【摘要】：目的通過對慢性重型乙肝患者外周血單個核細(xì)胞TLR2和TLR9的表達研究,探討TLR2和TLR9在慢性重型乙肝發(fā)病機制中的作用及與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系。 方法采集湘雅醫(yī)院2010年3月至2011年2月慢性重型乙肝住院患者45例(實驗組)和健康志愿者23例(對照組)的肝素抗凝血和促凝血。肝素抗凝血分離外周血單個核細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測TLR2和TLR9蛋白在淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞上的表達水平,用熒光定量PCR方法檢測外周血單個核細(xì)胞TLR2和TLR9 mRNA的相對表達水平。促凝血分離血清,用ELISA方法檢測血清TNF-α的濃度。 結(jié)果1.流式檢測結(jié)果：(1)實驗組和對照組單核細(xì)胞TLR2蛋白表達陽性率(%)分別為92.11±16.43和81.84±29.80,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實驗組和對照組淋巴細(xì)胞TLR2蛋白表達陽性率(%)分別為9.73+5.37和2.18±2.46,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實驗組和對照組單核細(xì)胞TLR2蛋白熒光強度分別為149.82+43.93和170.25±76.43,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實驗組和對照組淋巴細(xì)胞TLR2蛋白熒光強度分別為6.04±5.21和4.26+2.46,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)實驗組和對照組單核細(xì)胞TLR9蛋白表達陽性率(%)分別為81.65±32.31和55.03±21.60,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實驗組和對照組淋巴細(xì)胞TLR9蛋白表達陽性率(%)分別為75.64+37.15和23.29±18.87,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實驗組和對照組單核細(xì)胞TLR9蛋白熒光強度分別為140.614±48.35和225.85±90.11,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實驗組和對照組淋巴細(xì)胞TLR9蛋白熒光強度分別為37.39±18.36和19.51±11.13,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.外周血單個核細(xì)胞TLR2和TLR9 mRNA的檢測結(jié)果：實驗組和對照組TLR2 mRNA的相對表達量分別為0.209±0.226和0.356+0.310,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；實驗組和對照組TLR9 mRNA的相對表達量分別為0.014+0.028和0.253±0.159,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.實驗組和對照組血清TNF-α水平(pg/m1)分別為260.15+71.35和158.66±99.23,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.與臨床資料的相關(guān)性分析：單核細(xì)胞TLR9蛋白熒光強度和HBeAg呈正相關(guān)(r=0.382,P0.05)；TLR9 mRNA的相對表達量和PTA呈正相關(guān)(r=0.313,P0.05)；TNF-α和PTA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.372, P0.05); TLR9 mRNA的相對表達量和單核細(xì)胞TLR9蛋白熒光強度呈正相關(guān)(r=0.459,P0.01)。 結(jié)論(1)TLR2主要表達在單核細(xì)胞上,淋巴細(xì)胞上表達很弱。TLR9在單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞上均有一定比例的表達。(2)TLR9表達降低與慢性重型乙肝的發(fā)病機理有關(guān)。(3)TLR9與慢性重型乙肝的病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。TNF-α與慢性重型乙肝的病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。
【圖文】：

紅細(xì)胞沉于管底，，而粒細(xì)胞則緊貼在壓積紅細(xì)胞上呈一層用很薄的白膜(見圖2一1)。稀釋的瓶液稀釋的血漿 2030了了r吸延;“垃個梭細(xì)旅分離液一粒細(xì)抱紅細(xì)飽圖2一1淋巴細(xì)胞分離液提取PBMC(4)吸棄最上層，注意不要碰到第二層，慢慢把第二層全部收集在另一個IOml離心管中。(5)加smID一PBS，用毛細(xì)吸管輕輕吹吸混勻， 1500轉(zhuǎn)/分水平離心10分鐘，低速離心可去除細(xì)胞懸液中殘留的血小板以及殘留的淋巴細(xì)胞分離液。同上用D一PBS洗滌2次。(6)最后一次棄去上清，牛鮑氏盤計數(shù)后，用PBs配成1護/ml的濃度取500pL用來流式檢測。(7)將剩余的PBMC離心，棄去上清，加入 Trazollml，充分震蕩混勻，如有細(xì)胞團塊，用加樣器吹吸數(shù)次直至看不見細(xì)胞團塊，一70OC冷凍保存。2.2.3流式細(xì)胞儀檢測 PBMCTLRZ和TLRg的表達(l)準(zhǔn)備2根流式管，分別標(biāo)記I和11

卜層:RNA清澈透明，約為Trizol的60%;中間:DNA為薄薄的一層白膜;下層:蛋白質(zhì)(酚一氯仿)，為紅色液體。小心吸取清澈透明的__!層水相 400pL至另一個l.smlEP中，避免觸及中間層(見圖2一2)。獷今矛玲‘李迄;逸譽--一十淵A(酒硯娜哪淵“~水二洲}堿一p【成創(chuàng)n孰一一一r-j\\廠裕~一一一石、了圖2一 2TRIZOL提取RNA(4)加入500林L異丙醇，混勻巧秒后置于一20℃冰箱中2小時使RNA沉淀
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R512.62

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2 ;乙肝患者為啥多？[N];健康時報;2005年

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4 唐樂輝;TOLL樣受體MyD88和TRIF信號因子在乳腺癌中的表達與意義[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

5 向萌;Toll樣受體交叉對話和細(xì)胞相互作用在失血性休克誘導(dǎo)急性肺損傷中的作用及機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

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8 董薇;從樹突狀細(xì)胞Toll信號傳導(dǎo)通路探討肝癌發(fā)生的分子機制[D];四川大學(xué);2004年

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本文編號：2696685