【摘要】：肝臟是酒精代謝的主要器官,大量飲酒會造成嚴重的肝臟損傷,發(fā)展為酒精性脂肪肝(AFL)。目前AFL在西方國家是肝臟相關疾病發(fā)病率和死亡率的主要病因。在我國,隨著人民生活水平的不斷提高,嗜酒者逐漸增多,AFL發(fā)病率也迅速上升。牛磺酸具有廣泛的生物學作用,能夠維持血液、免疫、生殖系統(tǒng)、視覺、心血管系統(tǒng)、神經系統(tǒng)的正常結構和功能。同時肝臟也是�；撬岷铣傻闹饕课�,對于肝臟的保護作用,有研究表明牛磺酸能減輕四氯化碳所致的大鼠肝臟損傷,但�；撬釋FL的作用機制研究較少。本研究開展牛磺酸對大鼠AFL預防和治療作用及其機理的研究,旨在為有效的預防AFL的發(fā)生、發(fā)展,并為AFL的治療提供有價值的理論依據(jù)。試驗一通過給雄性Wistar大鼠灌胃白酒和吡唑的混合液,飼喂高脂飼料的方法制備AFL動物模型,分別于造模后第8、10、12周隨機抽取大鼠,采集血液及肝臟,檢測血清轉氨酶含量及肝組織病理變化以驗證造模效果。結果表明,造模12周,大鼠血清AST、ALT水平顯著升高,肝組織石蠟切片,H.E染色后,顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),大鼠肝細胞出現(xiàn)嚴重脂肪變性,空泡化病變顯著,肝小葉中央靜脈及門管區(qū)出現(xiàn)炎性細胞浸潤,證明本試驗所采取的造模方法,12周可成功復制大鼠AFL模型。試驗二在制備AFL模型的同時及造模后在大鼠飲水中添加不同濃度�；撬徇M行預防和治療。預防試驗分為:對照組、模型組、2%和5%�；撬峥瞻讓φ战M、2%和5%�；撬犷A防組,時間12周;治療試驗分為:正常對照組、自然恢復組、2%和5%牛磺酸治療組,時間分為4周和8周。試驗結束后,殺鼠取血及肝臟,檢測大鼠血清中相關生理生化指標,并制作大鼠肝臟石蠟切片,H.E染色分析病理變化。結果表明:模型組大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C、NEFA水平顯著升高,HDL-C水平顯著降低;肝臟NEFA、MDA含量顯著升高,T-AOC、GSH、SOD水平顯著下降;2%、5%牛磺酸空白組與對照組相比差異不顯著;預防及治療性添加�；撬崮茱@著降低AFL大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C、NEFA水平,升高HDL-C水平;顯著提高大鼠肝組織中T-AOC、SOD、GSH活性,降低NEFA、MDA含量。治療4周時,與對照組相比,自然恢復組各項指標與對照組差異顯著,�；撬嶂委熃M可有效改善各項生理生化指標;治療8周時,各組大鼠上述指標與對照組相比差異不明顯,但�；撬嶂委熃M各指標均明顯優(yōu)于自然恢復組。觀察大鼠肝組織病理切片并進行定量分析發(fā)現(xiàn),�；撬崮茱@著抑制并減輕乙醇造成的肝細胞脂肪變性、炎癥反應程度。試驗三在制備AFL模型的同時及造模后在大鼠飲水中添加不同濃度�；撬徇M行預防和治療,4周試驗結束后殺鼠,提取大鼠肝臟總RNA,半定量RT-PCR法擴增脂肪代謝關鍵酶及其轉錄調控因子CPT-1、FAS、ACC、PPARα基因;同時提取大鼠肝臟總蛋白,Wesrern Blot 法檢測 CPT-1、FAS、ACC、HMG-CoA 還原酶、PPARα、SREBP-1 蛋白表達;探討�；撬釋Ω闻K脂肪代謝的調控機理。結果表明:酒精可引起大鼠肝臟中FAS、ACC基因及蛋白表達量顯著增多,CPT-1、PPARα基因及蛋白的表達量顯著減少,HMG-CoA還原酶、SREBP-1蛋白的表達量顯著增多;牛磺酸空白組與對照組無顯著差異;預防及治療性添加�；撬峋茱@著下調肝臟FAS、ACC基因及蛋白的表達,上調CPT-1、PPARα基因及蛋白的表達,同時降低HMG-COA還原酶、SREBP-1蛋白的表達,證明�；撬峥赏ㄟ^調節(jié)脂肪代謝過程中的關鍵酶及其轉錄調控因子的基因及蛋白表達調節(jié)肝臟中脂肪代謝,減少肝臟中脂肪沉積。以上試驗結果說明,牛磺酸可顯著抑制并修復AFL大鼠的肝細胞損傷,降低TC、TG、LDL-C含量,增加HDL-C含量,減少肝臟脂肪沉積,其機理可能是:(1)減輕酒精引起的肝臟脂質過氧化損傷,清除氧自由基,保護細胞膜免受自由基的攻擊,進而保護肝細胞;(2)調控肝臟脂肪代謝相關酶及其轉錄調控因子的基因、蛋白表達,調節(jié)肝臟脂肪代謝,抑制并減輕酒精引起的肝臟脂肪代謝紊亂,減少甘油三酯、脂肪酸、膽固醇合成、促進脂肪酸β氧化、促進肝臟內膽固醇的轉化,從而減少肝臟脂肪沉積,起到預防并治療AFL的作用。
【圖文】：

見雙核；肝細胞體積較大，呈多面體形，核大而圓，位于細胞中央；肝細胞索以中央靜逡逑脈為中心向四周呈放射狀排列，板間為不規(guī)則的肝竇；肝細胞間連接緊密，無脂肪變性逡逑（附圖１）。模型組大鼠肝小葉界限不清，胞質內還可見大小不等、數(shù)量不一的脂肪空泡，逡逑脂肪變性面積較正常大鼠差異極顯著（Ｐ＜０．０１）；肝細胞索排列紊亂；肝竇變窄，肝細逡逑胞出現(xiàn)散在和片狀氣球樣變，有的可見肝細胞水腫，點狀壞死，脂肪變性６級（附圖２）。逡逑脂肪變面積百分率及分級見表１－３。逡逑表丨－３邋ＡＦＬ大鼠肝臟病理變化逡逑Ｔａｂ．邋１－３邋Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｌｉｖｅｒ邋ｉｎ邋ＡＦＬ邋ｒａｔｓ逡逑脂肪變性分級邐脂變面積百分率逡逑對照組邐ｉ邐０．９２邋士邋０．２６ａ逡逑模型組邐６邐２２．０２±２．３３ｂ逡逑注：問列灼標含有相同字母者為差異不顯著（Ｐ＞0．0５）

登錄號：ＮＭ＿０１３１９６．１）進行比較，同源率達到了邋９８％邋（見圖３－６）。逡逑測序序列邐Ｃ邋Ａ邋Ａ｜ＴＧＣ｜ＡＴＣＣＧＴＴＴＴＧＧ｜ＡＧ｜ＡＴＧＣＣＡ邋ＡＧ邋ＡＴＣＴＧ邋ＡＧ邋Ａ邋ＡＡＧＣＡＡ邋ＡＡＣＴＧＡ邋ＡＧＧＣＡＧ邋ＡＡＡ邐６８逡逑ＮＭ＿０１３１９６．邋１邐ＣＡＡｆｒＧｃ｜ＡＴＣＣＧＴＴＴＴＧＧ｜ＡＧ｜ＡＴＧＣＣＡＡＧＡＴＣＴＧＡＧＡＡＡＧＣＡＡＡＡＣＴＧＡＡＧＧＣＡＧＡＡＡ邐９３９逡逑測序序列邐ＴＣＣＴＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＣＧＡＴＣＴＧＡＡＡＧＡＴＴＣＧＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＣＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＣＣＡ邐１２８逡逑ＮＫ０１３１９６．邋１邐ＴＣＣＴＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＣＧＡＴＣＴＧＡＡＡＧＡＴＴＣＧＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＡＣＣＴＣＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＣＣＡ邐９９９逡逑測序序列邐ＡＧＡＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＴＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＣＣＣＧＧＧＴＣＡ邐１８８逡逑ＮＭ＿０１３１９６．邋１邐ＡＧＡＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＡＧＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＴＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＣＣＣＧＧＧＴＣＡ邐１０５９逡逑測序序列邐ＴＡＣＴＣＧＣＡＧＧＡＡＡＧＡ邋２０３逡逑ＮＭＪＪ１３１９６．邋１邐ＴＡＣＴＣＧＣＡＧＧＡＡＡＧＡ邋１０７４逡逑圖３－６邋ＰＰＡＲａ克隆基因序列的同源性比較逡逑Ｆｉｇ．邋３－６邋Ｈｏｍｏｌｏｇｙ邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＰＰＡＲａ邋ｇｅｎｅ邋ｓｅｑｕｅｎｃｅ逡逑３．２．４邋ＰＣＲ反應條件的優(yōu)化逡逑（１）邋ＣＰＴ－邋Ｉ邋ＰＣＲ反應條件的優(yōu)化逡逑從圖３－７可以看出
【學位授予單位】：沈陽農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R575

【參考文獻】

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本文編號：2662790