【摘要】：局部組織腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)廣泛地存在于各組織器官之中，對組織器官纖維化的形成具有促進作用。其效應(yīng)分子血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)和醛固酮(Aldo)是重要的致炎因子，可促進細胞增殖和細胞外基質(zhì)(ECM)的合成。近年研究發(fā)現(xiàn)：肝內(nèi)RAAS與肝纖維化的形成關(guān)系密切，，AngⅡ可激活肝星狀細胞(HSC)并促進ECM的合成。肝內(nèi)RAAS成為肝纖維化研究的新靶點。 核轉(zhuǎn)錄因子KB(NF-κB)、激活蛋白1(AP-1)和EGR-1是與炎癥和組織纖維化密切相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子。它們可被各種致炎因子激活，調(diào)控與炎癥和纖維化有關(guān)的基因如腫瘤壞死因子α(TNFα)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)、α1-Ⅰ型前膠原和血小板衍生生長因子-BB(PDGF-BB)等的轉(zhuǎn)錄。 目前，AngⅡ和Aldo誘導(dǎo)HSC激活、增殖、轉(zhuǎn)化和ECM合成的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制仍未明確，有關(guān)RAAS的效應(yīng)分子對HSC核轉(zhuǎn)錄因子通路影響的研究報告較為鮮見。 本研究試圖在原有的工作基礎(chǔ)上，運用分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)的方法，從體內(nèi)和體外研究兩個方面進行系統(tǒng)研究，目的在于探討AngⅡ和Aldo對HSC中NF-κB、AP-1和EGR-1等三個重要的核轉(zhuǎn)錄因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，進一步闡明AngⅡ和Aldo促進HSC激活、轉(zhuǎn)化、ECM合成以及促纖維化因子分泌的機制。同時觀察AngⅡ是否也可作 用于枯否細胞(KC)從而促進肝纖維化的進程。 一、動物實驗研究:以四氯化碳皮下注射誘導(dǎo)大鼠肝纖維化，同時 分別以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)一培垛普利和血管緊張素n一1 型受體(Ar一1受體)阻滯劑一氯沙坦干預(yù)4周和6周。組織學(xué)觀察培噪 普利和氯沙坦對實驗性肝纖維化的抑制作用;放免檢測血清中透明質(zhì)酸 (HA)、層粘蛋白(LN)的含量;酶圖法檢測肝組織中金屬蛋白酶一2， 9(MMP一2，9)的活性;Westem blot檢測組織中AT一1受體、PDGF一BB 和轉(zhuǎn)化生長因子即(TGF一pl)的表達;電泳遷移率變更分析(EMSA) 檢測組織中NF一沼的活性;TLJNEL法及免疫組化雙標檢測HSC和肝細 胞原位凋亡。結(jié)果顯示:研究發(fā)現(xiàn):培噪普利和氯沙坦對實驗性肝纖維 化具有抑制作用;培噪普利和氯沙坦可抑制肝組織NF一忍活性以及致纖 維化因子ToF一pl和pDGF一BB的蛋白表達和MMp一2、MMp一9的活性。 培噪普利和氯沙坦不能誘導(dǎo)HSC和肝細胞的凋亡。 二、細胞水平研究:采用HSC一T6細胞株，分別予細胞外調(diào)節(jié)蛋 白激酶1/2(ERKI/2)特異性抑制劑UO 126、戶工1受體阻滯劑irbesartan 和抗氧化劑N一乙酸半朧氨酸(NAC)預(yù)先處理細胞1小時后，再予Angll 或Aldo刺激。 1.Angll和Aldo可通過ERK通路作用于Hse。westem blot結(jié) 果顯示:Angll和Aldo可誘導(dǎo)磷酸化P42/44的表達，并呈時間依賴性， 1 0 min達到峰值，之后逐漸減低。U0126可抑制磷酸化P42/44的表達。 Ithesartan可抑制Angll誘導(dǎo)的磷酸化P42/44的表達。 2.Angn和Aldo對HsC中NF一出通路的影響。結(jié)果顯示:Angn 和Aldo可增強NF一慮的DNA結(jié)合活性并促使NF一沼核轉(zhuǎn)位，該活性 可被irbesa到習(xí)n和ACEI抑制;Uo126則不能抑制其活性;NAC可顯著 抑制Angn誘導(dǎo)的NF一出的活化，部分抑制Aldo誘導(dǎo)的NF一沼激活。 此外，Angn和Aldo可抑制細胞漿內(nèi)I沼a的蛋白質(zhì)水平。Angll和Aldo 一2- 可上調(diào)TN FamRNA和COX一2蛋白的表達。 3.Angn和Aldo對HSC中AP一1通路的影響。結(jié)果顯示:Angll 和Aldo可增強HSC的AP一1的DNA結(jié)合活性。ithesartan和ACEI可 顯著抑制AP一1的活性;uo 126和NAc可以顯著抑制Angn誘導(dǎo)的AP一1 的活化，部分抑制Aldo誘導(dǎo)的AP一1的活化。Angll和Aldo可誘導(dǎo)al一I 型前膠原mRNA的表達。 4.Angll和Aldo對Hsc中 EGR一1通路的影響。結(jié)果顯示:Angn 和Aldo可顯著誘導(dǎo)HSC的EGR一1 DNA結(jié)合活性。irbesartan可抑制 EGR一1的DNA結(jié)合活性且呈濃度依賴性。uo126可以顯著抑制Angll 和Aldo誘導(dǎo)的EGR一1的活化。ACEI對EGR一1的活性的影響尚不確定， AcEI的濃度為1林M和10nM時，EGR一1的活性被顯著抑制，當(dāng)濃度 減至o.IllM時，EGR一1活性反而顯著增加。Angn和Akl�？稍黾親sc PDGF一BB的蛋白質(zhì)水平。 5.原代培養(yǎng)Kc，免疫組化顯示AT~1受體可在Kc中表達，Angll 可促使NF一沼核轉(zhuǎn)位，并誘導(dǎo)PDGF一BB和TGF一盯的表達。 通過以上研究可以得出以下結(jié)論: 1.培噪普利和氯沙坦對實驗性肝纖維化具有抑制作用;培噪普利 和氯沙坦可抑制肝組織NF一出活性以及致纖維化因子TGF一pl和 PDGF一BB的蛋白表達和MMP一2、MMP一9的活性。培噪普利和氯沙坦 不能誘導(dǎo) HSC和肝細胞的凋亡。 Ang Angll和 11和Aldo Aldo可經(jīng)ERK通路誘導(dǎo)HSC AP一1和EGR一1活性增 強; 而與 對HSC的NF一慮活性的誘導(dǎo)作用不依賴ERK通路， I沼的磷酸化和降解有關(guān)。 3.Angll和Aldo可促進NF 表達;Angll和Aldo可促進AP- 一沼調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因 調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因al- TNFa和COX一2的 Ang 11和Aldo可促進EoR一l 調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因PDGF一BB 一3- 型前膠原的表達; 的蛋白質(zhì)表達。 4.肝枯否細胞可表達AT.1受體;Angll可激活枯否細胞NF一慮并促 使其核內(nèi)轉(zhuǎn)移。Angn可促進枯否細胞PDGF一BB和TGF一pl的蛋白質(zhì) 表達。
【圖文】：

表1.各組大鼠肝纖維化分級(鼠數(shù))4周6周組別0▲1234n01234n模型組015017000336培噪普利組*132006011406氯沙坦組*142007002406對照組*△600006600006與模型組比較，*P<0.05;與培垛普利組(氯沙坦組)比較，△P<0.05;培噪普利(4周)與培噪普利組(6周)比較，P<0.05‘0、l、2、3、4為纖維化分級

表1.各組大鼠肝纖維化分級(鼠數(shù))4周6周組別0▲1234n01234n模型組015017000336培噪普利組*132006011406氯沙坦組*142007002406對照組*△600006600006與模型組比較，*P<0.05;與培垛普利組(氯沙坦組)比較，△P<0.05;培噪普利(4周)與培噪普利組(6周)比較，P<0.05‘0、l、2、3、4為纖維化分級
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R575.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 洪志飛，李月紅;腎素－血管緊張素系統(tǒng)研究的新動向[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;1996年05期

本文編號：2681977