【摘要】： 【背景及目的】 急性肝衰竭死亡率高，治愈率低。其主要病理變化是肝細胞的大量死亡，從而導致肝功能嚴重受損。其臨床特點是肝功能迅速惡化，可引起肝性腦病及凝血功能障礙。急性肝衰竭病因復雜，在我國由于病毒性肝炎感染率高，是引起肝衰竭的主要病因，其次可由藥物、植物或化學品中毒等引起。研究顯示，細胞凋亡在急性肝衰竭的發(fā)病過程中起著非常重要的作用。然而，迄今對于急性肝衰竭肝細胞發(fā)生大量凋亡的機理尚缺乏足夠認識。一般而言細胞凋亡的發(fā)生存在二種機制：由攜帶凋亡信號的配體與細胞膜上的相應受體結(jié)合，將凋亡信號傳導入細胞內(nèi)，從而啟動一系列的生化反應，最終導致細胞凋亡，該途徑即死亡受體途徑；或由細胞核內(nèi)DNA的損傷誘發(fā)細胞凋亡的發(fā)生。在急性肝衰竭早期是否存在DNA損傷及DNA損傷與肝細胞凋亡的關(guān)系研究尚未見相關(guān)文獻報道。為了探討其發(fā)病機理，，本研究利用D-氨基半乳糖加脂多糖建立的小鼠動物模型，以彗星實驗、ELLISA、TUNEL等方法探討肝細胞凋亡的發(fā)生機制，包括： 1、研究急性肝衰竭模型小鼠肝細胞核DNA損傷的發(fā)生及演變。 2、研究急性肝衰竭模型小鼠血清TNF-α濃度的變化及與肝細胞凋亡的關(guān)系。 3、研究急性肝衰竭模型小鼠肝細胞損傷的演變過程。 4、研究天晴甘平干預對急性肝衰竭模型小鼠肝細胞損傷的影響及機制。 5、研究阿拓莫蘭干預對急性肝衰竭模型小鼠肝細胞損傷及凋亡的影響及其機制。 【方法】 1、腹腔注射D-氨基半乳糖(D—galn)和脂多糖(LPS)，制作急性肝衰竭小鼠模型。 2、、采用彗星實驗從早期開始檢測急性肝衰竭模型小鼠肝細胞核DNA的損傷，用Olive尾矩值表示DNA的損傷程度。 3、采用ELISA法檢測急性肝衰竭模型小鼠血清TNF-α的濃度。 4、采用HE染色的方法檢測急性肝衰竭模型小鼠肝組織的細胞形態(tài)學改變。 5、采用TUNEL法檢測急性肝衰竭模型小鼠肝細胞的凋亡，并計算凋亡指數(shù)。 6、腹腔注射D-氨基半乳糖(D—galn)和脂多糖(LPS)前3h，實驗組給予天晴甘平灌胃，分別于注射后不同時間點用彗星實驗檢測肝細胞核DNA的損傷。 7、腹腔注射D-氨基半乳糖(D—galn)和脂多糖(LPS)前2h，實驗組給予肌肉注射阿拓模蘭，分別于注射D—galn和LPS后不同時間點用彗星實驗檢測肝細胞核DNA的損傷，用ELISA法檢測血清TNF-α濃度，用TUNEL檢測肝細胞凋亡。 【結(jié)果】 1、腹腔注射D-Galn和LPS后0.5h，模型組小鼠肝細胞核DNA的Olive尾矩值即明顯增大，至1 h，出現(xiàn)細胞核DNA損傷的肝細胞達100％，且隨時間延伸，肝細胞核DNA的Olive尾矩值逐漸增加。各組兩兩之間比較，差異均具統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 2、腹腔注射D-Galn和LPS后0.5 h，模型組小鼠血清TNF-α濃度無升高；1h略有升高，但與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義；2h以后，升高趨勢明顯，各組與正常對照組比較，差異均具統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 3、腹腔注射D-Galn和LPS 2h，模型組小鼠HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝細胞始出現(xiàn)嗜酸性染色增強，至8h肝細胞出現(xiàn)大片壞死，肝竇明顯擴張充血并出血。 4、腹腔注射D-Galn和LPS后6 h，模型組小鼠TUNEL檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝組織始有凋亡細胞出現(xiàn)，至8 h出現(xiàn)大量凋亡細胞。 5、腹腔注射D-Galn和LPS后，天晴甘平治療組與對照組比較Olive尾矩值明顯變小，差異具顯著意義(P＜0.05)。 6、腹腔注射D-Galn和LPS后，阿拓模蘭治療組與對照組比較Olive尾矩值明顯變小，差異具統(tǒng)計學意義(P＜0．05)；但血清TNF-α濃度無明顯改變；在腹腔注射D-Galn和LPS后的6h時間點，阿拓模蘭治療組的凋亡指數(shù)較對照組減少，差異具統(tǒng)計學意義，但在8h時間點，差異無統(tǒng)計學意義。 【結(jié)論】 1、急性肝衰竭模型小鼠肝細胞核DNA較早出現(xiàn)損傷，并隨時間延伸逐漸加重，最終可能誘發(fā)了肝細胞凋亡。導致急性肝衰竭模型小鼠肝細胞核DNA損傷的原因可能是D-氨基半乳糖和脂多糖的毒性作用。同時，本研究HE染色的結(jié)果也提示，急性肝衰竭肝細胞壞死的機理部分也可能與肝細胞核DNA的損傷有關(guān)。 2、血清TNF-α濃度的升高與肝細胞核DNA損傷的發(fā)生及演變不完全同步，但可能具有進一步促進肝細胞核DNA損傷的作用。 3、天晴甘平具有減輕急性肝衰竭小鼠肝細胞核DNA的損傷的作用。 4、阿拓模蘭具有減輕急性肝衰竭小鼠肝細胞核DNA的損傷及細胞凋亡的作用，但這種作用與血清TNF-α濃度的改變無關(guān)。
【圖文】：

2、肝細胞核DNA損傷檢測結(jié)果:未受損的細胞核表現(xiàn)為一圓形熒光核心，即彗星頭部，沒有拖尾;而受損的細胞核則有彗尾從核中伸向陽極，形成一個亮的熒光頭部和尾部，見圖1一7。Olive尾矩值檢測結(jié)果見表1。由表1可見，腹腔注射D一Galn和 LPS0.5h肝細l7

注藥lh組，慧星實驗檢測結(jié)果，x40o
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R575.3

【參考文獻】

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本文編號：2672490