【摘要】：肝臟是酒精代謝的主要器官,大量飲酒會(huì)造成嚴(yán)重的肝臟損傷,發(fā)展為酒精性脂肪肝(AFL)。目前AFL在西方國家是肝臟相關(guān)疾病發(fā)病率和死亡率的主要病因。在我國,隨著人民生活水平的不斷提高,嗜酒者逐漸增多,AFL發(fā)病率也迅速上升。�；撬峋哂袕V泛的生物學(xué)作用,能夠維持血液、免疫、生殖系統(tǒng)、視覺、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的正常結(jié)構(gòu)和功能。同時(shí)肝臟也是�；撬岷铣傻闹饕课�,對(duì)于肝臟的保護(hù)作用,有研究表明牛磺酸能減輕四氯化碳所致的大鼠肝臟損傷,但�；撬釋�(duì)AFL的作用機(jī)制研究較少。本研究開展�；撬釋�(duì)大鼠AFL預(yù)防和治療作用及其機(jī)理的研究,旨在為有效的預(yù)防AFL的發(fā)生、發(fā)展,并為AFL的治療提供有價(jià)值的理論依據(jù)。試驗(yàn)一通過給雄性Wistar大鼠灌胃白酒和吡唑的混合液,飼喂高脂飼料的方法制備AFL動(dòng)物模型,分別于造模后第8、10、12周隨機(jī)抽取大鼠,采集血液及肝臟,檢測血清轉(zhuǎn)氨酶含量及肝組織病理變化以驗(yàn)證造模效果。結(jié)果表明,造模12周,大鼠血清AST、ALT水平顯著升高,肝組織石蠟切片,H.E染色后,顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重脂肪變性,空泡化病變顯著,肝小葉中央靜脈及門管區(qū)出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤,證明本試驗(yàn)所采取的造模方法,12周可成功復(fù)制大鼠AFL模型。試驗(yàn)二在制備AFL模型的同時(shí)及造模后在大鼠飲水中添加不同濃度�；撬徇M(jìn)行預(yù)防和治療。預(yù)防試驗(yàn)分為:對(duì)照組、模型組、2%和5%�；撬峥瞻讓�(duì)照組、2%和5%�；撬犷A(yù)防組,時(shí)間12周;治療試驗(yàn)分為:正常對(duì)照組、自然恢復(fù)組、2%和5%�；撬嶂委熃M,時(shí)間分為4周和8周。試驗(yàn)結(jié)束后,殺鼠取血及肝臟,檢測大鼠血清中相關(guān)生理生化指標(biāo),并制作大鼠肝臟石蠟切片,H.E染色分析病理變化。結(jié)果表明:模型組大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C、NEFA水平顯著升高,HDL-C水平顯著降低;肝臟NEFA、MDA含量顯著升高,T-AOC、GSH、SOD水平顯著下降;2%、5%�；撬峥瞻捉M與對(duì)照組相比差異不顯著;預(yù)防及治療性添加�；撬崮茱@著降低AFL大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C、NEFA水平,升高HDL-C水平;顯著提高大鼠肝組織中T-AOC、SOD、GSH活性,降低NEFA、MDA含量。治療4周時(shí),與對(duì)照組相比,自然恢復(fù)組各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組差異顯著,�；撬嶂委熃M可有效改善各項(xiàng)生理生化指標(biāo);治療8周時(shí),各組大鼠上述指標(biāo)與對(duì)照組相比差異不明顯,但�；撬嶂委熃M各指標(biāo)均明顯優(yōu)于自然恢復(fù)組。觀察大鼠肝組織病理切片并進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn),�；撬崮茱@著抑制并減輕乙醇造成的肝細(xì)胞脂肪變性、炎癥反應(yīng)程度。試驗(yàn)三在制備AFL模型的同時(shí)及造模后在大鼠飲水中添加不同濃度�；撬徇M(jìn)行預(yù)防和治療,4周試驗(yàn)結(jié)束后殺鼠,提取大鼠肝臟總RNA,半定量RT-PCR法擴(kuò)增脂肪代謝關(guān)鍵酶及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子CPT-1、FAS、ACC、PPARα基因;同時(shí)提取大鼠肝臟總蛋白,Wesrern Blot 法檢測 CPT-1、FAS、ACC、HMG-CoA 還原酶、PPARα、SREBP-1 蛋白表達(dá);探討�；撬釋�(duì)肝臟脂肪代謝的調(diào)控機(jī)理。結(jié)果表明:酒精可引起大鼠肝臟中FAS、ACC基因及蛋白表達(dá)量顯著增多,CPT-1、PPARα基因及蛋白的表達(dá)量顯著減少,HMG-CoA還原酶、SREBP-1蛋白的表達(dá)量顯著增多;�；撬峥瞻捉M與對(duì)照組無顯著差異;預(yù)防及治療性添加�；撬峋茱@著下調(diào)肝臟FAS、ACC基因及蛋白的表達(dá),上調(diào)CPT-1、PPARα基因及蛋白的表達(dá),同時(shí)降低HMG-COA還原酶、SREBP-1蛋白的表達(dá),證明�；撬峥赏ㄟ^調(diào)節(jié)脂肪代謝過程中的關(guān)鍵酶及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的基因及蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)肝臟中脂肪代謝,減少肝臟中脂肪沉積。以上試驗(yàn)結(jié)果說明,�；撬峥娠@著抑制并修復(fù)AFL大鼠的肝細(xì)胞損傷,降低TC、TG、LDL-C含量,增加HDL-C含量,減少肝臟脂肪沉積,其機(jī)理可能是:(1)減輕酒精引起的肝臟脂質(zhì)過氧化損傷,清除氧自由基,保護(hù)細(xì)胞膜免受自由基的攻擊,進(jìn)而保護(hù)肝細(xì)胞;(2)調(diào)控肝臟脂肪代謝相關(guān)酶及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的基因、蛋白表達(dá),調(diào)節(jié)肝臟脂肪代謝,抑制并減輕酒精引起的肝臟脂肪代謝紊亂,減少甘油三酯、脂肪酸、膽固醇合成、促進(jìn)脂肪酸β氧化、促進(jìn)肝臟內(nèi)膽固醇的轉(zhuǎn)化,從而減少肝臟脂肪沉積,起到預(yù)防并治療AFL的作用。
【圖文】：

見雙核；肝細(xì)胞體積較大，呈多面體形，核大而圓，位于細(xì)胞中央；肝細(xì)胞索以中央靜逡逑脈為中心向四周呈放射狀排列，板間為不規(guī)則的肝竇；肝細(xì)胞間連接緊密，無脂肪變性逡逑（附圖１）。模型組大鼠肝小葉界限不清，胞質(zhì)內(nèi)還可見大小不等、數(shù)量不一的脂肪空泡，逡逑脂肪變性面積較正常大鼠差異極顯著（Ｐ＜０．０１）；肝細(xì)胞索排列紊亂；肝竇變窄，肝細(xì)逡逑胞出現(xiàn)散在和片狀氣球樣變，有的可見肝細(xì)胞水腫，點(diǎn)狀壞死，脂肪變性６級(jí)（附圖２）。逡逑脂肪變面積百分率及分級(jí)見表１－３。逡逑表丨－３邋ＡＦＬ大鼠肝臟病理變化逡逑Ｔａｂ．邋１－３邋Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｌｉｖｅｒ邋ｉｎ邋ＡＦＬ邋ｒａｔｓ逡逑脂肪變性分級(jí)邐脂變面積百分率逡逑對(duì)照組邐ｉ邐０．９２邋士邋０．２６ａ逡逑模型組邐６邐２２．０２±２．３３ｂ逡逑注：問列灼標(biāo)含有相同字母者為差異不顯著（Ｐ＞0．0５）

登錄號(hào)：ＮＭ＿０１３１９６．１）進(jìn)行比較，同源率達(dá)到了邋９８％邋（見圖３－６）。逡逑測序序列邐Ｃ邋Ａ邋Ａ｜ＴＧＣ｜ＡＴＣＣＧＴＴＴＴＧＧ｜ＡＧ｜ＡＴＧＣＣＡ邋ＡＧ邋ＡＴＣＴＧ邋ＡＧ邋Ａ邋ＡＡＧＣＡＡ邋ＡＡＣＴＧＡ邋ＡＧＧＣＡＧ邋ＡＡＡ邐６８逡逑ＮＭ＿０１３１９６．邋１邐ＣＡＡｆｒＧｃ｜ＡＴＣＣＧＴＴＴＴＧＧ｜ＡＧ｜ＡＴＧＣＣＡＡＧＡＴＣＴＧＡＧＡＡＡＧＣＡＡＡＡＣＴＧＡＡＧＧＣＡＧＡＡＡ邐９３９逡逑測序序列邐ＴＣＣＴＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＣＧＡＴＣＴＧＡＡＡＧＡＴＴＣＧＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＣＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＣＣＡ邐１２８逡逑ＮＫ０１３１９６．邋１邐ＴＣＣＴＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＣＧＡＴＣＴＧＡＡＡＧＡＴＴＣＧＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＣＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＣＣＡ邐９９９逡逑測序序列邐ＡＧＡＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＴＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＣＣＣＧＧＧＴＣＡ邐１８８逡逑ＮＭ＿０１３１９６．邋１邐ＡＧＡＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＴＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＣＣＣＧＧＧＴＣＡ邐１０５９逡逑測序序列邐ＴＡＣＴＣＧＣＡＧＧＡＡＡＧＡ邋２０３逡逑ＮＭＪＪ１３１９６．邋１邐ＴＡＣＴＣＧＣＡＧＧＡＡＡＧＡ邋１０７４逡逑圖３－６邋ＰＰＡＲａ克隆基因序列的同源性比較逡逑Ｆｉｇ．邋３－６邋Ｈｏｍｏｌｏｇｙ邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＰＰＡＲａ邋ｇｅｎｅ邋ｓｅｑｕｅｎｃｅ逡逑３．２．４邋ＰＣＲ反應(yīng)條件的優(yōu)化逡逑（１）邋ＣＰＴ－邋Ｉ邋ＰＣＲ反應(yīng)條件的優(yōu)化逡逑從圖３－７可以看出
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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6 張媛;于U，

本文編號(hào)：2662790