【摘要】：越來越多的證據(jù)表明,microRNA (miRNA)所介導(dǎo)的基因調(diào)控影響了諸多自身免疫疾病包括炎癥性腸病(IBD)的發(fā)病過程,但是目前IBD發(fā)病過程中miRNA所發(fā)揮的生物學(xué)功能尚未完全研究清楚。 首先我們研究了2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的小鼠急性腸炎模型和IL-10敲除小鼠(IL-10KO)慢性結(jié)腸炎模型中miRNA是否存在差異性表達(dá),并且研究表達(dá)異常的miRNA能否通過調(diào)控致病基因從而在腸炎發(fā)病過程中起關(guān)鍵作用。 我們通過miRNA芯片和實(shí)時(shí)熒光定量PCR (q-PCR)分別檢測了TNBS模型和IL-10敲除小鼠模型中miRNA的表達(dá)水平。接下來我們分別在原代結(jié)腸上皮細(xì)胞和結(jié)腸炎模型中研究了miR-141和其潛在的調(diào)控基因CXCL12β的相互作用及其促使炎性細(xì)胞遷移能力的影響。我們通過在小鼠腸炎模型中灌腸給入miR-141的前體或抑制劑,來研究miR-141的生物學(xué)功能。結(jié)果顯示無論在腸炎小鼠和克羅恩病(CD)患者的結(jié)腸組織中,miR-141和CXCL12β的表達(dá)水平都呈負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步的研究表明,miR-141通過直接調(diào)控CXCL12β表達(dá)從而影響總CXCL12的表達(dá)最終抑制免疫細(xì)胞遷移。通過給入miR-141的前體或者抑制劑來上調(diào)或下調(diào)TNBS腸炎或IL-10KO小鼠結(jié)腸中miR-141的水平,從而影響免疫細(xì)胞浸潤,最終實(shí)現(xiàn)緩解或惡化小鼠腸炎癥狀的目的。此外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明結(jié)腸部位過表達(dá)CXCL12β抵消了miR-141前體在TNBS腸炎模型中的療效。miR-141通過調(diào)控CXCL12β介導(dǎo)的招募免疫細(xì)胞進(jìn)入腸道炎癥部位的過程從而在腸炎的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。通過調(diào)控miR-141的水平進(jìn)而影響結(jié)腸組織中的CXCL12的表達(dá)水平和免疫細(xì)胞的浸潤程度代表了一種全新的用于IBD治療的策略。 當(dāng)腸炎發(fā)生后,結(jié)腸部位伴有大量活化的炎癥細(xì)胞浸潤,此時(shí)可以通過抑制促炎因子的表達(dá)來阻止免疫細(xì)胞的活化,同樣可以達(dá)到緩解腸炎癥狀的目的。為此我們研究了miR-16能否通過結(jié)合到腫瘤壞死因子-α (TNF-α)和白細(xì)胞介素-12p40(IL-12p40)的AU富集區(qū)域(ARE)從而調(diào)控它們的表達(dá)。miR-16對TNF-α和IL-12p40的調(diào)控作用在腹腔巨噬細(xì)胞層次得到了驗(yàn)證。鑒于活化的結(jié)腸巨噬細(xì)胞是腸炎發(fā)生過程中TNF-α和IL-12p40的主要來源,而實(shí)驗(yàn)室前期工作已經(jīng)成功構(gòu)建了靶向輸送核酸藥物至結(jié)腸巨噬細(xì)胞的給藥體系,我們將miR-16前體通過乳糖酸修飾的低分子量殼聚糖(G-LMWC)輸送進(jìn)結(jié)腸巨噬細(xì)胞來研究miR-16前體對TNBS腸炎模型的療效。當(dāng)灌腸給入miR-16前體/G-LMWC復(fù)合物后,腸炎組織中的TNF-α和IL-12p40的表達(dá)水平顯著下降。體重變化,組織學(xué)評分和炎癥因子檢測都顯示miR-16前體治療有效緩解TNBS腸炎小鼠的炎癥癥狀。結(jié)合miR-16的調(diào)控功能以及靶向輸送核酸藥物至結(jié)腸巨噬細(xì)胞的給藥體系來達(dá)到治療腸炎的目的治療策略,能為miRNA用于IBD的臨床治療提供了重要參考。 自由基在IBD的發(fā)病過程發(fā)揮著重要作用。3'3-二吲哚甲烷(DIM)可以通過乳腺癌易感基因1(BRCA1)相關(guān)的通路增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力。本部分內(nèi)容嘗試研究DIM是否可以用于動(dòng)物腸炎模型的治療并進(jìn)一步探討了其可能的治療機(jī)制。DIM的療效評估主要是在TNBS誘導(dǎo)的急性腸炎模型中進(jìn)行。我們在血管內(nèi)皮和TNBS腸炎模型中嘗試研究了DIM對氧化壓力誘發(fā)血管黏附分子-1(VCAM-1)的表達(dá)上調(diào)以及對后續(xù)的白細(xì)胞-血管內(nèi)皮相互作用的影響。腹腔注射給入DIM可以有效緩解TNBS小鼠模型的腸炎癥狀。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)DIM可以上調(diào)結(jié)腸組織中BRCA1的表達(dá),降低自由基生成,抑制VCAM-1表達(dá)及相應(yīng)的白細(xì)胞-血管內(nèi)皮黏附,從而最終達(dá)到緩解腸炎的目的。DIM通過抑制自由基介導(dǎo)的VCAM-1的表達(dá)和腸道炎癥細(xì)胞浸潤揭示了一種新的治療策略,該策略還可以為臨床治療IBD提供幫助
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R574

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2694991