【摘要】：目的本課題主要研究CCl_4誘導(dǎo)不同性別小鼠的急性化學(xué)性肝損傷過程中,肝細(xì)胞的應(yīng)激、增殖、凋亡和代謝等相關(guān)因子以及mRNA、micro RNAs、lnc RNA、circRNA的表達(dá)差異,闡明性別差異因素對(duì)小鼠急性化學(xué)性肝損傷影響的分子機(jī)制。方法健康昆明小鼠120只,雌、雄各60只,隨機(jī)分組,三組雌性組(每組20只)和三組雄性組(每組20只),分組如下:正常組(normal group,NG),正常加腹腔注射橄欖油組(normal control group,NCG)和腹腔注射CCl_4組(0.1%CCl_4橄欖油溶液0.1ml/10g)(carbon tetrachloride group,CTG);腹腔注射CCl_4 24小時(shí)后,將各組小鼠進(jìn)行眼球采血,離心后取血清,測定各組血清中谷丙(ALT)、谷草(AST)轉(zhuǎn)氨酶的活性變化。采用頸椎脫臼處死小鼠取肝臟,并將各組均分為三份:一份固定后用于做組織細(xì)胞學(xué)分析,如下實(shí)驗(yàn):蘇木精-伊紅(HE)染色檢測各組間小鼠肝組織細(xì)胞形態(tài)損傷的差異情況;過碘酸-雪夫試劑(PAS)染色檢測各組間小鼠肝組織細(xì)胞糖原的含量變化的差異情況;熒光染料(Hochest33258)熒光染色檢測各組小鼠間肝細(xì)胞的凋亡差異情況;一份用于m RNA轉(zhuǎn)錄測序檢測,進(jìn)行RNA的提取及轉(zhuǎn)錄測序,篩選各組肝臟間的差異表達(dá)的mRNA、micro RNAs、lncRNA、circRNA及其差異基因,并用熒光定量RT-qPCR對(duì)測序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;一份肝組織混合后研磨提取組織蛋白用于蛋白印跡檢測(WB):檢測應(yīng)激因子HSP27、HSP70、增殖細(xì)胞核抗原PCNA、半胱蛋白酶-3 Caspase-3、Bcl-2相關(guān)X蛋白Bax、Bcl-2及代謝酶細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)的表達(dá)情況。結(jié)果:注射CCl_4 24小時(shí)后,雌性和雄性小鼠肝損傷情況:1.血清中AST、ALT酶活性水平,雌性比雄性顯著升高(P0.01)。2.蘇木精-伊紅(HE)染色情況:肝細(xì)胞壞死程度,雌性組小鼠顯著高于雄性組(P0.01)。3.過碘酸雪夫試劑(PAS)染色結(jié)果:雄性組小鼠肝臟細(xì)胞中糖原的含量高于雌性組(P0.05)。4.Hoechst33258熒光染色情況:結(jié)果顯示雌性組比雄性組小鼠肝細(xì)胞凋亡的數(shù)目顯著增多(P0.01)。5.RNA轉(zhuǎn)錄測序結(jié)果:雌性小鼠與雄性小鼠mRNA、micro RNAs、lncRNA、circRNA均存在顯著差異表達(dá),挑選差異表達(dá)基因進(jìn)行熒光定量PCR驗(yàn)證,結(jié)果與轉(zhuǎn)錄測序結(jié)果基本一致。6.蛋白印跡結(jié)果:雄性組比雌性組小鼠肝細(xì)胞內(nèi)HSP27,HSP70,PCNA和Bcl-2的蛋白表達(dá)量高(P0.05或P0.01),而Bax,Caspase-3,CYP2E1的蛋白表達(dá)量低(P0.05或P0.01)。結(jié)論小鼠急性化學(xué)性肝損傷在糖原儲(chǔ)備、RNA表達(dá)等方面存在明顯的性別差異。這種差異主要通過基因的差異轉(zhuǎn)錄mRNA、mi RNA、lncRNA及circ RNA后,翻譯產(chǎn)生調(diào)節(jié)肝細(xì)胞應(yīng)激、增殖、凋亡的相關(guān)蛋白的差異表達(dá)來完成。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R575

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