【摘要】：目的1.通過高脂飲食(HFD)和蛋氨酸-膽堿缺乏飲食(MCD)建立非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠模型,通過 16s rRNA基因測序檢測兩種NASH模型小鼠腸粘膜菌群的改變。2.檢測評估兩種模型小鼠腸粘膜屏障的損傷并分析與腸粘膜菌群紊亂之間的相關性。方法1.構建小鼠NASH模型:分別通過HFD和MCD建立小鼠NASH模型。處死小鼠后留取相應標本。2.應用蘇木精-伊紅(Hematoxylinand eosin,HE)染色和油紅(Oil red)O染色觀察肝組織病理學的改變。3.檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、二胺氧化酶(Diamine oxidase,DAO)、D-乳酸及細菌內(nèi)毒素濃度。4.應用HE染色觀察結腸粘膜病理學改變。應用免疫組織化學染色法(immunohistochemistry,IHC)觀察緊密連接蛋白occludin的表達與分布。5.采用流式細胞術檢測結腸巨噬細胞(macrophage,M(?))及髓源抑制性細胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的數(shù)量變化情況。6.應用16s rRNA基因測序檢測并分析各組小鼠結腸粘膜菌群的變化情況。結果1.成功構建兩種小鼠NASH模型:與ND組相比,HFD組的體重、肝重、肝指數(shù)、ALT及AST均增加(P0.05);同樣,MCD組的ALT及AST也比CON組明顯升高(P0.05)。肝臟HE染色及油紅O染色顯示對照組肝組織著色均勻,肝細胞結構完整,未見脂滴以及炎性細胞浸潤,而HFD組和MCD組的肝臟都出現(xiàn)明顯的肝細胞脂肪變性與炎癥反應。上述結果顯示兩種小鼠NASH模型成功建立。2.NASH小鼠腸粘膜屏障功能損傷:與對照組相比,HFD組和MCD組的結腸組織絨毛排列疏松紊亂,部分絨毛出現(xiàn)萎縮、缺損、斷裂,甚至出現(xiàn)上皮層與固有層分離。模型組occludin蛋白較對照組表達降低,分布異常。進一步流式細胞術檢測結果表明,模型組的腸粘膜中M(?)與MDSCs數(shù)量均較對照組明顯增多(P0.001)。同時,HFD組和MCD組的DAO、D-乳酸及細菌內(nèi)毒素也均較對照組明顯升高(P0.05)。3.腸粘膜菌群紊亂:在菌群門水平,HFD組較ND組變形菌門增多(P=0.08),放線菌門和疣微菌門減少(P0.05)。MCD組較CON組增多的菌群有脫鐵桿菌門(P0.05),減少的菌群有擬桿菌門及疣微菌門(P0.05)。HFD組和MCD組共同減少的菌群是疣微菌門。根據(jù)兩種模型共同增加或減少的菌群,我們發(fā)現(xiàn)Akkermansia菌屬在兩種模型中都是明顯減少的(P0.05),該菌屬于疣微菌門。4.腸粘膜屏障指標與Akkermansia菌屬豐度相關性分析:HFD組的DAO(r=-0.879,P0.05)、D-乳酸(r=-0.898,P0.05)及細菌內(nèi)毒素(r=-0.936,P0.05)分別與Akkermansia豐度呈負相關。同樣的,MCD組的DAO(r=-0.957,P0.05)、D-乳酸(r=-0.891,P0.05)及細菌內(nèi)毒素(r=-0.880,P0.05)也分別與Akkermansia的豐度呈現(xiàn)負相關。結論1.兩種模型均可見到機械屏障受損,腸粘膜損傷,腸絨毛變短、稀疏,緊密連接蛋白occludin表達下降,通透性增加,內(nèi)毒素移位,腸粘膜免疫屏障功能被激活,出現(xiàn)M(?)和MDSCs數(shù)量增多。腸粘膜屏障損傷可能是NASH發(fā)生發(fā)展的重要原因。2.兩種模型都出現(xiàn)腸粘膜菌群失調(diào),Akkermansia豐度在兩種模型中都是減少的,另外在兩種模型中Akkermansia豐度分別與DAO、D-乳酸及細菌內(nèi)毒素呈負相關,說明該菌的減少可能會加重腸粘膜屏障的損傷。
【圖文】：

體重增長平緩。ＨＦＤ組小鼠體重增長更快，８周后毛發(fā)變得紊亂無光澤，逡逑精神變差，活動量減少。１２周后處死時的體重（３４．６邋土邋０．７）較ＮＤ組（３１．１６邋±邋０．８５）逡逑明顯增加（Ｐ＜０．０１，圖１Ｂ）。ＭＣＤ組小鼠的體重在２周內(nèi)快速下降，２周后局逡逑部出現(xiàn)毛發(fā)脫落，易怒，喜爭斗。３０天后處死時的體重（１５．２９±邋０．３６）較ＣＯＮ逡逑組（２５．６１±０．８９）明顯減少（ＰＣ０．００１，圖邋ＩＤ）。逡逑Ａ邋ｎｏ邐Ｂ邋４0－｜邐＇逡逑４０＾邋X4＊邋ＨＦ０邐—｜—逡逑蕓邋３５＿邐ｆ邐丨逡逑２0ｆ－ｉ邋－ｒ邋ｒ－ｉ邋？邋ｉ邋ｉ邋？邋ｉ邋？邋ｉ邋）邐９ＨＢ逡逑０１２３４５６７８９邋１０ｔ１１２邐＾邐邐＇邐邐邋１邐邐逡逑Ｗｏ？ｋｓ邋ａｆｔｅｒ邋ＨＦＤ邐令邐々逡逑Ｃ邐Ｄ逡逑？ＣＯＮ邐■￣￣—￣￣．逡逑＋邋ＭＣＤ邐丁逡逑ｉ：ｎ＿逡逑０邐３邐？邐？邋ｔ２邋ｔｓ邐１｜邋２１邋２４邋２；邋Ｍ邐＾邐Ｏ逡逑Ｄａｙｓ邋ＭＣＤ邐ｃＰ逡逑圖１各組小鼠體重的變化（＊＊Ｐ＜0．0ｌ，邋＊＊＊Ｐ＜0．00ｌ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｃｈａｎｇｅｓ邋ｉｎ邋ｂｏｄｙ邋ｗｅｉｇｈｔ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ邋（＊＊Ｐ＜０．０１？邋＊＊＊Ｐ＜邋０．００１）逡逑２小鼠的肝臟形態(tài)、肝重、肝指數(shù)比較逡逑ＮＤ組和ＣＯＮ組的肝臟顏色紅潤，形態(tài)飽滿，邊緣銳利。ＨＦＤ組小鼠肝臟逡逑腫大，顏色變黃，表面可見結節(jié)。ＭＣＤ組小鼠肝臟萎縮，顏色變黃，表面出現(xiàn)逡逑大量結節(jié)。（圖２Ａ－Ｂ）逡逑ＮＤ組和ＨＦＤ組的肝重分別是１．４５±０．０６和丨．８７±０．１０

逡逑加，差異有統(tǒng)計學意義（ｐ＜０．０１，圖２Ｃ），，ＨＦＤ組的肝指數(shù)（５．３９±０．２２）也較逡逑ＮＤ邋組（４．６５±０．０９）明顯升高（Ｐ＜０．０１，圖邋２Ｅ）。ＭＣＤ邋組的肝重（０．７６±０．０３）逡逑較（：０＞１組的肝重（１．６２土０．０５）明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（？＜０．００１，圖２０），逡逑同時ＭＣＤ組的肝指數(shù)（４．９４±０．１３）也較ＣＯＮ組（６．３７±０．２１）明顯下降（ＰＣ０．００１，逡逑圖邋２Ｆ）。逡逑＾邋ＷＷ邋＾邋蠢秦？邋＿逡逑？．彟ｉ＇：邋％、二．邋ＭＣＤ逡逑ｒｔ邋＂Ｔ邋—逡逑了…＂…ＩＨ邋＊＊，．邋Ｍ逡逑＜邋’邐．一邋‘：：、久．：．．．通磁么l拀逡逑ＣＤ＊＊＊逡逑２邋ＣＨ｜邐ｉ邐，逡逑§２．５－，邐＊＊邋？邐ｊｉ－邋ｐｎ逡逑ｆ邋ｉ；ｓ邋ｌ—１邋ｍ邋ｉ－邋＿逡逑１４邋■邐＿逡逑Ｅ邐Ｆ逡逑＊！邋…逡逑ｉｒｋ逡逑Ｓ５邋６１邐１邐ｏ６＂邐＇逡逑ｉ－ｎ邋■邐＿逡逑」Ｏ＇＊４－１邋￣ｉ—￣３ｌ邋１邋■邋｜邋Ｕ｜Ｕ逡逑圖２各組小鼠肝臟形態(tài)、肝重及肝指數(shù)的變化情況（＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２邋Ｃｈａｎｇｅｓ邋ｉｎ邋ｌｉｖｅｒ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R575

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李漢華;韓盛璽;陳友琴;;潰瘍性結腸炎患者腸粘膜基質(zhì)金屬蛋白酶和細胞因子的表達及意義[J];西部醫(yī)學;2008年05期

2 徐支農(nóng);套入式胰腸粘膜、粘膜吻合在胰十二指腸切除術中的應用[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2004年09期

3 楊希山;周殿元;馮福才;吳國渡;楊利生;潘德壽;萬田謨;沈俊卿;;國人回腸粘膜的組織學研究[J];解剖學雜志;1987年01期

4 楊希山;潘德壽;周殿元;萬田謨;;國人遠段回腸粘膜的掃描電鏡觀察[J];解剖學報;1988年03期

5 李光容;光鏡和電鏡下腸癌與血吸蟲病腸的改變及其關系的探討[J];華西醫(yī)科大學學報;1989年03期

6 陳炳卿,管原直毅,管原千枝子;鎘對大鼠腸粘膜中三價運鐵蛋白形成的影響(第一部分)[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;1989年03期

7 陳村龍;潘令嘉;周殿元;;難辨梭菌在地鼠腸粘膜中粘附定植的研究[J];中國微生態(tài)學雜志;1989年02期

8 李斌;李建華;胡惠英;;烏司他丁對腹部創(chuàng)傷患者圍術期腸粘膜屏障功能的影響[J];四川醫(yī)學;2010年02期

9 王紅祿,李非,孫家邦;重癥急性胰腺炎腸粘膜屏障功能的損害及預防[J];中國現(xiàn)代普通外科進展;2004年06期

10 錢鋒,余佩武,李前偉;生長激素對腸粘膜屏障保護作用的臨床研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;2002年07期

相關會議論文 前10條

1 楊桂芳;;腸粘膜活檢及臨床意義[A];湖北省抗癌協(xié)會腫瘤病理專業(yè)委員會學術年會資料（2011）[C];2011年

2 陳德昌;景炳文;楊興易;張翔宇;;大黃對腸粘膜屏障保護作用的機理探討[A];中華醫(yī)學會急診醫(yī)學學會第六次全國急診醫(yī)學學術會議論文匯編[C];1996年

3 李一瑩;王明民;;健脾護腸清毒湯灌腸改善肝硬化患者腸粘膜屏障功能的研究[A];全國第6屆中西醫(yī)結合傳染病學術會議論文匯編[C];2015年

4 黃國棟;余淑嬌;陳文華;黃敏;趙俊;黃媛華;黃強;;維持腸粘膜屏障平衡的抗?jié)冃越Y腸炎及其復發(fā)的中藥提取物的研究進展[A];中醫(yī)肛腸理論與實踐——中華中醫(yī)藥學會肛腸分會成立三十周年紀念大會暨二零一零年中醫(yī)肛腸學術交流大會論文匯編[C];2010年

5 李寧;黎介壽;李幼生;朱維銘;任建安;汪志明;王新波;;特定營養(yǎng)物質(zhì)對腸粘膜屏障作用的研究[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

6 郭力;劉承榮;劉正玉;熊愛兵;鄭福榮;丁爾英;謝興乾;廖顏;;中藥對燙傷大鼠腸粘膜屏障保護作用的實驗研究[A];中華醫(yī)學會第五次全國燒傷外科學術會議論文匯編[C];1997年

7 陳德昌;景炳文;;大劑量維生素C對腸粘膜屏障保護作用的實驗研究[A];中華醫(yī)學會全國第五次急診醫(yī)學學術會議論文集[C];1994年

8 劉遠梅;胡月光;孫有成;;黃芪對幼兔腸缺血-再灌注腸粘膜屏障的保護作用[A];貴州省醫(yī)學會小兒外科分會第四屆第二次學術會議論文匯編[C];2006年

9 金錦蓮;吳發(fā)明;肖朝朝;劉朝奇;謝曉晶;周海燕;;雷貝拉唑保護NSAIDs腸粘膜損傷作用的實驗研究[A];全國高血壓防治知識推廣培訓班暨健康血壓中國行福建漳州會論文綜合刊[C];2014年

10 白曉東;粟永萍;;燒傷后局部腸粘膜免疫屏障變化的實驗研究[A];中華醫(yī)學會第五次全國燒傷外科學術會議論文匯編[C];1997年

相關重要報紙文章 前8條

1 麥迪信;COX-2有助于維持腸粘膜完整性[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

2 本報記者 王璐 通訊員 李奇 姚家琦;長期腹瀉：腸粘膜屏障缺陷[N];大眾衛(wèi)生報;2013年

3 華南農(nóng)業(yè)大學 許家強 廣州牧馬人動物保健有限公司 劉旭光;豬病的診斷與對癥下藥[N];廣東科技報;2001年

4 太陽風;你的顧客在以下人群之內(nèi)嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

5 張中橋;AP致腸屏障損害研究有成果[N];中國醫(yī)藥報;2002年

6 谷峰;癌癥病人為何易腹瀉？[N];大眾衛(wèi)生報;2002年

7 曉衛(wèi);清晨補水不可喝鹽開水[N];國際商報;2003年

8 胡季華;專家提醒“現(xiàn)炒茶”應慎喝[N];中國食品質(zhì)量報;2004年

相關博士學位論文 前10條

1 王愛華;潰瘍性結腸炎與腺瘤病變腸粘膜菌群分析及相關性研究[D];山東大學;2018年

2 陳德昌;大黃對腸源性膿毒癥防治的基礎與臨床研究[D];第二軍醫(yī)大學;2003年

3 趙秋潔;乳汁球微粒表皮生長因子8在潰瘍性結腸炎發(fā)病機制中的研究[D];山東大學;2012年

4 楊永濤;Numb分子在腸粘膜屏障形成中的作用及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2012年

5 王中秋;腸上皮細胞Syndecan-1在維持腸粘膜屏障中的作用及機制[D];南方醫(yī)科大學;2015年

6 王啟萌;AhR活化對結腸炎性損害的緩解作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2017年

7 王尊松;尿毒癥患者腸粘膜屏障功能的研究[D];山東大學;2011年

8 蔡瑜嬌;KGF對腸上皮源IL-7調(diào)控及對I/R腸粘膜損害保護作用及其機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2012年

9 陳吉;腸易激綜合征患者腸粘膜腦腸肽與肥大細胞變化及其Th1/Th2漂移的研究[D];中南大學;2012年

10 程愛斌;卡巴膽堿對胃腸功能障礙的保護作用[D];天津醫(yī)科大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 黃澤鑫;NASH小鼠腸粘膜屏障損傷與腸粘膜菌群失調(diào)的相關性研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

2 劉輝;CUGBP1/Claudin-1在IBD腸粘膜功能障礙中的作用和機制[D];廣州醫(yī)科大學;2018年

3 蔡燕;NLRP3炎癥小體在重癥急性胰腺炎小鼠腸粘膜屏障功能障礙中的作用[D];南昌大學;2018年

4 曠曉晴;卵巢過度刺激綜合征相關性腸粘膜損傷的機制研究[D];南華大學;2017年

5 郭飛;比較無水酒精和硝酸銀在處理兔腸粘膜效果的實驗研究[D];華中科技大學;2008年

6 劉勇;腸缺血再灌注條件下腎上腺髓質(zhì)素對腸粘膜屏障功能的作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2014年

7 鄭善軍;谷氨酰胺對放射動物腸粘膜屏障保護作用的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2002年

8 盧艷;兔重癥急性胰腺炎腸粘膜屏障的損傷與保護機制研究[D];山東大學;2012年

9 丁博文;大黃素對腸粘膜屏障缺氧/復氧損傷的保護作用及機理研究[D];南京大學;2012年

10 馮浩;亞低溫對腸粘膜屏障功能的影響[D];天津醫(yī)科大學;2013年

本文編號：2679042