【摘要】：局部組織腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)廣泛地存在于各組織器官之中，對(duì)組織器官纖維化的形成具有促進(jìn)作用。其效應(yīng)分子血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)和醛固酮(Aldo)是重要的致炎因子，可促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成。近年研究發(fā)現(xiàn)：肝內(nèi)RAAS與肝纖維化的形成關(guān)系密切，，AngⅡ可激活肝星狀細(xì)胞(HSC)并促進(jìn)ECM的合成。肝內(nèi)RAAS成為肝纖維化研究的新靶點(diǎn)。 核轉(zhuǎn)錄因子KB(NF-κB)、激活蛋白1(AP-1)和EGR-1是與炎癥和組織纖維化密切相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子。它們可被各種致炎因子激活，調(diào)控與炎癥和纖維化有關(guān)的基因如腫瘤壞死因子α(TNFα)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)、α1-Ⅰ型前膠原和血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB(PDGF-BB)等的轉(zhuǎn)錄。 目前，AngⅡ和Aldo誘導(dǎo)HSC激活、增殖、轉(zhuǎn)化和ECM合成的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制仍未明確，有關(guān)RAAS的效應(yīng)分子對(duì)HSC核轉(zhuǎn)錄因子通路影響的研究報(bào)告較為鮮見。 本研究試圖在原有的工作基礎(chǔ)上，運(yùn)用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的方法，從體內(nèi)和體外研究?jī)蓚�(gè)方面進(jìn)行系統(tǒng)研究，目的在于探討AngⅡ和Aldo對(duì)HSC中NF-κB、AP-1和EGR-1等三個(gè)重要的核轉(zhuǎn)錄因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，進(jìn)一步闡明AngⅡ和Aldo促進(jìn)HSC激活、轉(zhuǎn)化、ECM合成以及促纖維化因子分泌的機(jī)制。同時(shí)觀察AngⅡ是否也可作 用于枯否細(xì)胞(KC)從而促進(jìn)肝纖維化的進(jìn)程。 一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究:以四氯化碳皮下注射誘導(dǎo)大鼠肝纖維化，同時(shí) 分別以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)一培垛普利和血管緊張素n一1 型受體(Ar一1受體)阻滯劑一氯沙坦干預(yù)4周和6周。組織學(xué)觀察培噪 普利和氯沙坦對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的抑制作用;放免檢測(cè)血清中透明質(zhì)酸 (HA)、層粘蛋白(LN)的含量;酶圖法檢測(cè)肝組織中金屬蛋白酶一2， 9(MMP一2，9)的活性;Westem blot檢測(cè)組織中AT一1受體、PDGF一BB 和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子即(TGF一pl)的表達(dá);電泳遷移率變更分析(EMSA) 檢測(cè)組織中NF一沼的活性;TLJNEL法及免疫組化雙標(biāo)檢測(cè)HSC和肝細(xì) 胞原位凋亡。結(jié)果顯示:研究發(fā)現(xiàn):培噪普利和氯沙坦對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維 化具有抑制作用;培噪普利和氯沙坦可抑制肝組織NF一忍活性以及致纖 維化因子ToF一pl和pDGF一BB的蛋白表達(dá)和MMp一2、MMp一9的活性。 培噪普利和氯沙坦不能誘導(dǎo)HSC和肝細(xì)胞的凋亡。 二、細(xì)胞水平研究:采用HSC一T6細(xì)胞株，分別予細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋 白激酶1/2(ERKI/2)特異性抑制劑UO 126、戶工1受體阻滯劑irbesartan 和抗氧化劑N一乙酸半朧氨酸(NAC)預(yù)先處理細(xì)胞1小時(shí)后，再予Angll 或Aldo刺激。 1.Angll和Aldo可通過ERK通路作用于Hse。westem blot結(jié) 果顯示:Angll和Aldo可誘導(dǎo)磷酸化P42/44的表達(dá)，并呈時(shí)間依賴性， 1 0 min達(dá)到峰值，之后逐漸減低。U0126可抑制磷酸化P42/44的表達(dá)。 Ithesartan可抑制Angll誘導(dǎo)的磷酸化P42/44的表達(dá)。 2.Angn和Aldo對(duì)HsC中NF一出通路的影響。結(jié)果顯示:Angn 和Aldo可增強(qiáng)NF一慮的DNA結(jié)合活性并促使NF一沼核轉(zhuǎn)位，該活性 可被irbesa到習(xí)n和ACEI抑制;Uo126則不能抑制其活性;NAC可顯著 抑制Angn誘導(dǎo)的NF一出的活化，部分抑制Aldo誘導(dǎo)的NF一沼激活。 此外，Angn和Aldo可抑制細(xì)胞漿內(nèi)I沼a的蛋白質(zhì)水平。Angll和Aldo 一2- 可上調(diào)TN FamRNA和COX一2蛋白的表達(dá)。 3.Angn和Aldo對(duì)HSC中AP一1通路的影響。結(jié)果顯示:Angll 和Aldo可增強(qiáng)HSC的AP一1的DNA結(jié)合活性。ithesartan和ACEI可 顯著抑制AP一1的活性;uo 126和NAc可以顯著抑制Angn誘導(dǎo)的AP一1 的活化，部分抑制Aldo誘導(dǎo)的AP一1的活化。Angll和Aldo可誘導(dǎo)al一I 型前膠原mRNA的表達(dá)。 4.Angll和Aldo對(duì)Hsc中 EGR一1通路的影響。結(jié)果顯示:Angn 和Aldo可顯著誘導(dǎo)HSC的EGR一1 DNA結(jié)合活性。irbesartan可抑制 EGR一1的DNA結(jié)合活性且呈濃度依賴性。uo126可以顯著抑制Angll 和Aldo誘導(dǎo)的EGR一1的活化。ACEI對(duì)EGR一1的活性的影響尚不確定， AcEI的濃度為1林M和10nM時(shí)，EGR一1的活性被顯著抑制，當(dāng)濃度 減至o.IllM時(shí)，EGR一1活性反而顯著增加。Angn和Akl�？稍黾親sc PDGF一BB的蛋白質(zhì)水平。 5.原代培養(yǎng)Kc，免疫組化顯示AT~1受體可在Kc中表達(dá)，Angll 可促使NF一沼核轉(zhuǎn)位，并誘導(dǎo)PDGF一BB和TGF一盯的表達(dá)。 通過以上研究可以得出以下結(jié)論: 1.培噪普利和氯沙坦對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化具有抑制作用;培噪普利 和氯沙坦可抑制肝組織NF一出活性以及致纖維化因子TGF一pl和 PDGF一BB的蛋白表達(dá)和MMP一2、MMP一9的活性。培噪普利和氯沙坦 不能誘導(dǎo) HSC和肝細(xì)胞的凋亡。 Ang Angll和 11和Aldo Aldo可經(jīng)ERK通路誘導(dǎo)HSC AP一1和EGR一1活性增 強(qiáng); 而與 對(duì)HSC的NF一慮活性的誘導(dǎo)作用不依賴ERK通路， I沼的磷酸化和降解有關(guān)。 3.Angll和Aldo可促進(jìn)NF 表達(dá);Angll和Aldo可促進(jìn)AP- 一沼調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因 調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因al- TNFa和COX一2的 Ang 11和Aldo可促進(jìn)EoR一l 調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因PDGF一BB 一3- 型前膠原的表達(dá); 的蛋白質(zhì)表達(dá)。 4.肝枯否細(xì)胞可表達(dá)AT.1受體;Angll可激活枯否細(xì)胞NF一慮并促 使其核內(nèi)轉(zhuǎn)移。Angn可促進(jìn)枯否細(xì)胞PDGF一BB和TGF一pl的蛋白質(zhì) 表達(dá)。
【圖文】：

表1.各組大鼠肝纖維化分級(jí)(鼠數(shù))4周6周組別0▲1234n01234n模型組015017000336培噪普利組*132006011406氯沙坦組*142007002406對(duì)照組*△600006600006與模型組比較，*P<0.05;與培垛普利組(氯沙坦組)比較，△P<0.05;培噪普利(4周)與培噪普利組(6周)比較，P<0.05‘0、l、2、3、4為纖維化分級(jí)

表1.各組大鼠肝纖維化分級(jí)(鼠數(shù))4周6周組別0▲1234n01234n模型組015017000336培噪普利組*132006011406氯沙坦組*142007002406對(duì)照組*△600006600006與模型組比較，*P<0.05;與培垛普利組(氯沙坦組)比較，△P<0.05;培噪普利(4周)與培噪普利組(6周)比較，P<0.05‘0、l、2、3、4為纖維化分級(jí)
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 洪志飛，李月紅;腎素－血管緊張素系統(tǒng)研究的新動(dòng)向[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;1996年05期

本文編號(hào)：2681977