發(fā)布時(shí)間：2020-05-24 22:46

【摘要】：目的：探討以16SrRNA和18SrRNA基因?yàn)榛A(chǔ)的細(xì)菌聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法診斷急性胰腺炎并發(fā)全身性感染的價(jià)值和感染的病原體的特點(diǎn)。探索一種迅速檢測(cè)細(xì)菌感染的方法。 方法：選取2009年9月～2010年12月間收住昆明醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院的急性胰腺炎患者98例,(女30例,男68例,年齡14-89歲),不同時(shí)期不同部位標(biāo)本106份,(12份痰標(biāo)本,18份腹水標(biāo)本。76份血標(biāo)本)�；颊甙粗袊�(guó)急性胰腺炎診治指南(2007年)診斷標(biāo)準(zhǔn)納入。利用細(xì)菌16SrRNA基因和真菌18SrRNA的高度保守性,設(shè)計(jì)并合成通用引物,提取細(xì)(真)菌DNA進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR),采用2%瓊脂糖凝膠電泳(AGE)觀察擴(kuò)增結(jié)果,并進(jìn)行PCR靈敏性和特異性試驗(yàn)。PCR結(jié)果與常規(guī)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行比較。用SPSS11.5 For Windows進(jìn)行臨床資料數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果：所有細(xì)菌PCR均得到預(yù)期約1500bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,該引物僅擴(kuò)增細(xì)菌DNA,與病毒及人基因組DNA無(wú)交叉反應(yīng),其擴(kuò)增下限為10CFU/ml大腸埃希菌。所有真菌PCR均得到預(yù)期約197bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,該引物僅擴(kuò)增真菌DNA,與細(xì)菌及人基因組DNA無(wú)交叉反應(yīng),其擴(kuò)增下限為10CFU/ml白色假絲酵母菌。106份不同類型標(biāo)本中,常規(guī)培養(yǎng)陽(yáng)性率為20.75%(22/106),其中細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率19.81%(21/106),真菌培養(yǎng)陽(yáng)性率0.94%(1/106)；用PCR法檢測(cè)總陽(yáng)性率為32.07%(34/106),其中細(xì)菌16SrRNA基因PCR陽(yáng)性率28.30%(30/106),真菌18SrRNA基因PCR陽(yáng)性率3.77%(4/106)；培養(yǎng)和PCR一致陽(yáng)性率為18.87%(20/106)。PCR法優(yōu)于培養(yǎng)法(P0.05)。且其靈敏度為90.9%(20/22),特異度為83.33%(70/84)。只需6-8小時(shí)就可出結(jié)果,而培養(yǎng)方法則需3天。感染部位以腹腔最多,其次為呼吸道,再次為血液。 結(jié)論：以16SrRNA和18SrRNA基因?yàn)榛A(chǔ)的PCR法對(duì)診斷急性胰腺炎并發(fā)全身性感染有較高的快速性,敏感性及特異性。感染菌以大腸埃希菌和鮑曼不動(dòng)桿菌為主。 目的：檢測(cè)急性胰腺炎患者血清降鈣素原的表達(dá)和意義,探討降鈣素原預(yù)測(cè)急性胰腺炎繼發(fā)細(xì)菌感染的臨床價(jià)值。 方法：選取第一部分入選急性胰腺炎患者其中的76例,(男51例,女25例,年齡14-72歲)。AP患者根據(jù)是否合并SIRS,分為非SIRS組(15例)和SIRS組,SIRS組再根據(jù)是否合并細(xì)菌感染分為SIRS組(53例)和膿毒癥組(8例),分別在入院1周時(shí)采集入選患者血清,并采集臨床指標(biāo)CRP,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法(ELISA)測(cè)定血清PCT含量。應(yīng)用SSPS11.5 for Windows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。并根據(jù)第一部分PCR檢測(cè)結(jié)果比較CRP和PCT對(duì)于AP繼發(fā)感染的預(yù)測(cè)能力,繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線) 結(jié)果：血清PCT定量酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果顯示SIRS感染組患者PCT水平(2.68±0.84)ng/ml明顯高于非SIRS組(0.97±0.56)ng/ml和SIRS組(1.39±0.58),(P0.01)ng/ml(P0.01),但三組CRP值無(wú)顯著性差異(P0.05)。根據(jù)第一部分PCR檢測(cè)結(jié)果,繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線),PCT(AUC=0.737,P=0.001)對(duì)感染的預(yù)測(cè)能力明顯強(qiáng)于CRP(AUC=0.703,P=0.004)。以2.0ng/ml為預(yù)測(cè)閾值其敏感性為74.1%,特異性為67.5%。 結(jié)論：PCT是AP繼發(fā)感染早期較好的預(yù)測(cè)和觀察指標(biāo)。
【圖文】：

2、PCR特異性試驗(yàn)結(jié)果:本試驗(yàn)選用的引物僅擴(kuò)增細(xì)菌DNA，與HBV-DNA和人基因組DNA無(wú)交叉反應(yīng)，說(shuō)明該引物擴(kuò)增的產(chǎn)物僅針對(duì)細(xì)菌有陽(yáng)性結(jié)果，具有高度特異性。見(jiàn)圖2。圖2:PCR特異性試驗(yàn)· DNAMarker(1OO0bP);2、5空白對(duì)照;3、人基因組DNA;4、病毒DNA;、大腸埃希菌。3、PCR靈敏性試驗(yàn)結(jié)果:取大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)株檢測(cè)PCR擴(kuò)增下限為 1OCFU/ml。見(jiàn)圖3。

臨床樣本PCR反應(yīng)陽(yáng)性:30份
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R576

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2679115