發(fā)布時(shí)間：2020-06-04 01:40

【摘要】：肝纖維化是一切慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)途徑，早期診斷與治療可逆轉(zhuǎn)恢復(fù)。本課題組一直致力于研究硒對(duì)金屬硫蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及其抗纖維化作用，結(jié)果證實(shí)有機(jī)硒(Org-Se)不僅可明顯誘導(dǎo)金屬硫蛋白(MT)的表達(dá)，同時(shí)具有一定的肝纖維化防護(hù)作用。 目的 評(píng)價(jià)硒對(duì)MT的誘導(dǎo)作用；提取、分離、純化、鑒定Org-Se和鋅(Zn)誘導(dǎo)的MT-1／-2亞型，探討Se代MT存在的可能性。建立纖維化動(dòng)物模型及血清和組織的蛋白質(zhì)指紋圖譜，并將損傷標(biāo)志物用于Se代MT對(duì)肝損傷防護(hù)作用的評(píng)價(jià)；觀察Org-Se臨床抗纖維化療效，建立肝纖維化病人蛋白質(zhì)表達(dá)指紋圖譜，尋找標(biāo)志物，為臨床肝纖維化無創(chuàng)性早期和分級(jí)診斷提供新的技術(shù)平臺(tái)。 方法 (1)利用表面加強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)、RT-PCR等技術(shù)從蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)比了Org-Se與Zn對(duì)MT的誘導(dǎo)作用；利用凝膠層析、離子交換層析提取分離了Zn-MT-1／-2及Se代MT-1／-2，應(yīng)用SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS等實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段測(cè)定和驗(yàn)證Zn-MT-1／-2和Se代MT-1／-2純度及分子量。運(yùn)用ICP-MS對(duì)比分析了Zn-MT和Se代MT中C、H、N、S、Se的含量。(2)利用酒精和CCl_4建立大、小鼠肝纖維化模型，通過血清、組織生化指標(biāo)、病理切片觀察及蛋白質(zhì)指紋圖譜的建立，動(dòng)態(tài)觀察損傷過程，捕捉損傷蛋白標(biāo)志物，觀察Org-Se對(duì)纖維化或損傷的防護(hù)作用。(3)在浙江和山東兩地跟蹤隨訪肝病患者26例，觀察服用Org-Se6個(gè)月后的臨床療效，分析肝功能及肝纖維化指標(biāo)的變化，確定用藥后纖維化改善情況；利用SELDI蛋白質(zhì)芯片技術(shù)建立肝纖維化不同分級(jí)病人及肝硬化病人的蛋白表達(dá)指紋圖譜，獲取蛋白標(biāo)志物。 結(jié)果 (1)Org-Se對(duì)小鼠肝臟MT的誘導(dǎo)表達(dá)高于Na_2SeO_3和ZnSO_4；經(jīng)DNA回收測(cè)序鑒定，，Org-Se誘導(dǎo)的MT序列與基因庫(kù)中完全匹配，同時(shí)發(fā)現(xiàn)Org-Se在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)MT-2的誘導(dǎo)高于Zn對(duì)MT-2的誘導(dǎo)，但對(duì)MT-1基因水平的誘導(dǎo)與Zn的作用相似，進(jìn)一步證明Org-Se為MT高效誘導(dǎo)劑。經(jīng)凝膠層析和離子
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R575.2

【引證文獻(xiàn)】

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1 王誦濤;謝鵬;張敏紅;馮京海;;金屬離子對(duì)細(xì)胞內(nèi)金屬硫蛋白基因調(diào)控的影響[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年09期

2 孟范平;肖靜;趙順順;付海防;;菲律賓蛤仔金屬硫蛋白的提取方法優(yōu)化[J];中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年07期

3 李華;許曉曦;呂萍萍;邵欣欣;關(guān)朝亮;;鯉魚主要組織中金屬硫蛋白提取工藝的研究[J];食品工業(yè)科技;2013年03期

4 楊文瑾;;亞硒酸鈉維生素E對(duì)牛冷凍精液品質(zhì)的影響[J];中國(guó)奶牛;2012年02期

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1 王誦濤;熱應(yīng)激對(duì)肉仔雞肝臟金屬硫蛋白和白介素-6變化規(guī)律的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

本文編號(hào)：2695690