發(fā)布時間：2020-06-08 23:51

【摘要】：目的病毒性肝炎、肝癌、肝硬化及肝衰竭等肝病在我國高發(fā),嚴重威脅人們的生命健康,肝切除及肝臟移植手術是治療許多肝臟疾病的有效手段,因此改善肝臟功能、促進肝再生對于減輕肝損傷、提高患者預后意義重大。當前,關于miRNA與肝再生的研究越來越多,但其具體機制尚未完全闡述。本研究通過探討微小RNA-138-5p靶向調控Atg7介導的自噬對小鼠肝部分切除術后肝再生的作用及機制,以期對臨床工作中肝保護提供新的思路。方法按隨機數(shù)字表法對小鼠進行分組。建立小鼠70%肝部分切除模型,qRT-PCR檢測不同時間點殘肝組織內(nèi)miRNA-138-5p相對表達量。常規(guī)培養(yǎng)AML12小鼠肝細胞,以0～25ng/μl不同濃度的HGF(肝細胞生長因子)處理AML12細胞,qRT-PCR檢測miRNA-138-5p相對表達量。以miR-138-5p模擬物處理AML12小鼠肝細胞和小鼠,利用CCK-8法、EdU細胞增殖檢測法和免疫組化染色檢測肝細胞增殖情況。術前7d用miR-182-5p模擬物及其對照處理小鼠,術后檢測肝/體重比變化情況。Western blot檢測小鼠70%肝部分切除術后殘肝組織內(nèi)LC3表達變化情況。miR-138-5p模擬物處理AML12細胞后,GFP-RFP-LC3自噬雙標腺病毒轉染細胞后熒光顯微鏡下觀察自噬體形成情況。使用miR-138-5p模擬物及自噬抑制劑3-MA分別處理細胞和小鼠,CCK-8檢測肝細胞增殖變化情況。Targetscan7.2分析miR-138-5p與Atg7基因相關性。Western blot檢測miR-138-5p模擬物或抑制物處理細胞后Atg7表達情況。以miR-138-5p模擬物和Atg7特定干擾RNA同時處理肝細胞后,免疫熒光染色檢測LC3表達分布情況和EdU細胞增殖檢測法檢測肝細胞增殖變化情況。結果HGF處理細胞后,miR-138-5p表達量升高,且具有濃度依賴型。肝部分切除術后殘余肝組織內(nèi)miR-138-5p表達量隨時間延長逐漸升高,于術后36h達峰值,隨后逐漸降至正常。過表達miR-138-5p,可促進肝細胞增殖,促進肝細胞內(nèi)PCNA表達和增強肝再生。肝部分切除術后殘余肝組織內(nèi)LC3Ⅱ/Ⅰ表達降低。過表達miR-138-5p可抑制肝細胞自噬。抑制自噬可增強miR-138-5p對肝再生的促進作用。Targetscan7.2預測顯示miR-138-5p與Atg7具有基因相關性。過表達miR-138-5p可抑制肝細胞內(nèi)Atg7表達,而抑制miR-138-5p可促進Atg7表達。使用Atg7特定干擾RNA抑制Atg7表達,可抑制自噬,并能促進肝細胞增殖。結論肝部分切除可誘導miR-138-5p表達升高,促進肝再生;miR-138-5p可通過靶向調控Atg7抑制肝細胞自噬,從而發(fā)揮促進肝細胞增殖和肝再生的作用。因此,miR-138-5p可抑制肝細胞自噬,促進肝部分切除后肝再生。在小鼠肝再生中,miR-138-5p可通過介導Atg7調節(jié)自噬,以減輕肝部分切除術后細胞自噬對于肝臟組織的損傷、促進肝再生,最終發(fā)揮肝保護作用。
【圖文】：

較閾值法進行定量分析，其計算方法為t目的基因 Ct內(nèi)參，△△Ct=△Ct實驗組-△Ct對照0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析處理。計量資驗，多組間比較用單因素方差分析，P AML12 細胞內(nèi) miR-138-5p 表達情況養(yǎng)至濃度約 70%~80%，以 0~25ng/μl 不同30ng/μl）的 HGF 處理細胞，qRT-PCR 檢 miR-138-5p 上調水平具有 HGF 的劑量依達水平越高（P＜0.05）。（見圖 1）

2. 70%PH 后不同時間點小鼠肝組織內(nèi) miR-138-5p 表達一種具有顯著自我再生能力的器官，在肝部分切除術（嚙齒動物的肝再生已成為研究再生器官生長的典型模型慢性肝病、PH 術后肝功能不全、劈裂式肝移植和活體肝iRNA 是一類具有 19~24 個核苷酸的小非編碼 RNA，能負表達；已發(fā)現(xiàn)超過 2500 種人類 miRNA 在各種生理和病，，如胚胎發(fā)育、細胞增殖分化、細胞周期進程、細胞凋新陳代謝等[18]。miRNA 在腫瘤生物學中的作用已被廣泛iRNA 與肝細胞癌（HCC）有關，例如 miR-372、miR-10 miR-452 在 HCC 腫瘤中表達上調，而 miR-200、miR-141、miR-199a 和 miR-199b 表達下調[19-20]。肝癌組織、血清和A 異常表達，因此有望用于監(jiān)測多種類型肝臟疾病，如病
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R575

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本文編號：2703845