【摘要】：背景：重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)作為一種多發(fā)、常見(jiàn)疾病,它的發(fā)病機(jī)制十分錯(cuò)綜復(fù)雜。如何預(yù)防和治療重癥急性胰腺炎仍然沒(méi)有特異性的手段和方法,導(dǎo)致臨床上重癥急性胰腺炎的死亡率和致殘率居高不下。重癥急性胰腺炎是臨床上較為常見(jiàn)的急腹癥,并且常常容易并發(fā)多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)在胰外器官、系統(tǒng)功能損害中腎臟功能不全或障礙發(fā)生率僅次于肺臟功能障礙,大約為14～43%,且大多同時(shí)伴有其他重要器官和系統(tǒng)的損害；若發(fā)展至急性腎功能不全或衰竭(Acute renal failure, ARF),則死亡率高達(dá)80%；出現(xiàn)急性腎功能不全或衰竭后,其他臟器、系統(tǒng)功能不全或衰竭的發(fā)生率也明顯升高。既往認(rèn)為重癥急性胰腺炎發(fā)生有效循環(huán)血容量不足、腎臟血流的動(dòng)力學(xué)紊亂、異常是重癥急性胰腺炎并發(fā)腎損傷的主要原因；但近期更多研究集中顯示,重癥急性胰腺炎引起腎臟形態(tài)和功能損傷是由于炎癥反應(yīng)、免疫或毒素的應(yīng)激反應(yīng)引起的急性腎小管、腎小球損害導(dǎo)致的,而不僅僅是簡(jiǎn)單的血流動(dòng)力學(xué)紊亂、異常引起的。目前的研究認(rèn)為重癥急性胰腺炎在本質(zhì)上是一種嚴(yán)重的全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory repsponse syndrome, SIRS),它的機(jī)制包括各種致病因子引起胰腺腺泡細(xì)胞損傷,引起胰酶的過(guò)度釋放,進(jìn)而引起內(nèi)毒素、腫瘤壞死因子(TNF)、細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)等炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子的持續(xù)、過(guò)量釋放,導(dǎo)致胰腺及全身的器官形態(tài)損害和功能不全或障礙。目前重癥急性胰腺炎引起急性腎臟功能不全或衰竭的機(jī)制、機(jī)理仍尚未完全闡明。因此研究重癥急性胰腺炎可能的致病機(jī)理、機(jī)制并尋求有效的預(yù)防、治療措施具有非常重要的科研和臨床價(jià)值。羅格列酮(rosiglitazone, ROSI)是目前發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的噻唑烷二酮類(lèi)(thiazolidinedione,TZD)藥品。它是高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-y(peroxisome proliferator-activated receptors-γ,PPAR-γ)的激動(dòng)劑,可以促進(jìn)脂肪和其它細(xì)胞的分化,增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞對(duì)胰島素作用的敏感性,減輕胰島素抵抗(IR)的程度。從某種意義上說(shuō),是胰島素的增敏藥。臨床上主要是作為胰島素的增敏劑,用于2型糖尿病患者的治療。而作為一種過(guò)氧化物酶體增殖激活受體γ (PPAR-γ)的強(qiáng)效的和高選擇性的激動(dòng)劑,近年來(lái)研究表明羅格列酮在炎癥過(guò)程和進(jìn)展中具有明顯的負(fù)向調(diào)節(jié)作用,從而能在多種炎癥反應(yīng)綜合征中保護(hù)相關(guān)的臟器和器官。已有研究表明羅格列酮在心臟和血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等諸多器官、系統(tǒng)的急、慢性炎性病變及全身炎癥反應(yīng)綜合征中都發(fā)揮著一定的抗炎作用,‘即起到緩解炎癥反應(yīng)、減輕組織形態(tài)損傷、保護(hù)臟器功能的作用。有研究表明,在感染性休克、缺血-再灌注損傷及炎癥性腸病動(dòng)物模型中,噻唑烷二酮類(lèi)高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ合成激動(dòng)劑化合物通過(guò)活化PPAR-y途徑調(diào)控核因子-κB (NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,抑制了炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá),抑制單核-巨噬細(xì)胞的活化,減輕機(jī)體炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和減少體內(nèi)炎癥因子、細(xì)胞介質(zhì)的釋放而發(fā)揮抗炎作用。 目的：探討重癥急性胰腺炎大鼠模型在不同病程進(jìn)展中是否存在腎臟形態(tài)和功能損傷、損害及腎臟相應(yīng)的病理生理變化。如果存在腎臟形態(tài)和功能損傷、損害,則繼續(xù)探討大鼠重癥胰腺炎并發(fā)腎臟形態(tài)和功能損傷、損害的致病機(jī)制、機(jī)理,以及高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ的激動(dòng)劑：羅格列酮(ROSI)保護(hù)大鼠重癥急性胰腺炎(SAP)腎臟形態(tài)和功能損傷、損害的可能的機(jī)制、機(jī)理。進(jìn)一步探討高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ的激動(dòng)劑：羅格列酮(ROSI)對(duì)重癥急性胰腺炎所誘發(fā)的腎臟形態(tài)和功能損傷、損害的影響作用,即可能存在的保護(hù)作用,從而為臨床上重癥急性胰腺炎腎臟損傷的治療開(kāi)辟新的途徑和提供新的有效的藥品。 方法：SPF級(jí)雄性Wistar大鼠54只、體重200±20g(湖北省疾病預(yù)防控制中心提供)。大鼠逐一編號(hào),隨機(jī)(隨機(jī)數(shù)字法)分為假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組和羅格列酮處理組,每組大鼠18只。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12h,不限制飲水。實(shí)驗(yàn)前電子秤稱(chēng)體重(g)。10%的水合氯醛按0.3ml/100g劑量行腹腔內(nèi)注射,以麻醉動(dòng)物。取腹部正中切口進(jìn)入腹腔,確認(rèn)胰管后,用頭皮針從十二指腸的對(duì)系膜側(cè)斜穿入腸腔,經(jīng)十二指腸乳頭進(jìn)入胰管,用動(dòng)脈夾固定針頭,頭皮針的另一端連接1ml的注射器,內(nèi)裝有濃度為5%�；悄懰徕c(Sigma公司),以1ml/kg的劑量,O.lml/min的速率(微量輸液泵)注入胰管膽胰管,逆行注射5%�；悄懰徕c以制備重癥急性胰腺炎模型。羅格列酮處理組造模前30min經(jīng)股靜脈注射10%二甲基亞砜(DMSO)溶解的羅格列酮(6mg/kg);假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組造模前30min則經(jīng)大鼠股靜脈注射等量的10%二甲基亞砜(DMSO)(0.2ml/100g)。假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組和羅格列酮處理組大鼠分別于制模后3h、12h、24h分3批進(jìn)行剖殺,假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組和羅格列酮處理組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死6只大鼠。血液標(biāo)本的采集采取心臟穿刺取血2ml,離心后取上清液置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆�。假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組和羅格列酮處理組組織標(biāo)本于處死前開(kāi)腹,切取左腎組織用10%甲醛溶液固定,按常規(guī)方法制成石蠟包埋切片,行HE染色后,高倍光鏡下觀察胰腺、腎臟病理的改變程度。剩余的右腎組織放置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆�。開(kāi)腹后于膀胱穿刺獲取5ml尿液送檢。將抗凝全血標(biāo)本分別混勻,取抗凝的全血標(biāo)本,離心機(jī)按3000rpm速率運(yùn)轉(zhuǎn)5min。取上清液,采用mirco半自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血淀粉酶、血尿素氮、血肌酐；尿微量白蛋白、尿IgG、α1-微球蛋白的含量測(cè)定則采用Array360System(美國(guó)貝克曼公司)速率比濁免疫方法進(jìn)行定量測(cè)定并在室溫下2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢；假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組和羅格列酮處理組大鼠腎組織采用4%多聚甲醛固定、石蠟包埋制片,HE染色后高倍光鏡下觀察形態(tài)學(xué)的改變。分別在3h、12h、24h動(dòng)態(tài)觀察大鼠腎臟損傷、全身反應(yīng)及炎癥相關(guān)的指標(biāo),即分別檢測(cè)假手術(shù)組和重癥急性胰腺炎造模組、羅格列酮處理組血淀粉酶、血尿素氮、血肌酐、尿微量白蛋白、尿IgG、尿α1-微球蛋白含量,并取胰腺組織、腎臟組織進(jìn)行病理學(xué)檢查,從而反映大鼠重癥急性胰腺炎模型組、羅格列酮處理組在不同病程進(jìn)展時(shí)機(jī)中機(jī)體全身反應(yīng)及其腎臟形態(tài)和功能損傷、損害的程度。分別取假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組、羅格列酮處理組腎臟組織檢測(cè)一氧化氮及其合成酶iNOS的水平和核轉(zhuǎn)錄因子-κB (NF-κB) p65蛋白的表達(dá)水平,并觀察不同時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組、羅格列酮處理組大鼠腎臟腫瘤壞死因子(TNF-a)和細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)的mRNA及蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：與假手術(shù)組相比,重癥急性胰腺炎造模組在3h、12h、24h血淀粉酶分別為2900±510U/L、3200±550U/L、5200±730U/L;3h、12h、24h血肌酐分別為142±22umol/L、196±19umoI/L、316±18umol/L;3h、12h、24h血尿素氮分別為6.9±2.1mmol/L、11.7±1.4mmol/L、20.9±0.5mmol/L;3h.12h、24h尿微量白蛋白分別為93.8±9.6mg/L、170.5±16mg/L、208±20mg/L;3h、12h、24h尿IgG分別為18±3.2mg/L、18.3±1.6mg/L、23.5±2.4mg/L;3h、12h、24h尿α1-微球蛋白分別為14.2±0.9mg/L、18.3±0.5mg/L、34.1±0.82mg/L,均較假手術(shù)組升高(P0.05)。重癥急性胰腺炎造模組3h、12h、24h各時(shí)點(diǎn)一氧化氮含量分別為2.34±0.31mg/g、7.73±0.48mg/g、17.33±0.89mg/g;重癥急性胰腺炎造模組3h、12h、24h各時(shí)點(diǎn)NF-KB/p65含量分別為30648.11±2655.13、53654.63±3065.94、70546.85±5046.55；重癥急性胰腺炎造模組3h、12h、24h各時(shí)點(diǎn)腫瘤壞死因子(TNF-a)表達(dá)水平為4.18±0.61、5.69±0.82、11.86±2.49；重癥急性胰腺炎造模組3h、12h、24h各時(shí)點(diǎn)細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)表達(dá)水平為3.68±0.58、6.48±0.76、8.62±1.09,均與假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)比較顯著升高(P0.05)；羅格列酮處理組12h、24h時(shí)點(diǎn)一氧化氮(NO)含量分別為4.10±0.62mg/g、6.09±0.79mg/g；羅格列酮處理組24h時(shí)點(diǎn)NF-κB/p65含量為30468.48±2684.59；羅格列酮處理組24h時(shí)點(diǎn)腫瘤壞死因子(TNF-α)表達(dá)水平為6.60±1.34；羅格列酮處理組24h時(shí)點(diǎn)細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)表達(dá)水平為2.92±0.88,均較SAP組下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：重癥急性胰腺炎大鼠存在腎臟形態(tài)和功能損傷、損害,且隨著時(shí)間推移,腎臟形態(tài)和功能損傷加重。重癥急性胰腺炎可導(dǎo)致腎臟形態(tài)和功能損傷,而高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ的激動(dòng)劑羅格列酮可顯著減輕重癥急性胰腺炎所導(dǎo)致的腎臟形態(tài)和功能損傷程度。高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-Y的激動(dòng)劑：羅格列酮通過(guò)抑制NF-κB的表達(dá),從而減少腫瘤壞死因子(TNF-α)和細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)的產(chǎn)生,進(jìn)而減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展,顯示羅格列酮參與了保護(hù)重癥急性胰腺炎所誘發(fā)的腎臟形態(tài)和功能損傷機(jī)制。本文顯示高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ的激動(dòng)劑羅格列酮(RPSI)對(duì)重癥急性胰腺炎所誘發(fā)腎損傷的影響作用,即可能存在的保護(hù)作用,從而為臨床急性胰腺炎腎損傷的治療開(kāi)辟新的途徑和提供新的有效藥物。 意義：本文旨在觀察大鼠重癥急性胰腺炎模型中腎臟形態(tài)和功能損傷的形態(tài)、病理及炎癥相關(guān)指標(biāo)的變化,以期更深入了解重癥急性胰腺炎腎臟形態(tài)和功能損傷的病理生理變化及其發(fā)病機(jī)理、機(jī)制。重癥急性胰腺炎大鼠模型組腎臟組織中炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子表達(dá)水平明顯升高,從而提示炎癥反應(yīng)可能是導(dǎo)致重癥急性胰腺炎腎臟形態(tài)和功能損傷的重要機(jī)制。本文進(jìn)一步揭示了高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ的激動(dòng)劑羅格列酮的抗炎作用參與其對(duì)重癥急性胰腺炎腎臟形態(tài)和功能損傷的保護(hù)機(jī)制。高選擇性過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-Y是一種配體激活的核受體轉(zhuǎn)錄因子,具有轉(zhuǎn)錄激活和轉(zhuǎn)錄抑制作用,羅格列酮作為它的激動(dòng)劑和配體,能作用于炎癥信號(hào)各轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的多個(gè)環(huán)節(jié),抑制趨化因子、細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)等的基因表達(dá),發(fā)揮它的抗炎作用,并減輕重癥急性胰腺炎所誘發(fā)的腎臟形態(tài)和功能損傷程度,從而給重癥急性胰腺炎合并腎臟形態(tài)和功能損害提供新的有效治療手段帶來(lái)前景。
【圖文】：

腫脹、破裂，細(xì)胞膜出現(xiàn)損壞，其病理改變隨著時(shí)間的延長(zhǎng)、病程的推移而逐漸加重(見(jiàn)圖3)。mmmmmmFig. 3 The pathological stain of renal tissue (PAS, ><400).圖3假手術(shù)組和重癥急性胰腺炎模型組腎臟組織病理學(xué)染色4.重癥急性胰腺炎大鼠《模型腫瘤壞死因子TNF-a和細(xì)胞間粘附分子ICAM-1 mRNA表達(dá)的變化：假手術(shù)組3h、12h、24h各處理時(shí)間組中，腎組織腫瘤壞死因子TNF-a和細(xì)胞間粘附分子ICAM-1在mRNA水平上呈輕度表達(dá)，重癥急性胰腺炎模型組腫瘤壞死因子TNF-a和細(xì)胞間粘附分子ICAM-lmRNA的表達(dá)水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)、病程的推移而逐漸增高，顯著高于假手術(shù)組相應(yīng)的表達(dá)水平，，并在24h時(shí)間點(diǎn)達(dá)高峰（P<0. 01,見(jiàn)表2)。16
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R576;R692

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2695817