【摘要】：目的建立葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型,用糞便移植(FMT)和乳酸菌作為干預(yù)手段對(duì)模型進(jìn)行干預(yù),評(píng)價(jià)腸道菌群調(diào)節(jié)的兩種干預(yù)方法對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎發(fā)生、發(fā)展的影響及其相關(guān)機(jī)制。方法1.分別對(duì)6-8周的C57BL/6N、C57BL/6J、BALB/c雌性小鼠給予含有3%或5%的DSS的無菌水自由飲用6天以誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎。每日監(jiān)測(cè)小鼠的體重,糞便形態(tài)以及糞便潛血,綜合分析疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI),以確定造模敏感穩(wěn)定的小鼠品系進(jìn)行后續(xù)干預(yù)評(píng)價(jià)研究。2.對(duì)小鼠給予DSS造模同時(shí)進(jìn)行糞便移植干預(yù)處理,糞便取自正常同型小鼠,在厭氧條件下培養(yǎng)2-3 h后,取糞便上清液200 μL/只/天對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃,連續(xù)5天。3.對(duì)小鼠給予含5×108 CFU/mLHT121-2乳酸桿菌的飲用水提前干預(yù)1周后,給予3%DSS飲水造模同時(shí)每天給小鼠5×108 CFU/只/天灌胃處理,連續(xù)5天。4.利用熒光定量PCR檢測(cè)小鼠腸組織多種基因mRNA的表達(dá)。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析產(chǎn)生IL-17A和IL-22的淋巴細(xì)胞在腸粘膜的分布以及主要細(xì)胞來源。結(jié)果:1.DSS誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎模型建立:(1)三個(gè)品系小鼠的DSS結(jié)腸炎模型組與各自對(duì)照組相比體重均呈現(xiàn)不同程度下降,C57BL/6J小鼠模型組體重降低最早、最顯著。第6天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)C57BL/6J、C57BL/6和NBALB/c的體重下降率分別為(21.79±2.58)%,(12.52±3.97)%和(2.88±4.76)%。(2)C57BL/6J小鼠模型組糞便評(píng)分從第3天開始顯著升高;C57BL/6N和BALB/c小鼠模型組的糞便形態(tài)評(píng)分與對(duì)照組均無顯著差異。(3)C57BL/6J小鼠模型組的便潛血評(píng)分和DAI評(píng)分與Control組從第1天起有顯著差異;C57BL/6N和BALB/c組的差異出現(xiàn)較晚。(5)C57BL/6J和BALB/c小鼠模型組與Control組的結(jié)腸長(zhǎng)度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而C57BL/6N組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。綜上分析確認(rèn)C57BL/6J小鼠對(duì)DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎最為敏感。2.糞便移植(FMT)干預(yù)評(píng)價(jià):FMT能有效干預(yù)DSS結(jié)腸炎引起的小鼠體重下降,在實(shí)驗(yàn)第6天FMT+DSS組平均體重(15.60±0.87)g顯著高于PBS+DSS組的平均體重(14.42±0.99g,P0.0])。FMT+DSS組糞便形態(tài)評(píng)分在第5天顯著低于PBS+DSS組(P0.01),便潛血評(píng)分在第2—4天均顯著低于PBS+DSS組(P0.01);FMT+DSS組的DAI評(píng)分從第2天開始顯著低于PBS+DSS組。FMT組第6天的平均結(jié)腸長(zhǎng)度顯著高于PBS+DSS組(4.90±0.39 vs 4.41±0.41 cm,P0.01);與PBS+DSS組相比,FMT+DSS組的結(jié)腸炎癥病理學(xué)變化較輕。結(jié)腸組織的mRNA基因表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)DSS可誘導(dǎo)多種基因不同程度地表達(dá),但FMT干預(yù)主要引起Claudin2基因的表達(dá)上調(diào),與PBS+DSS組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.75±0.32 vs 0.36±0.20,P0.05)。該結(jié)果表明FMT干預(yù)有效減輕了 DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展的臨床癥狀、結(jié)腸的大體和病理病變,并且引起了宿主結(jié)腸組織的基因表達(dá)變化,提示Claudin2基因的上調(diào)表達(dá)可能參與FMT影響DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展的干預(yù)機(jī)制。3.乳酸桿菌HT121-2干預(yù)評(píng)價(jià):乳酸桿菌干預(yù)組糞便形態(tài)評(píng)分和DAI在第3、4天顯著低于模型組(P0.05),糞便潛血評(píng)分和體重減輕率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。乳酸桿菌干預(yù)組第6天的平均結(jié)腸長(zhǎng)度顯著高于PBS+DSS組(4.7±0.35 vs 4.38±0.40cm,P0.05);與PBS+DSS組相比,乳酸桿菌干預(yù)組的結(jié)腸炎癥病理學(xué)變化較輕,病理分級(jí)評(píng)分有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)腸組織的mRNA基因表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌干預(yù)可引起結(jié)腸組織中抗微生物肽Reg3γ的明顯表達(dá)上調(diào),與PBS+DSS 組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(156.24±49.46vs89.25±46.20)(P0.05)。該結(jié)果表明乳酸桿菌干預(yù)能夠一定程度減輕DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展的臨床癥狀、結(jié)腸的大體和病理病變,還引起了宿主結(jié)腸組織的Reg3γ基因表達(dá)的顯著變化,提示Reg3γ基因可能參與了乳酸桿菌保護(hù)DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展。4.DSS誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠急性結(jié)腸炎中3型天然淋巴細(xì)胞的分布與功能研究初探:結(jié)果顯示DSS處理導(dǎo)致小鼠腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞所占比例下降,固有層淋巴細(xì)胞發(fā)生明顯聚集。正常對(duì)照組和DSS模型組小鼠腸道固有層能分泌IL-22和IL-17A的Lineage+ CD4+淋巴細(xì)胞比例均小于1%,即DSS誘導(dǎo)的早期急性結(jié)腸炎中固有層Lineage+ CD4+淋巴細(xì)胞不是產(chǎn)生IL-17A和IL-22的主要細(xì)胞來源。研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生IL-22和IL-17A的細(xì)胞在Lineage-CD127+淋巴細(xì)胞中的比例分別是43.34%和18.04%,即腸道固有層Lineage-CD127+淋巴細(xì)胞是DSS誘導(dǎo)的小鼠早期急性結(jié)腸炎中IL-22和IL-17A的主要來源細(xì)胞之一。結(jié)論 1.對(duì)比 C57BL/6J、C57BL/6N 和 BALB/c 小鼠,確認(rèn)了 C57BL/6J 對(duì) DSS誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎最為敏感。2.FMT干預(yù)和乳酸桿菌HT121-2干預(yù)對(duì)DSS誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠急性結(jié)腸炎都有保護(hù)作用。DSS誘導(dǎo)宿主腸道組織IL-17A,IL-22,Claudin2,TNF-α等多種基因的表達(dá)變化,但FMT和乳酸桿菌干預(yù)引起宿主腸組織基因表達(dá)不同,提示兩種干預(yù)的機(jī)制可能不同。3.DSS誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎早期產(chǎn)生IL-17A和IL-22的主要細(xì)胞來源是腸道固有層Lineage-CD127+淋巴細(xì)胞。
【圖文】：

兩組之間平均結(jié)腸長(zhǎng)度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｚ＾Ｏ．０５）；邋ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的ＤＳＳ組逡逑實(shí)驗(yàn)第６天結(jié)腸長(zhǎng)度為（６．０８±０．４８），邋Ｃｏｎｔｒｏｌ組的實(shí)驗(yàn)第６天結(jié)腸長(zhǎng)度為逡逑（７．００±０．２６）邋ｃｍ，兩組之間結(jié)腸長(zhǎng)度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ＜０．０５）（如圖１－２）。根據(jù)逡逑結(jié)腸長(zhǎng)度指標(biāo)可知

組便潛血評(píng)在實(shí)驗(yàn)的第２－４天明顯低于ＰＢＳ＋ＤＳＳ組（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；逡逑ＦＭＴ＋ＤＳＳ組ＤＡＩ評(píng)分從第２天開始明顯低于ＦＭＴ＋ＤＳＳ組（／＾Ｏ．Ｏ〗或Ｐ＜０．０１）逡逑（如圖２－１邋）。總之ＦＭＴ能顯著保護(hù)ＤＳＳ誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型體重變化，潛血逡逑評(píng)分和ＤＡＩ評(píng)分。逡逑１；：＾＾邐！：邐Ｚ７逡逑”邐．邐．邐Ｗ邐＾邐？邐ｊ邐１—逡逑，＾邋＾邋，邋……逡逑Ｔｍｅ邋（ｄ）邐Ｔｉｍｅ邋（ｄ）逡逑＋邋ＰＢＳ＋ＤＳＳ邐＾邐？邋ＰＢＳ＋ＤＳＳ逡逑？邋４－邐＊？邐邐邐？邐ＦＭＴ＋ＤＳＳ邐４－邐＊＊邐Ｆ＾ＴＴ－ｆＤＳＳ逡逑Ｕ邐丨逡逑0邋N——？邋．邋．邋ｒ—邐0＜邐，邋，邋，邋ｒ—逡逑＾邋ｋ邋？ｖ邋＾邐＼邐＾邋Ｖ邋？＞逡逑Ｔｉｍｅ邋（ｄ）邐Ｔｉｍｅ逡逑圖２－１：邋ＦＭＴ＋ＤＳＳ組和ＰＢＳ＋ＤＳＳ組小鼠每天的體重，糞便形態(tài)評(píng)分，糞便潛血評(píng)分及ＤＡＩ逡逑評(píng)分的變化趨勢(shì)（ＰｃＯ．ＯＳ）逡逑２．４．３結(jié)腸長(zhǎng)度逡逑Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠的ＤＳＳ結(jié)腸炎模型中結(jié)腸長(zhǎng)度是一個(gè)敏感的指標(biāo)，ＦＭＴ＋ＤＳＳ逡逑組的結(jié)腸長(zhǎng)度在實(shí)驗(yàn)第６天是（４．９０±０．３９）邋ｃｍ，明顯長(zhǎng)于ＰＢＳ＋ＤＳＳ組實(shí)驗(yàn)第６逡逑天結(jié)腸長(zhǎng)度（４．４１±０．４１）邋ｃｍ
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R574.62

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2692699