本文關(guān)鍵詞：microRNA-146a通過Smad4調(diào)節(jié)TGF-β1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞增殖，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是多種慢性致病因素作用于肝臟引起細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）過量沉積的創(chuàng)傷愈合過程。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellates cell，HSC）的活化在肝纖維化發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用，激活的HSC是產(chǎn)生ECM的主要來源細(xì)胞。TGF-β1被認(rèn)為是主要的致HSC活化的細(xì)胞因子。近年來研究顯示microRNA (miRNA)廣泛參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡等一系列重要生物學(xué)進(jìn)程。miR-146a是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)與免疫功能相關(guān)的miRNA，miR-146a是否參與調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的HSC的活化目前還未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究觀察miR-146a在HSC活化過程中和肝纖維化形成過程中的表達(dá)變化，并深入探討其對(duì)HSC活化增殖的影響及其作用的分子機(jī)制，以揭示干預(yù)HSC活化的新的作用靶點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)采用CCl4皮下注射建立大鼠肝纖維化模型，正常組10只、CCl4處理組15只。自處理之日開始，除正常組，其他各組雄性大鼠皮下注射50%CCl4植物油溶液(1ml/kg)每周2次，，共12周；正常組給予同樣劑量花生油皮下注射。12周末，取肝組織進(jìn)行病理組織學(xué)和Masson膠原染色檢測，并檢測α-SMA在大鼠肝組織中的表達(dá)變化。通過一步法實(shí)時(shí)定量PCR檢測不同濃度TGF-β1刺激的HSC和CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化組織中miR-146a的表達(dá)。通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染miR-146a mimics（模擬物）到大鼠肝星狀細(xì)胞株HSC-T6內(nèi)以觀察對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HSC-T6增殖的影響，熒光倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。體外培養(yǎng)的HSC，轉(zhuǎn)染60nM miR-146a mimics進(jìn)入細(xì)胞，6h后用TGF-β110ng/ml刺激細(xì)胞24h或48h后，利用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法，細(xì)胞周期分析方法以及流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)觀察miR-146a對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HSC的增殖的影響。應(yīng)用生物信息方法發(fā)現(xiàn)Smad4是miR-146a的潛在靶點(diǎn)。利用RT-PCR，real-time qPCR和western blots，分別檢測TGF-β1誘導(dǎo)的HSC中活化的標(biāo)志物α-SMA和Smad4mRNA及蛋白水平的表達(dá)。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)用不同濃度(0,5,10,15ng/ml) TGF-β1刺激HSC，miR-146a的表達(dá)呈劑量依賴性的下調(diào)。miR-146a在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化組織中表達(dá)也是下調(diào)的。與陰性對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染60nM的miR-146a模擬物進(jìn)入HSC可以明顯減少TGF-β1誘導(dǎo)的α-SMA的表達(dá)。過表達(dá)miR-146a可以顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HSC的增殖，增加細(xì)胞凋亡。生物信息技術(shù)顯示Smad4是miR-146a的潛在靶點(diǎn)。在TGF-β1刺激的HSC中，miR-146a可以顯著降低Smad4蛋白水平的表達(dá)，而不能降低其mRNA水平的表達(dá)，提示miR-146a是在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)Smad4的表達(dá)。以上研究表明，miR-146a通過轉(zhuǎn)錄后抑制Smad4的表達(dá)參與調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的HSC的增殖，這可能成為肝纖維化防治的潛在作用靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 miR-146a TGF-β1 α-SMA Smad4
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 中英文縮寫詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 實(shí)動(dòng)動(dòng)物12
• 藥品與試劑12-14
• 儀器與設(shè)備14-15
• 圖像分析軟件15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-31
• 動(dòng)物的處理與模型的建立15
• 大鼠肝星狀細(xì)胞的培養(yǎng)15-16
• 檢測內(nèi)容與方法16-30
• 數(shù)據(jù)處理30-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-57
• 討論57-61
• 結(jié)論61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 個(gè)人簡歷66
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文：66-68
• 在校期間所獲獎(jiǎng)勵(lì)68
• 攻讀碩士學(xué)位期間參加的會(huì)議68
• 碩士期間參與主要課題研究68-69
• 致謝69-70
• 綜述70-84
• 參考文獻(xiàn)79-84

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：microRNA-146a通過Smad4調(diào)節(jié)TGF-β1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞增殖，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：267289