【摘要】： 目的: 1、構(gòu)建穩(wěn)定、可靠、符合血吸蟲感染自然演變過程的血吸蟲病門脈高壓小鼠動(dòng)物模型,研究該模型肝臟病變和門靜脈高壓的進(jìn)展情況。 2、研究血吸蟲病門脈高壓小鼠腸黏膜屏障功能的改變和內(nèi)毒素血癥的關(guān)系,探討內(nèi)毒素通過腸黏膜屏障的機(jī)制。 3、研究LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的跨膜受體TLR-4/MD-2在血吸蟲病門脈高壓小鼠腸系膜靜脈中的表達(dá),以探討腸源性內(nèi)毒素血癥在門脈高壓性腸系膜靜脈血管病變中的作用。 4、研究IRAK-4在血吸蟲病門脈高壓小鼠腸系膜靜脈中的表達(dá)情況,探討LPS導(dǎo)致門脈高壓性腸系膜靜脈血管病變的機(jī)制。 方法: 1、用腹部敷貼法制作血吸蟲病小鼠模型,分別在感染尾蚴后6周、12周、20周,以HE染色、Masson三色染色、透射電鏡觀察小鼠肝臟及結(jié)腸組織病變情況,測(cè)量門靜脈直徑和門靜脈壓力以了解該模型血液動(dòng)力學(xué)變化情況。 2、用FITC-D法檢測(cè)血吸蟲病門脈高壓小鼠腸黏膜通透性的改變,MT-1鱟試劑基質(zhì)顯色法測(cè)定門靜脈血內(nèi)毒素含量,取肝臟組織細(xì)菌培養(yǎng)以了解細(xì)菌移位情況;免疫組織化學(xué)和Western blot法檢測(cè)結(jié)腸組織occludin蛋白表達(dá),TUNEL法檢測(cè)結(jié)腸黏膜細(xì)胞原位凋亡。 3、RT-PCR方法檢測(cè)血吸蟲病門脈高壓小鼠腸系膜靜脈中TLR-4/MD-2及TNF-α的表達(dá),將門靜脈血內(nèi)毒素含量與TLR-4/MD-2表達(dá)量行相關(guān)性分析。 4、Western blot和RT-PCR檢測(cè)IRAK-4在血吸蟲病門脈高壓小鼠腸系膜靜脈中的表達(dá),行IRAK-4和TNF-α表達(dá)的相關(guān)性分析。 結(jié)果: 1、腹部敷貼法制作血吸蟲病小鼠模型,感染成功率100%,死亡率36%;動(dòng)物感染后12周出現(xiàn)肝纖維化,20周出現(xiàn)肝硬化表現(xiàn);門靜脈壓力在感染后12周就明顯升高,并持續(xù)保持較高水平。 2、與正常組對(duì)比,隨著病程的進(jìn)展,各時(shí)間組小鼠門靜脈血FITC-D含量顯著升高(p0.01),門靜脈血中內(nèi)毒素含量及肝組織細(xì)菌培養(yǎng)均同步上升,門靜脈血中內(nèi)毒素含量與FITC-D含量呈顯著正相關(guān)(r=0.543,p0.01);緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)顯著減少;腸黏膜細(xì)胞原位凋亡明顯增多。(p值均0.01) 3、血吸蟲病小鼠腸系膜靜脈中TLR-4/MD-2及TNF-α的mRNA表達(dá)均較正常組顯著升高(p0.01);20周組TLR-4/MD-2表達(dá)與12組比較顯著升高(p0.01),TLR-4/MD-2表達(dá)量與門靜脈血內(nèi)毒素含量呈正相關(guān)(r1=0.548, p0.01;r2=0.534, p0.01);TNF-α的表達(dá)12周組與20周組無(wú)顯著性差異(p0.05)。 4、各時(shí)間組血吸蟲病小鼠腸系膜靜脈IRAK-4 mRNA和蛋白的表達(dá)較正常組顯著升高(p0.01),12周組與20周組間比較無(wú)顯著性差異(p0.05),IRAK-4表達(dá)量與TNF-α呈正相關(guān)(r=5.56, p0.01)。 結(jié)論: 我們所構(gòu)建的血吸蟲病小鼠模型符合人體血吸蟲病的發(fā)病規(guī)律、門靜脈系統(tǒng)血流動(dòng)力學(xué)改變明顯,是研究血吸蟲病及門脈高壓癥的理想模型;血吸蟲病門脈高壓小鼠隨著門脈壓力的增高,存在著明顯的腸黏膜屏障功能障礙和腸源性內(nèi)毒素血癥,腸道通透性升高是腸源性內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生的重要原因之一。細(xì)菌、內(nèi)毒素等大分子物質(zhì)可能通過細(xì)胞旁途徑和跨細(xì)胞途徑進(jìn)入腸道固有層和門靜脈血;入血后的內(nèi)毒素通過其特異性的TLR-4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑啟動(dòng)對(duì)腸系膜靜脈的損害,引起和加重門脈高壓性血管病變;但其下游TNF-α等炎性因子表達(dá)與TLR-4表達(dá)量無(wú)明顯相關(guān),而IRAK-4可能才是內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎性因子表達(dá)的關(guān)鍵性調(diào)控因子,其在內(nèi)毒素導(dǎo)致的門脈高壓腸系膜血管病變中起著重要作用,是治療門脈高壓性血管病變的一個(gè)有效靶點(diǎn)。
【圖文】：

示小鼠腹部拔毛，造成微創(chuàng)面創(chuàng)面敷貼含尾蚴液的蓋玻片

ｗ組兔肝臟組織，體積無(wú)明顯變化，肝臟表面光滑，，可見散在分布白色小點(diǎn)
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R532.21;R575.2

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本文編號(hào)：2670042