【摘要】：目的：研究腸道亞健康便秘(intestinal tract sub-health constipation)及大便不成形(the bowel does not shape)人群結(jié)腸粘膜蛋白質(zhì)的變化特征,并對(duì)部分差異蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定與功能分析,為探討腸道亞健康便秘及大便不成形人群的結(jié)腸粘膜改變機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法：腸道亞健康便秘20例,診斷均符合便秘羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn),大便不成形患者20例,正常對(duì)照組20例。分別在進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查時(shí),直視下取結(jié)腸粘膜,立即置于含0.1%苯甲基磺酰氟的冰鹽水中洗凈,液氮保存。提取組織總蛋白后,進(jìn)行雙向凝膠電泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE),采用考染法對(duì)凝膠進(jìn)行顯色固定,掃描儀獲取圖像。使用Image Master 2D Elite分析軟件進(jìn)行圖像分析,篩選出在亞健康便秘組與大便不成形組中表達(dá)有明顯差異的蛋白質(zhì)點(diǎn),應(yīng)用生物質(zhì)譜,蛋白質(zhì)庫等技術(shù)對(duì)部分表達(dá)差異的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定、功能和臨床意義分析。 結(jié)果：正常對(duì)照組平均膠蛋白斑點(diǎn)數(shù)為535,便秘組平均膠蛋白斑點(diǎn)數(shù)為501,與正常對(duì)照組平均膠匹配點(diǎn)數(shù)為324,匹配率為64.67%；175個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的表達(dá)量存在顯著差異,挑選20個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行蛋白鑒定,鑒定出17個(gè)點(diǎn),其中10個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)上調(diào),7個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)經(jīng)鑒定為唾液酸酶、多聚胞嘧啶結(jié)合蛋白1、3-磷酸甘油醛脫氫酶、脂酶D、碳酸酐酶Ⅰ、類胰蛋白酶p-1、蛋白酶體激活復(fù)合物亞基2、MAWD結(jié)合蛋白、磷脂結(jié)合蛋白Ⅰ和肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶。表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)經(jīng)鑒定為細(xì)胞角蛋白8、乙醛脫氫酶1、鋅指蛋白658、硫氧還蛋白樣蛋白、β-肌動(dòng)蛋白、硫代硫酸硫轉(zhuǎn)移酶、YWHAZ蛋白。大便不成形組平均膠蛋白斑點(diǎn)數(shù)為517,與正常對(duì)照組平均膠匹配點(diǎn)數(shù)為366,匹配率為70.80%；150個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的表達(dá)量存在顯著差異,挑選10個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行蛋白鑒定,鑒定出8個(gè)點(diǎn),其中3個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)上調(diào),5個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)經(jīng)鑒定為碳酸酐酶Ⅰ、膜聯(lián)蛋白A5和親環(huán)素A。表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)經(jīng)鑒定為醛脫氫酶A1、線粒體羥甲基輔酶A合成酶、熱休克蛋白8、γ-肌動(dòng)蛋白和載脂蛋白A-I。 結(jié)論：1、應(yīng)用雙向凝膠電泳方法成功得到了腸道亞健康便秘和大便不成形人群結(jié)腸黏膜組織蛋白質(zhì)組表達(dá)圖譜。 2、腸道亞健康便秘組中鑒定出17個(gè)蛋白質(zhì)。有10個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)明顯上調(diào),7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)顯著下調(diào)。其中鋅指蛋白658、p-肌動(dòng)蛋白、YWHAZ蛋白和硫代硫酸硫轉(zhuǎn)移酶可能與亞健康便秘的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)；乙醛脫氫酶1、肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶、細(xì)胞角蛋白8及碳酸酐酶Ⅰ可能與長期便秘向腫瘤發(fā)展有關(guān)。 3、腸道亞健康大便不成形組中鑒定出8個(gè)蛋白質(zhì)。其中3個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)明顯上調(diào),5個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)明顯下調(diào)。
【圖文】：

白質(zhì)點(diǎn)的表達(dá)量由其在膠上的灰度體積(=面積X灰度)決定1后比較兩組平均膠的差異(均數(shù)進(jìn)行成組比較的t檢驗(yàn)，，P<0.05)，得到便秘組與正常對(duì)照組結(jié)腸粘膜表達(dá)變化差異大于2倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)共175個(gè)(圖2一3)，圖中(箭頭所示)標(biāo)出了得到鑒定的17個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。

某個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的表達(dá)量由其在膠上的灰度體積(=面積X灰度)決定1后比較兩組平均膠的差異(均數(shù)進(jìn)行成組比較的t檢驗(yàn)，P<0.05)，得到大便不成形組與正常對(duì)照組結(jié)腸粘膜表達(dá)變化差異大于2倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)共150個(gè)(圖2一4)，圖中(箭頭所示)標(biāo)出了得到鑒定的8個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R574.62

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本文編號(hào)：2680243