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NF-κB介導(dǎo)CBS表達(dá)上調(diào)參與新生期母愛(ài)剝奪導(dǎo)致的成年大鼠內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏

發(fā)布時(shí)間:2020-05-14 18:20
【摘要】:目的:腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrom IBS)是以慢性內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏為特征,表現(xiàn)為持續(xù)性或是反復(fù)發(fā)生的腹痛和排便習(xí)慣的改變的一類綜合征。本實(shí)驗(yàn)旨在研究?jī)?nèi)源性H2S的合酶(Cystathionine-β-synthase CBS)和核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(Nuclearfactor kappa B)在新生期母愛(ài)剝奪(Neonatal Maternal Deprivation NMD)導(dǎo)致的慢性內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏(Chronic Visceral Hyperalgesia CVH)中的作用及其機(jī)制。 方法:1. CVH模型的建立:實(shí)驗(yàn)選取新生的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,在大鼠出生后第2~15天進(jìn)行母愛(ài)剝奪實(shí)驗(yàn),視為實(shí)驗(yàn)組(NMD),同期未進(jìn)行隔離的大鼠作為對(duì)照組(CON)。 2.結(jié)直腸擴(kuò)張?jiān)囼?yàn)(Colorectal Distention CRD):在大鼠7~15周齡進(jìn)行,用來(lái)測(cè)定NMD及CON組大鼠結(jié)直腸的痛閾以及注射藥物后大鼠的痛行為。 3.蛋白質(zhì)免疫印跡:提取大鼠的胸腰椎段(T13-L2)腸特異性脊髓背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal Root Ganglion DRG)進(jìn)行蛋白的定量分析,分別觀察CBS、NF-κB(胞漿內(nèi)、核內(nèi))在CON和NMD組的表達(dá),,及NMD組大鼠在抑制NF-κB活化后CBS的表達(dá)。 4.全細(xì)胞膜片鉗技術(shù):用來(lái)記錄對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組及藥物處理后的大鼠腸特異性DRG(T13-L2)神經(jīng)元細(xì)胞的興奮性。 結(jié)果:1.與CON組相比,NMD可以導(dǎo)致成年大鼠內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏。這種內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏在大鼠7、9、12周出現(xiàn)(P<0.05),15周消失(P>0.05)。與行為學(xué)結(jié)果一致的是我們發(fā)現(xiàn)CBS在NMD組的表達(dá),與同齡CON組相比,同樣在7、9、12周升高(P<0.05),15周沒(méi)有差異(P>0.05)。 2.給NMD組大鼠注射CBS的拮抗劑AOAA(10、20mg/kg)與注射同容積的NS組相比,AOAA能抑制NMD誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏(P<0.05),并表現(xiàn)出劑量及時(shí)間依賴性。而腹腔注射最優(yōu)劑量的AOAA(10mg/kg)對(duì)CON組大鼠痛閾無(wú)顯著影響(P>0.05)。予NMD大鼠連續(xù)腹腔注射7天的AOAA(10mg/kg),能顯著地降低NMD組大鼠腸特異性神經(jīng)元的興奮性(P<0.05),NMD組大鼠連續(xù)注射7天同容積的NS作為對(duì)照組。 3.予體外分離的正常大鼠腸特異性DRG神經(jīng)元灌注H2S的供體NaHS(250μM)可以顯著提高其興奮性(P<0.05)。在體內(nèi),鞘內(nèi)注射NaHS(0.1nM、1nM)可以顯著降低正常大鼠的痛閾(P<0.05),且表現(xiàn)出時(shí)間及劑量依賴性。 4.與對(duì)照組相比,NMD組大鼠NF-κB在胞漿內(nèi)的表達(dá)明顯減少(P<0.05),同時(shí)我們檢測(cè)到在核內(nèi),NF-κB在NMD組的表達(dá)明顯升高(P<0.05)。連續(xù)腹腔注射7天的NF-κB拮抗劑PDTC后導(dǎo)致CBS表達(dá)明顯下降(P<0.05),而鞘內(nèi)注射PDTC(1μg、10μg)可以提高NMD大鼠的痛閾(P<0.05)。 結(jié)論:在NMD中,CBS通過(guò)自身的高表達(dá)導(dǎo)致大鼠腸特異性DRG神經(jīng)元興奮性的提高而參與內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏的形成,而CBS的表達(dá)上調(diào)是由NF-κB的活化介導(dǎo)的。
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R57

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