【摘要】： 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)元件(HBV posttranscriptional regulatory element, HPRE)是位于HBV基因組內(nèi)的一段調(diào)控序列。因其在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)HBV的基因表達(dá)而命名。它對(duì)HBV基因的高表達(dá)是非常重要的。自從1993年被Huang J等發(fā)現(xiàn)后,它的功能機(jī)制及與其相互作用的蛋白因子一直是人們的研究熱點(diǎn)。雖然HPRE的作用機(jī)制至今還不是完全清楚,但比較一致的認(rèn)為是HPRE依賴與細(xì)胞蛋白的結(jié)合來發(fā)揮它的作用,因此驗(yàn)證HPRE結(jié)合蛋白就可以幫助明確HPRE在HBV生活周期中發(fā)揮的作用。多聚嘧啶序列結(jié)合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)就是已經(jīng)鑒定出的能和HPRE結(jié)合的一種核蛋白。 目的:表達(dá)純化大量PTB-His融合蛋白,體外驗(yàn)證PTB與HPRE RNA之間的結(jié)合作用;利用CAT檢測(cè)系統(tǒng)pDM138-HPRE驗(yàn)證PTB對(duì)HPRE功能的影響;用HepG2.2.15細(xì)胞系、HBs-HPRE瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞探討PTB對(duì)HBV基因表達(dá)的作用機(jī)制。 方法:1.用XhoI酶切線性化pGEM-11zf-HPRE質(zhì)粒DNA,利用T7RNA聚合酶,以體外轉(zhuǎn)錄地 ?ê銑，

本文編號(hào)：2687178