【摘要】：目的病毒性肝炎、肝癌、肝硬化及肝衰竭等肝病在我國(guó)高發(fā),嚴(yán)重威脅人們的生命健康,肝切除及肝臟移植手術(shù)是治療許多肝臟疾病的有效手段,因此改善肝臟功能、促進(jìn)肝再生對(duì)于減輕肝損傷、提高患者預(yù)后意義重大。當(dāng)前,關(guān)于miRNA與肝再生的研究越來(lái)越多,但其具體機(jī)制尚未完全闡述。本研究通過(guò)探討微小RNA-138-5p靶向調(diào)控Atg7介導(dǎo)的自噬對(duì)小鼠肝部分切除術(shù)后肝再生的作用及機(jī)制,以期對(duì)臨床工作中肝保護(hù)提供新的思路。方法按隨機(jī)數(shù)字表法對(duì)小鼠進(jìn)行分組。建立小鼠70%肝部分切除模型,qRT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)殘肝組織內(nèi)miRNA-138-5p相對(duì)表達(dá)量。常規(guī)培養(yǎng)AML12小鼠肝細(xì)胞,以0～25ng/μl不同濃度的HGF(肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子)處理AML12細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)miRNA-138-5p相對(duì)表達(dá)量。以miR-138-5p模擬物處理AML12小鼠肝細(xì)胞和小鼠,利用CCK-8法、EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)法和免疫組化染色檢測(cè)肝細(xì)胞增殖情況。術(shù)前7d用miR-182-5p模擬物及其對(duì)照處理小鼠,術(shù)后檢測(cè)肝/體重比變化情況。Western blot檢測(cè)小鼠70%肝部分切除術(shù)后殘肝組織內(nèi)LC3表達(dá)變化情況。miR-138-5p模擬物處理AML12細(xì)胞后,GFP-RFP-LC3自噬雙標(biāo)腺病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后熒光顯微鏡下觀察自噬體形成情況。使用miR-138-5p模擬物及自噬抑制劑3-MA分別處理細(xì)胞和小鼠,CCK-8檢測(cè)肝細(xì)胞增殖變化情況。Targetscan7.2分析miR-138-5p與Atg7基因相關(guān)性。Western blot檢測(cè)miR-138-5p模擬物或抑制物處理細(xì)胞后Atg7表達(dá)情況。以miR-138-5p模擬物和Atg7特定干擾RNA同時(shí)處理肝細(xì)胞后,免疫熒光染色檢測(cè)LC3表達(dá)分布情況和EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)法檢測(cè)肝細(xì)胞增殖變化情況。結(jié)果HGF處理細(xì)胞后,miR-138-5p表達(dá)量升高,且具有濃度依賴型。肝部分切除術(shù)后殘余肝組織內(nèi)miR-138-5p表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高,于術(shù)后36h達(dá)峰值,隨后逐漸降至正常。過(guò)表達(dá)miR-138-5p,可促進(jìn)肝細(xì)胞增殖,促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)PCNA表達(dá)和增強(qiáng)肝再生。肝部分切除術(shù)后殘余肝組織內(nèi)LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)降低。過(guò)表達(dá)miR-138-5p可抑制肝細(xì)胞自噬。抑制自噬可增強(qiáng)miR-138-5p對(duì)肝再生的促進(jìn)作用。Targetscan7.2預(yù)測(cè)顯示miR-138-5p與Atg7具有基因相關(guān)性。過(guò)表達(dá)miR-138-5p可抑制肝細(xì)胞內(nèi)Atg7表達(dá),而抑制miR-138-5p可促進(jìn)Atg7表達(dá)。使用Atg7特定干擾RNA抑制Atg7表達(dá),可抑制自噬,并能促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。結(jié)論肝部分切除可誘導(dǎo)miR-138-5p表達(dá)升高,促進(jìn)肝再生;miR-138-5p可通過(guò)靶向調(diào)控Atg7抑制肝細(xì)胞自噬,從而發(fā)揮促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和肝再生的作用。因此,miR-138-5p可抑制肝細(xì)胞自噬,促進(jìn)肝部分切除后肝再生。在小鼠肝再生中,miR-138-5p可通過(guò)介導(dǎo)Atg7調(diào)節(jié)自噬,以減輕肝部分切除術(shù)后細(xì)胞自噬對(duì)于肝臟組織的損傷、促進(jìn)肝再生,最終發(fā)揮肝保護(hù)作用。
【圖文】：

較閾值法進(jìn)行定量分析，其計(jì)算方法為t目的基因 Ct內(nèi)參，△△Ct=△Ct實(shí)驗(yàn)組-△Ct對(duì)照0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。計(jì)量資驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析，P AML12 細(xì)胞內(nèi) miR-138-5p 表達(dá)情況養(yǎng)至濃度約 70%~80%，以 0~25ng/μl 不同30ng/μl）的 HGF 處理細(xì)胞，qRT-PCR 檢 miR-138-5p 上調(diào)水平具有 HGF 的劑量依達(dá)水平越高（P＜0.05）。（見(jiàn)圖 1）

2. 70%PH 后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠肝組織內(nèi) miR-138-5p 表達(dá)一種具有顯著自我再生能力的器官，在肝部分切除術(shù)（嚙齒動(dòng)物的肝再生已成為研究再生器官生長(zhǎng)的典型模型慢性肝病、PH 術(shù)后肝功能不全、劈裂式肝移植和活體肝iRNA 是一類(lèi)具有 19~24 個(gè)核苷酸的小非編碼 RNA，能負(fù)表達(dá)；已發(fā)現(xiàn)超過(guò) 2500 種人類(lèi) miRNA 在各種生理和病，，如胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖分化、細(xì)胞周期進(jìn)程、細(xì)胞凋新陳代謝等[18]。miRNA 在腫瘤生物學(xué)中的作用已被廣泛iRNA 與肝細(xì)胞癌（HCC）有關(guān)，例如 miR-372、miR-10 miR-452 在 HCC 腫瘤中表達(dá)上調(diào)，而 miR-200、miR-141、miR-199a 和 miR-199b 表達(dá)下調(diào)[19-20]。肝癌組織、血清和A 異常表達(dá)，因此有望用于監(jiān)測(cè)多種類(lèi)型肝臟疾病，如病
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R575

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1 解景東;楊寶山;;肝再生機(jī)制研究現(xiàn)況[J];肝臟;2014年12期

2 李瀚e

本文編號(hào)：2703845