒的第二位慢性肝病的原因,嚴重影響國民的健康水平及生活質(zhì)量,因此,有關脂肪肝的研究始終是一個熱點問題。法尼醇X受體(farnesoid X receptor,FXR)、小異二聚體伴侶分子(small heterodimer partner,SHP)、固醇調(diào)節(jié)元件結合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein-1c, SREBP-1c)屬于核受體或核轉錄因子,其中初級膽酸是FXR的天然激動劑。FXR廣泛參與膽汁酸、糖及脂代謝,有可能成為治療脂肪肝和代謝性疾病的新的靶點;SHP在膽汁酸、糖、脂代謝中也具有重要作用,是脂肪肝發(fā)病中的關鍵調(diào)節(jié)因子; SREBP-1c參與脂肪生成基因表達的調(diào)控;其中SHP是FXR的靶基因,SREBP-1c是SHP的靶基因。本實驗采用油酸鈉誘導人正常肝細胞珠L02細胞建立脂肪變肝細胞模型、采用FXR激動劑鵝去氧膽酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)鈉鹽建立干預模型,動態(tài)觀察肝細胞脂變過程中FXR、SHP及SREBP-1c表達的變化,從肝細胞水平探討非酒精性脂肪肝脂質(zhì)沉積的可能機制,為尋找新的治療靶點提供實驗依據(jù)。 方法 1、人肝細胞株L02用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)、傳代。 2、MTT比色法篩選油酸鈉最佳作用濃度和作用時間。 3、實驗設立對照組(記為C組)、模型組(加油酸鈉,記為F組)和干預組(模型中加入鵝去氧膽酸鈉【1】,記為F1組)。 4、細胞內(nèi)TG含量檢測及油紅O染色鑒定L02肝細胞脂肪變變化;細胞培養(yǎng)上清ALT、AST含量鑒定細胞損傷變化;RT-PCR、Western Blot檢測FXR、SHP、SREBP-1c受體mRNA及蛋白表達變化。 結果 1、L02肝細胞的脂肪變模型建立成功。隨著造模時間延長,肝細胞脂肪變程度加重。 1)油紅O染色:對照組僅見少量橘紅色脂滴;脂變和干預組肝細胞內(nèi)各時間段都可見明顯脂滴,并有不同程度的融合,隨著培養(yǎng)時間延長加重;但是,干預組的肝細胞內(nèi)脂滴較脂變組有所減少(P0.01)。 2)脂變組TG含量在24、48、72h各時間段均比對照組明顯增加(P0.01);與脂變組相比,干預組TG含量在24、48、72h時相應時間段均明顯降低(P0.01)。 2、各組細胞培養(yǎng)上清ALT、AST變化僅脂變組72小時AST、ALT水平略有升高,各組均無明顯差異(P0.05)。 3、各組細胞內(nèi)FXR、SHP、SREBP-1 c mRNA及蛋白表達的變化與對照組比較,脂變組各時間段的FXRmRNA及蛋白表達均有所下調(diào),但這種差別無統(tǒng)計學意義(P0.05);而SHP、SREBP-1c mRNA及蛋白表達明顯上調(diào),并隨培養(yǎng)時間延長更明顯(P0.01)。在干預組,FXRmRNA及蛋白的表達較脂變組和對照組明顯升高,各時間點比較都具有顯著性差異(P0.01);SHPmRNA及蛋白表達同步升高(P0.01);SREBP-1c mRNA及蛋白雖然比對照組明顯上調(diào)(P0.01),但是與脂變組相比顯著降低(P0.01)。 結論 1、FXR表達下調(diào)與肝細胞脂肪沉積密切相關; 2、促進FXR表達可能通過上調(diào)SHP的水平、抑制其靶基因SREBP-1c表達而改善L02細胞脂肪變性; 3、SHP在L02細胞脂肪變性中可能具有雙向調(diào)節(jié)作用; 4、FXR有可能成為治療脂肪肝的新靶點,FXR激動劑鵝去氧膽酸鈉具有明顯改善肝細胞脂肪變性的作用。
【圖文】：

37附圖 1 油紅 O 染色觀察各組細胞的形態(tài)學變化（x400）Figure 1 The accumulation of lipid droplets in the hepatocytes was observed by opticalmicroscopy（x400） after with oil red O staining.A 正常對照組(A1:24h,A2:48h,A3:72h)；B 脂肪變組，24 小時；C 干預組，24 小時； D 脂肪變組，48 小時；E 干預組，48 小時；F 脂肪變組，72 小時；G 干預組，72 小時。A control(A1:24h,A2:48h,A3:72 hour)；B steatosis model，24 hour；C intervention model，24 hour；D steatosis model，48 hour；E intervention model，48 hour；F steatosis model，72 hour；Gintervention model，72 hour。

附圖 2 各組 FXR、SHP、SREBP-1c 蛋白的表達Figure 2 Expressio of protein of FXR,SHP and SREBP-1c in each groupA 正常對照組；B 脂肪變組，24 小時；C 干預組，24 小時； D 脂肪變組，48 小時；E 干預組，48 小時；F 脂肪變組，72 小時；G 干預組，72 小時。A control，24 hour；B steatosis model，24 hour；C intervention model，，24 hour；D steatosis model，48 hour；E intervention model，48 hour；F steatosis model，72 hour；G intervention model，72hour。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R575.5

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本文編號：2706316