【摘要】：頑固性功能性便秘是一種常見(jiàn)的結(jié)腸功能障礙性疾病,因其程度重,藥物治療效果不佳,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,最終多需要外科治療。根據(jù)結(jié)腸的直徑,便秘可分為兩種類型:結(jié)腸直徑正常型和巨結(jié)腸型。特發(fā)性巨結(jié)腸是巨結(jié)腸型便秘的一種,表現(xiàn)為頑固性便秘。頑固性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。腸道菌群是人體主要微生物群落,腸腔內(nèi)細(xì)菌種類多,數(shù)量大,是腸屏障的重要組成部分。腸道菌群參與機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)代謝,免疫調(diào)節(jié),上皮基因的表達(dá)的調(diào)控,屏蔽致病菌等多種生理過(guò)程。近年來(lái),一些非培養(yǎng)的分子生物學(xué)方法,如變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE),克隆文庫(kù),DNA微矩等,被用于研究疾病狀態(tài)下的腸道菌群變化,如抗生素相關(guān)性腸炎、炎癥性腸病、腸易激綜合征等�；谀c道菌群在便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要作用,有必要使用分子生物學(xué)和生態(tài)學(xué)方法來(lái)加深對(duì)便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸菌群改變的認(rèn)識(shí)。便秘(包括特發(fā)性巨結(jié)腸)狀態(tài)下,結(jié)腸內(nèi)容物停留時(shí)間延長(zhǎng),結(jié)腸菌群改變,這些都對(duì)結(jié)腸屏障功能提出了更為嚴(yán)峻的考驗(yàn)。結(jié)腸粘膜緊密連接和結(jié)腸粘液屏障對(duì)于維持結(jié)腸屏障功能極為重要。對(duì)于便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜緊密連接和粘液屏障的研究可以加深我們對(duì)于便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸的認(rèn)識(shí)。本研究中,我們使用DGGE檢測(cè)頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜菌群改變特征,找出顯著改變的細(xì)菌。同時(shí),我們觀察結(jié)腸粘膜上皮緊密連接和杯狀細(xì)胞改變特征,對(duì)于頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸的基本病理生理有更深刻的認(rèn)識(shí),為今后臨床實(shí)踐提供一定的理論依據(jù)。第一部分頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜菌群改變特征研究一頑固性功能性便秘患者結(jié)腸粘膜菌群改變特征目的:研究頑固性功能性便秘患者結(jié)腸粘膜菌群的改變特征,并找出有特征性變化的菌株。病人和方法:實(shí)驗(yàn)分為兩組:頑固性功能性便秘組(便秘組)16人;對(duì)照組9人。在術(shù)中獲取病人乙狀結(jié)腸粘膜標(biāo)本,提取DNA,擴(kuò)增后進(jìn)行變性梯度凝膠電泳(DGGE),觀察菌群結(jié)構(gòu)變化,使用Quantity One軟件分析DGGE條帶,對(duì)菌群的結(jié)構(gòu)進(jìn)行相似性,多樣性和主成分分析(PCA)分析,對(duì)有顯著變化的條帶割膠測(cè)序,并使用NCBI的BLAST工具與Nucleotide collection(nr/nt)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)基因比對(duì),鑒定其細(xì)菌種屬。結(jié)果:便秘患者結(jié)腸粘膜菌群與對(duì)照組有明顯差異。便秘組結(jié)腸粘膜菌群優(yōu)勢(shì)菌群條帶數(shù)明顯低于對(duì)照組(18.38±5.20vs28.22±5.24P0.01),便秘組患者結(jié)腸粘膜菌群香農(nóng)多樣性指數(shù)明顯少于對(duì)照組(P=0.01),提示頑固性功能性便秘患者結(jié)腸粘膜菌群多樣性減少。頑固性功能性便秘腸粘膜菌群的特征性改變表現(xiàn)為:3種擬桿菌菌門(mén)細(xì)菌和2種硬壁菌菌門(mén)細(xì)菌相對(duì)豐度減少,同時(shí)伴有2種未曾培養(yǎng)過(guò)的細(xì)菌相對(duì)豐度的明顯增加(P0.05)。結(jié)論:頑固性功能性便秘患者結(jié)腸粘膜存在菌群紊亂,表現(xiàn)為:菌群多樣性減少,擬桿菌菌門(mén)和硬壁菌菌門(mén)細(xì)菌相對(duì)豐度減少,同時(shí)伴有兩種未曾培養(yǎng)過(guò)的細(xì)菌相對(duì)豐度的明顯增加。研究二特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜菌群改變特征目的:研究特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜菌群的改變特征,并找出有特征性變化的菌株。病人和方法:實(shí)驗(yàn)分為兩組:特發(fā)性巨結(jié)腸組(巨結(jié)腸組)10人;對(duì)照組11人。在術(shù)中獲取病人乙狀結(jié)腸粘膜標(biāo)本,提取DNA,擴(kuò)增后進(jìn)行變性梯度凝膠電泳,觀察菌群的結(jié)構(gòu)變化,對(duì)菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行相似性,多樣性和主成分分析分析,對(duì)有顯著變化的條帶割膠測(cè)序,鑒定其細(xì)菌種屬。結(jié)果:巨結(jié)腸組患者結(jié)腸粘膜菌群與對(duì)照組有明顯差異。巨結(jié)腸組患者結(jié)腸粘膜菌群條帶數(shù)明顯多于對(duì)照組(P0.01),巨結(jié)腸組患者結(jié)腸粘膜菌群香農(nóng)多樣性指數(shù)明顯增多(P0.01),提示巨結(jié)腸組結(jié)腸粘膜菌群多樣性增多。巨結(jié)腸組粘膜菌群的特征性變化菌群是:5種擬桿菌菌門(mén)細(xì)菌相對(duì)豐度明顯升高伴有1種擬桿菌菌門(mén)細(xì)菌相對(duì)豐度明顯降低。結(jié)論:特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜存在菌群紊亂,其特征性表現(xiàn)為:菌群多樣性增多,5種擬桿菌菌門(mén)細(xì)菌的相對(duì)豐度增加伴1種擬桿菌菌門(mén)細(xì)菌相對(duì)豐度明顯降低。第二部分頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜緊密連接和杯狀細(xì)胞的研究研究一頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜緊密連接的研究目的:研究頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜緊密連接的微觀結(jié)構(gòu)和緊密連接蛋白Occludin和Claudin-1的變化特征。病人和方法:病人分為三組,頑固性功能性便秘組(便秘組)、特發(fā)性巨結(jié)腸組(巨結(jié)腸組)和對(duì)照組各8人。在術(shù)中獲取病人乙狀結(jié)腸標(biāo)本,進(jìn)行:普通病理染色觀察結(jié)腸上皮微絨毛的變化;電鏡觀察緊密連接的超微結(jié)構(gòu)的變化;蛋白印跡對(duì)腸粘膜緊密連接蛋白Occludin和Claudin-1進(jìn)行半定量分析;免疫熒光檢測(cè)對(duì)Occludin和Claudin-1進(jìn)行原位分析。結(jié)果:便秘組和巨結(jié)腸組病人結(jié)腸粘膜上皮微絨毛光鏡下無(wú)明顯損傷。便秘組、巨結(jié)腸組和對(duì)照組結(jié)腸粘膜緊密連接結(jié)構(gòu)均完整,緊密連接蛋白Occludin和Claudin-1表達(dá)量無(wú)明顯差異、免疫熒光表達(dá)在位。結(jié)論:頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜緊密連接結(jié)構(gòu)完整,緊密連接蛋白Occludin和Claudin-1表達(dá)與對(duì)照組無(wú)差異。研究二頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜杯狀細(xì)胞的研究目的:研究頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜杯狀細(xì)胞的變化。病人和方法:病人分為三組:頑固性功能性便秘組(便秘組)、特發(fā)性巨結(jié)腸組(巨結(jié)腸組)和對(duì)照組各8人。在術(shù)中獲取病人乙狀結(jié)腸標(biāo)本,進(jìn)行:HE染色了解結(jié)腸微絨毛形態(tài),對(duì)杯狀細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù);西弗氏/阿利辛蘭(AB/PAS)染色,對(duì)杯狀細(xì)胞粘液進(jìn)行特殊染色,進(jìn)一步對(duì)杯狀細(xì)胞進(jìn)行分析。結(jié)果:HE染色和AB/PAS染色均可以看到:便秘組和巨結(jié)腸組患者乙狀結(jié)腸微絨毛較對(duì)照組變細(xì),單位面積內(nèi)杯狀細(xì)胞增多(p0.01),巨結(jié)腸組患者乙狀結(jié)腸絨毛較便秘組更細(xì),杯狀細(xì)胞數(shù)更多(p0.01)。結(jié)論:在頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸狀態(tài)下,結(jié)腸微絨毛變細(xì),單位面積內(nèi)杯狀細(xì)胞相對(duì)增多,特發(fā)性巨結(jié)腸較頑固性功能性便秘變化更明顯。
【圖文】：

ＤＧＧＥ指紋圖譜逡逑ＤＧＧＥ圖中，每個(gè)縱向泳道代表一個(gè)樣品的菌群結(jié)構(gòu)，每個(gè)泳道里的一代表一種細(xì)菌，條帶的強(qiáng)度代表該細(xì)菌的數(shù)量。在水平方向位于同一位置認(rèn)為是同一種細(xì)菌。如圖２所示，Ａ１到Ａ９為對(duì)照組，，Ｂ１到Ｂ１６為便秘代表一個(gè)病人的結(jié)腸粘膜菌群結(jié)構(gòu)，Ｃ５、Ｃ６分別代表一種細(xì)菌，Ｃ１４的顯高于Ｃ９，那么說(shuō)明Ｃ１４對(duì)應(yīng)的細(xì)菌量明顯多于Ｃ９，邋Ｃ１４和Ｒ１２在同一，認(rèn)為Ｃ１４和Ｒ１２是同一種細(xì)菌。逡逑．３．２相似性分析逡逑

圖２頑固性功能性便秘和對(duì)照組患者結(jié)腸粘膜標(biāo)本的ＤＧＧＥ條帶。Ａ代表對(duì)照逡逑組患者（Ａ１－Ａ９）邋，邋Ｂ代表頑固性功能性便秘患者（Ｂ１－Ｂ１６）。逡逑相似性分析顯示：所有的條帶主要分為兩大組，第一組中有８條條帶，其中逡逑有６條是對(duì)照組的條帶；第二組中有１６條條帶，其中１３條條帶是頑固性功能性便逡逑秘組的條帶。由此可以看出，頑固性功能性便秘組患者結(jié)腸粘膜菌群和對(duì)照組病逡逑人粘膜菌群有明顯差異。頑固性功能性便秘患者和對(duì)照組病人結(jié)腸粘膜菌群的逡逑ＤＧＧＥ指紋圖譜顯示：與對(duì)照組病人結(jié)腸粘膜菌群結(jié)構(gòu)相比，頑固性功能性便秘逡逑患者菌群多樣性降低，一些條帶相對(duì)豐度明顯增高。逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R574.62

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱元慶;王晨龍;;老年患者特發(fā)性巨結(jié)腸1例并文獻(xiàn)分析[J];臨床普外科電子雜志;2017年03期

2 孫學(xué)軍;韓剛;劉海濤;;成人特發(fā)性巨結(jié)腸手術(shù)治療體會(huì)[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2013年01期

3 張景,郭超;成人特發(fā)性巨結(jié)腸1例[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年02期

4 尹哲生;韓敏利;谷金泉;;特發(fā)性巨結(jié)腸3例誤診分析[J];河北醫(yī)藥;1992年01期

5 朱金明;;應(yīng)用損傷控制手術(shù)治療成人特發(fā)性巨結(jié)腸[J];臨床誤診誤治;2013年04期

6 黃國(guó)棟,胡明,鄭若,曾曉玲;特發(fā)性巨結(jié)腸與成人先天性巨結(jié)腸的診斷與鑒別[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2003年09期

7 呂文才,付維利;特發(fā)性巨結(jié)腸并腸梗阻1例報(bào)告[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2003年05期

8 杜振雙;吳珊珊;莊偉斌;張誠(chéng)華;;成人特發(fā)性巨結(jié)腸1例[J];中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2013年11期

9 杜海磊;嚴(yán)佶祺;陳擁軍;匡潔;馬迪;邱偉華;楊衛(wèi)平;;右半結(jié)腸特發(fā)性巨結(jié)腸手術(shù)治療一例[J];中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2010年10期

10 姜麗,王金才;成年人先天性巨結(jié)腸同源病[J];腹部外科;1997年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 李增強(qiáng);齊長(zhǎng)明;;正確認(rèn)識(shí)貓巨結(jié)腸[A];全國(guó)獸醫(yī)外科學(xué)第13次學(xué)術(shù)研討會(huì)、小動(dòng)物醫(yī)學(xué)第1次學(xué)術(shù)研討會(huì)暨奶牛疾病第3次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王林;頑固性功能性便秘和特發(fā)性巨結(jié)腸患者結(jié)腸粘膜菌群和粘膜屏障的研究[D];南京大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2694002