【摘要】：目的:建立長(zhǎng)期傳代、形態(tài)和生物學(xué)特性穩(wěn)定的永生化小鼠肝星狀細(xì)(mouse hepatic stellate cells,mHSCs)系。方法:分離、培養(yǎng)小鼠的原代HSCs,通過(guò)攜帶人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因(hTERT)的逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的HSCs,經(jīng)G418篩選后挑選單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行單克隆培養(yǎng)及傳代,命名為hTERT-mHSCs。TRAP-ELISA法檢測(cè)轉(zhuǎn)染hTERT基因后細(xì)胞的端粒酶活性;免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)α-SMA、Desmin及Vimentin的表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)相關(guān)基因mRNA的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD40等細(xì)胞表面免疫分子的表達(dá);TGF-β1刺激細(xì)胞后qRT-PCR法檢測(cè)α1(Ⅰ)型膠原的表達(dá)變化。結(jié)果:hTERT-mHSCs可以穩(wěn)定傳代培養(yǎng),hTERT-mHSCs的hTERT基因的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性。細(xì)胞免疫化學(xué)染色顯示其能表達(dá)α-SMA、Desmin及Vimentin。qRT-PCR結(jié)果顯示其相關(guān)基因的mRNA表達(dá)相比較原代培養(yǎng)的小鼠HSCs沒(méi)有明顯的表達(dá)差異(p0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示其表達(dá)的免疫分子相比原代培養(yǎng)的小鼠HSCs也沒(méi)有明顯差異。TGF-β1刺激轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染的小鼠HSCs后,α1(Ⅰ)型膠原的表達(dá)都明顯增加。結(jié)論:成功建立永生化小鼠肝星狀細(xì)胞系,該細(xì)胞系的基本生物學(xué)特征與活化的原代小鼠肝星狀細(xì)胞相似。
【圖文】：

肝臟其它非實(shí)質(zhì)細(xì)胞層圖1 經(jīng)percoll梯度密度離心法從C57/B6小鼠肝臟分離出的肝臟細(xì)胞的分層情況：第一層為肝細(xì)胞碎片層，此層含有很多的肝細(xì)胞和細(xì)胞碎片；第二層為絮狀的 HSCs 層；第三層為肝臟其它非實(shí)質(zhì)細(xì)胞如 DC、Kuffer 等細(xì)胞層；第四層為紅細(xì)胞層A BC D圖 2 從 C57/B6 小鼠肝臟分離出的 HSCs 原代培養(yǎng)時(shí)形態(tài)特征的變化情況：A：新分離的 HSCs(x100)；B: 原代培養(yǎng) 2d 的 HSCs(x100)；C: 原代培養(yǎng) 7d 的HSCs(x100)； D：原代培養(yǎng) 14d 的 HSCs(x100)。14

細(xì)胞片層肝星狀細(xì)層（絮狀紅細(xì)胞層肝臟其它實(shí)質(zhì)細(xì)胞 經(jīng)percoll梯度密度離心法從C57/B6小鼠肝臟分離出的肝臟細(xì)胞的分第一層為肝細(xì)胞碎片層，此層含有很多的肝細(xì)胞和細(xì)胞碎片；第二層為SCs 層；第三層為肝臟其它非實(shí)質(zhì)細(xì)胞如 DC、Kuffer 等細(xì)胞層；第四層層A B
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王吉耀;重視肝纖維化的基礎(chǔ)與臨床研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年15期

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本文編號(hào)：2692333