【摘要】： 目的本課題通過觀察外源性表皮生長因子(Epidermal Growth Factor,EGF)對未成熟腸道粘膜損傷中細胞增殖與凋亡的影響,并研究其受體表達的變化,探討表皮生長因子在未成熟腸道粘膜損傷與修復中的可能作用。 方法新生1日齡SD大鼠30只隨機分為3組,每組10只。A組為正常對照組(母乳喂養(yǎng)組);B組為模型組(NEC+母乳喂養(yǎng)組),C組為干預組(NEC+母乳喂養(yǎng)+皮下注射EGF200μg/kg·d組)。建立NEC(Necrotizing Enterocolitis,NEC)模型,新生鼠置入缺O(jiān)_2箱中給予100%N_2流量15L/min缺氧90s,隨后置入冰箱給予4℃冷刺激,持續(xù)10min,結(jié)束后放回保育箱,每天2次,連續(xù)3天,放回母鼠身邊喂養(yǎng),最后1次缺氧、冷刺激后24h空腹處死新生鼠。取回盲部近端回腸2～3cm腸道組織固定、包埋、切片。H.E.染色比較三組間的小腸粘膜組織病理學表現(xiàn);免疫組化技術(shù)檢測腸粘膜細胞增殖(PCNA法)與凋亡(TUNEL法)的變化;并應用實時熒光定量PCR技術(shù)(real time PCR)檢測三組間腸道粘膜中表皮生長因子受體(EGF-R)mRNA的表達。 結(jié)果(1)NEC建模過程中,B和C組新生鼠不同程度出現(xiàn)活動度下降、嗜睡、攝食下降、胃潴留、腹脹、腹瀉及消瘦表現(xiàn);B組體重增加值明顯低于對照組(P=0.002),C組與B組體重增加值也有明顯差異(P=0.006),C組與對照組比較無明顯差異(P=0.85)。(2)B組小腸粘膜組織病理學評分高于A組,粘膜損傷嚴重;C組小腸粘膜損傷較B組減輕,表現(xiàn)為其平均組織病理學評分低于B組,但仍高于A組。(3)B組腸隱窩區(qū)PCNA陽性細胞數(shù)明顯低于A組(P=0.000);C組腸隱窩區(qū)PCNA陽性細胞數(shù)較B組增多有顯著性差異(P=0.017)。(4)B組小腸粘膜上皮細胞TUNEL陽性細胞數(shù)明顯高于A組(P=0.000);C組小腸粘膜上皮細胞TUNEL陽性細胞數(shù)顯著低于B組(P=0.001)。(5)B組腸粘膜細胞EGFR mRNA水平低于A組(P=0.029),有顯著性差異;C組外源性EGF增加腸粘膜細胞EGFR mRNA的表達(P=0.042),與B組比較有統(tǒng)計學意義,而與A組比較無統(tǒng)計學差異。 結(jié)論未成熟腸道發(fā)生壞死性小腸結(jié)腸炎時,其粘膜損傷嚴重,腸粘膜細胞除發(fā)生細胞壞死以外,細胞凋亡亦增加、細胞增殖卻減慢。外源性給予表皮生長因子,可減輕腸粘膜損傷程度,減少粘膜細胞凋亡同時也增加細胞增殖。外源性表皮生長因子還可影響未成熟腸道粘膜損傷時其受體的表達。外源性表皮生長因子增加受損粘膜EGFR的表達,可能與其導致粘膜細胞增殖增多、凋亡減少密切相關。
【圖文】：

復旦大學碩士學位論文五、實時熒光定量PCR測定腸粘膜細胞EGFRInRNA表達NEC組新生鼠小腸粘膜細胞EGFR1llRNA水平低于對照組(P=0.029)(表3、圖5);補充外源性EGF組新生鼠腸粘膜細胞EGFRniRNA表達較NEC組升高(P=0.042)，，與對照組的EGFRrnRNA差異無統(tǒng)計學差異(P二0.745)。表3各組腸粘膜細胞EGFRmRNA相對含量組別相對含量對照組0.100NEC組0.088*NEC+EGF組0.101**注:*與對照組比較P<0.05與NEC組t匕較P<0.05
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R574

【參考文獻】

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1 孫鵬;付小兵;陳偉;張建強;閆穎;;PCNA,EGF,EGFR在正�？谇徽衬ぶ械谋磉_及其意義[J];感染.炎癥.修復;2003年02期

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本文編號：2683933