【摘要】：背景 肝纖維化是肝炎發(fā)展至肝硬化和肝癌的中間過(guò)程,在肝纖維化發(fā)生的過(guò)程中，，肝星狀細(xì)胞激活為肌成纖維細(xì)胞也是關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。肝星狀細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、趨化因子、氧化應(yīng)激產(chǎn)物和其它細(xì)胞因子的協(xié)同作用，構(gòu)成了一個(gè)以介質(zhì)-靶點(diǎn)-細(xì)胞外基質(zhì)間相互作用網(wǎng)絡(luò)。烏司他丁是一種胰蛋白酶抑制劑，具有迅速而且高效的抑酶作用，具有抑制溶酶體酶等多種水解酶的過(guò)度釋放，清除氧自由基、穩(wěn)定細(xì)胞器膜，抑制心肌細(xì)胞抑制因子、改善微循環(huán)等多種作用。目前烏司他丁對(duì)改善肝纖維化的作用尚未完全明確。 目的 建立大鼠肝纖維化模型，并通過(guò)該模型探討烏司他丁對(duì)肝纖維化的影響效果。 方法 1.預(yù)實(shí)驗(yàn)建模：按照誘導(dǎo)藥物的不同分設(shè)對(duì)照組、四氯化碳（CCl4）組、硫代乙酰胺（TAA）組和豬血清組；測(cè)定大鼠血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、丙二醛（MDA）、透明質(zhì)酸（HA）、超氧化物歧化酶（SOD）。取各組大鼠肝組織行HE染色，根據(jù)HE染色結(jié)果對(duì)各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)肝纖維化程度進(jìn)行分級(jí)和評(píng)分,判定肝纖維化造模效果。 2.烏司他丁干預(yù)肝纖維化大鼠實(shí)驗(yàn)：正常大鼠-A組作為對(duì)照組，TAA誘導(dǎo)的肝纖維化模型分為兩組，模型鼠+生理鹽水-B組、模型鼠+烏司他丁-C組,對(duì)比兩組大鼠血清中的AST、ALT、SOD、HA、MDA、LN變化；檢測(cè)肝臟瞬時(shí)彈性超聲，觀察大鼠肝臟HE、MASSON和天狼星紅染色；分析大鼠肝組織中β1型轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β1）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白含量。 結(jié)果 預(yù)實(shí)驗(yàn)建模： 1.三組大鼠隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加，體重增加不明顯。 2.血清指標(biāo)變化：在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，CCl4組和豬血清組ALT未見(jiàn)明顯升高（P0.05），而AST濃度均顯著高于對(duì)照組（P0.05）。CCl4組AST濃度在第3周顯著升高，而在第6、9周時(shí)，反而有所好轉(zhuǎn)。TAA組、豬血清組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)HA和AST濃度升高顯著。三個(gè)造模組MDA濃度在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有所升高，TAA組增加最明顯。 3.肝纖維化分級(jí)：在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，造模三組與對(duì)照組相比，肝纖維化分級(jí)(SSS半定量計(jì)分系統(tǒng))差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。第9周時(shí)，TAA組的平均SSS計(jì)分2.37±0.16高于其余3組。CCl4組的SSS評(píng)分為2.21±0.24，與豬血清組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 烏司他丁干預(yù)肝纖維化大鼠實(shí)驗(yàn)： 1.血清檢測(cè)結(jié)果：經(jīng)過(guò)不同藥物3周的干預(yù)，模型鼠+烏司他丁-C組的ALT值是264.15±30.48、模型鼠+生理鹽水-B組是374.85±34.21，兩組比較P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型鼠+烏司他丁-C組的AST值是231.87±19.19、模型鼠+生理鹽水-B組是477.45±42.29，兩組比較P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型鼠+烏司他丁-C組的SOD值是331.64±34.47、模型鼠+生理鹽水-B組是312.66±30.45，兩組比較P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型鼠+烏司他丁-C組的HA值是209.8±17.63、模型鼠+生理鹽水-B組是452.17±21.69，兩組比較P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型鼠+烏司他丁-C組的LN值是151.5±23.43、模型鼠+生理鹽水-B組是198.7±23.65，兩組比較P0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.瞬時(shí)彈性超聲檢測(cè)：不同藥物干預(yù)3周后，模型鼠+烏司他丁-C組大鼠彈性數(shù)值變化較大，為1.50±0.19kPa,與干預(yù)前相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。模型鼠+生理鹽水-B組大鼠彈性數(shù)值較干預(yù)前未有明顯恢復(fù)。與干預(yù)前的彈性數(shù)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3. HE染色：模型鼠+烏司他丁-C組可見(jiàn)中央靜脈區(qū)域周圍有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞呈氣球樣變，肝細(xì)胞壞死灶并未增多，膠原纖維略有增生，小葉結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞排列無(wú)序。模型鼠+生理鹽水-B組鏡下可見(jiàn)，中央靜脈區(qū)域周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較模型鼠+烏司他丁-C組嚴(yán)重，肝膠原纖維增，細(xì)胞排列雜亂無(wú)章。 4.天狼猩紅染色：各組天狼猩紅染色結(jié)果可以看出，模型鼠+烏司他丁-C組的Ⅰ型膠原纖維和Ⅲ型膠原纖維的含量明顯低于模型鼠+生理鹽水-B組。 5.免疫組化染色：模型鼠+生理鹽水-B組大鼠免疫組化染色切片內(nèi)可見(jiàn)大量廣泛分布的棕黃色顆粒，肝組織細(xì)胞包漿及周圍都有強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。模型鼠+烏司他丁-C組可見(jiàn)棕黃色染色顆粒散在分布于肝小葉中央靜脈及匯管區(qū)周圍，TGF-β1、caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞率明顯低于模型鼠+生理鹽水-B組大鼠。 結(jié)論 TAA誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的效果比較可靠。對(duì)TAA建立的大鼠肝纖維化模型，使用烏司他丁能夠改善其肝纖維化的損傷程度，通過(guò)減少膠原纖維的沉積，抑制肝細(xì)胞炎癥，有效改善纖維化肝臟的血清指標(biāo)，通過(guò)病理、免疫組化、瞬時(shí)彈性超聲和肝纖維化SSS計(jì)分證實(shí)了大鼠肝纖維化的減輕。為今后防治肝纖維化提供了新的方法和思路。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2698290