發(fā)布時間：2020-05-20 01:58

【摘要】：目的1、證實在NASH患者肝臟Kupffer細胞（KCs）中NLRP3炎癥小體的表達。2、初步探討NLRP3炎癥小體在游離脂肪酸（FFA）激活離體KCs所致炎癥反應中可能發(fā)揮的作用。 方法1、收集疑似非酒精性脂肪性肝炎患者肝臟標本，進行HE、MASSON染色，根據(jù)NAS積分分組：NAS積分4分為NASH組（5例），NAS積分3分為對照組（4例），同時進行免疫組化檢測KCs、NLRP3、caspase-1等表達。2、通過膠原酶原位灌注+Percoll細胞分離液密度梯度離心方法分離小鼠KCs，鑒定后給予FFA刺激，觀察其形態(tài)變化，Western blot檢測刺激前后NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白的表達水平明，ELISA進一步檢測KCs分泌的IL-1、IL-18的變化。 結果1、NASH患者肝臟不僅有肝細胞廣泛的脂肪變、炎癥細胞浸潤、膠原纖維增生，還有KCs大量的聚集與激活，同時KCs中NALP3炎癥小體及caspase-1表達也明顯增加。2、離體培養(yǎng)的KCs被FFA刺激后， NLRP3（WB：0.565±0.027）、Caspase-1（WB：0.541±0.031）、ASC（WB：0.594±0.038）蛋白的表達水平較對照組NLRP3（WB：0.148±0.018）、Caspase-1（WB：0.122±0.007）、ASC（WB：0.128±0.015）明顯增加（p＜0.001）；IL-1（578±36.21pg/ml）、IL-18（197±27.16pg/ml）表達水平與對照組IL-1（26.34±7.36pg/ml）、IL-18（22.17±6.28pg/ml）也隨之增加（p＜0.05）。 結論1.NASH患者肝臟KCs中存在NLRP3炎癥小體的表達與激活，KCs中NALP3炎癥小體的激活可能導致炎癥因子的釋放和肝細胞損傷，在NASH的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。2. FFA對KCs存在明顯脂毒性，F(xiàn)AA誘導KCs炎癥反應可能為NLRP3介導，繼而使NLRP3、ACS、Caspase-1蛋白表達以及IL-1、IL-18的分泌增加；干擾NLRP3可能會是治療FAA致肝臟炎性損傷的新方向。
【圖文】：

圖 1 ：NASH 患者肝臟標本的 HE 染色（左）及 Masson 染色（右）（光鏡,×400）。Fig.1 HE(left) and Masson(right) staining for the liver specimens（×400）.3.2 免疫組化結果免疫組織化學染色檢測 NALP3 蛋白的表達，棕色顆粒狀物質(zhì)為陽性結果常肝臟組織中棕色顆粒物質(zhì)極少，且均勻分散在肝組織內(nèi)，而 NASH 患者肝織中 NALP3 的表達明顯上調(diào)，且集中于匯管區(qū)（圖 2）。

圖 1 ：NASH 患者肝臟標本的 HE 染色（左）及 Masson 染色（右）Fig.1 HE(left) and Masson(right) staining for the liver specim3.2 免疫組化結果免疫組織化學染色檢測 NALP3 蛋白的表達，棕色顆粒常肝臟組織中棕色顆粒物質(zhì)極少，且均勻分散在肝組織內(nèi)，織中 NALP3 的表達明顯上調(diào)，且集中于匯管區(qū)（圖 2）。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R575.5

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