【摘要】：背景肝纖維化是許多慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)之路,有許多研究證明慢性心理應(yīng)激可導(dǎo)致肝炎加重、促進肝纖維化的發(fā)展,然而其具體機制尚不明確。傳統(tǒng)觀念認為慢性心理應(yīng)激可直接作用于肝臟。慢性心理應(yīng)激狀態(tài)下,下丘腦-垂體-腎上腺軸激活并釋放糖皮質(zhì)激素,導(dǎo)致免疫系統(tǒng)平衡失調(diào)、全身及肝臟局部炎癥加重,肝細胞內(nèi)Fas抗原表達升高,肝細胞凋亡加速、肝血流量下降,從而促進肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。然而有研究發(fā)現(xiàn)心理應(yīng)激對肝臟的影響在體內(nèi)體外不同:在體內(nèi)環(huán)境中心理應(yīng)激狀態(tài)下糖皮質(zhì)激素水平升高,肝細胞內(nèi)Fas抗原表達升高,細胞凋亡加速;而在體外糖皮質(zhì)激素環(huán)境下培養(yǎng),肝細胞內(nèi)Fas抗原表達未升高,細胞凋亡不明顯。慢性心理應(yīng)激究竟通過何種途徑作用于肝臟尚不明確。我們知道腦-腸之間存在極其復(fù)雜的溝通機制,即“腦-腸軸”,是一個胃腸系統(tǒng)與大腦整合的綜合生理模型。過度或有害的心理應(yīng)激能造成“腦-腸”軸紊亂,導(dǎo)致腸道動力失調(diào)、腸道敏感性增高、腸道通透性增加和腸道屏障功能障礙。而這些病變作用于“腸-肝軸”,將導(dǎo)致LPS等腸道細菌產(chǎn)物移位至腸外,到達肝臟后將導(dǎo)致肝臟炎性級聯(lián)反應(yīng),對肝硬化及其并發(fā)癥有重要促進作用。我們注意到“腦-腸軸”與“腸-肝軸”的交叉點在于腸道。由此我們設(shè)想,慢性心理應(yīng)激可能通過腸道途徑作用于肝臟,我們提出“腦-腸-肝”軸的概念來解釋慢性心理應(yīng)激的促肝纖維化作用。目的觀察慢性心理應(yīng)激對大鼠腸道通透性和細菌移位的影響,研究慢性心理應(yīng)激經(jīng)腸道促進大鼠肝纖維化發(fā)展的作用。方法將60只SD大鼠隨機分為6組:正常組、心理應(yīng)激組、橄欖油組(肝纖維化陰性對照)、橄欖油+心理應(yīng)激組、肝纖維化組、肝纖維化+心理應(yīng)激組。給予大鼠40%四氯化碳皮下注射(3ml/kg,2次/周,首劑加倍)8周建立肝纖維化模型,皮下注射橄欖油作為陰性對照。造模第5周起,采用10種不可預(yù)知性刺激因素,每日隨機選取一種刺激大鼠,持續(xù)4周制備慢性心理應(yīng)激模型。造模第8周末處死大鼠,門靜脈取血,采用光度法檢測脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)表達水平;取小腸組織,HE染色后評價腸黏膜病變程度;采用免疫組織化學(xué)法檢測小腸1型促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體(corticotropin-releasing hormone receptor 1,CRFR1)、occludin蛋白表達情況;取肝臟組織,Masson染色后評價肝纖維化程度。結(jié)果1.腸組織CRFR1蛋白表達半定量結(jié)果顯示,CRFR1蛋白表達量在心理應(yīng)激組、橄欖油+心理應(yīng)激組、肝纖維化+心理應(yīng)激組中逐步升高,且分別較各自陰性對照組表達上調(diào)(P0.001)。同正常組及橄欖油組相比,肝纖維化大鼠CRFR1蛋白表達明顯上調(diào),而施加慢性心理應(yīng)激后其CRFR1蛋白表達量進一步增高(P0.001)2.腸組織occludin蛋白表達半定量結(jié)果顯示,occludin蛋白表達量在心理應(yīng)激組、橄欖油+心理應(yīng)激組、肝纖維化+心理應(yīng)激組中分別較各自陰性對照組表達下調(diào)(P0.05)。同正常組及橄欖油組相比,肝纖維化大鼠occludin蛋白表達明顯下調(diào),而施加慢性心理應(yīng)激后其occludin蛋白表達量進一步降低(P0.05)。3.腸黏膜病變評估結(jié)果顯示:(1)肝纖維化組大鼠腸絨毛較正常組及橄欖油組變短變粗,施加心理應(yīng)激后腸絨毛萎縮程度進一步加深,趨于短、細(P0.05);(2)肝纖維化組腸黏膜損傷指數(shù)高于橄欖油組及正常組,施加心理應(yīng)激刺激后其腸黏膜損傷指數(shù)進一步增高(P0.05)。4.門靜脈LPS水平測定結(jié)果示:肝纖維化大鼠LPS表達量明顯高于正常組及橄欖油組,施加心理應(yīng)激后進一步增高(P0.05)。5.肝纖維化分期評分結(jié)果顯示,肝纖維化大鼠肝纖維化程度明顯較正常組及橄欖油組嚴(yán)重,施加心理應(yīng)激后其肝纖維化程度進一步增高(P0.05)。結(jié)論1.CRFR1是檢測心理應(yīng)激的敏感指標(biāo),可以用以評估機體對心理應(yīng)激的反應(yīng)程度。2.肝纖維化大鼠處于心理應(yīng)激高敏感狀態(tài)。3.慢性心理應(yīng)激所致腸道病變可能在慢性心理應(yīng)激加重肝纖維化大鼠肝纖維化程度的過程中起重要作用。
【圖文】：

3.1 一般情況與正常大鼠相比，慢性心理應(yīng)激大鼠皮毛雜亂無光澤，攝食、活躍程度下降，體重減輕。肝纖維化大鼠上述表現(xiàn)更加明顯。施加心理應(yīng)激后，肝纖維化大鼠上述表現(xiàn)進一步加重，部分大鼠出現(xiàn)腹水、腸管水腫。60 只大鼠建模過程中死亡 10 只，最終進入結(jié)果分析 50 只。3.2 腸道 CRFR1 蛋白表達情況腸組織CRFR1 蛋白表達半定量結(jié)果顯示，CRFR1 蛋白表達量在心理應(yīng)激組、橄欖油+心理應(yīng)激組、肝纖維化+心理應(yīng)激組中逐漸升高，，且分別較各自陰性對照組表達上調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001，圖 3.4A）。同正常組及橄欖油組相比，肝纖維化大鼠 CRFR1 蛋白表達明顯上調(diào)，而施加慢性心理應(yīng)激后其CRFR1 蛋白表達量進一步增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001, 圖 3.4 A）。各組腸道 CRFR1 蛋白免疫組化定性結(jié)果見圖 3.1，相對定量結(jié)果見表 3.1。

組別nCRFR1 P 值正常組 10 0.0012±0.0003心理應(yīng)激組 7 0.1107±0.02100.000橄欖油組 7 0.1180±0.0025橄欖油+心理應(yīng)激組 8 0.2432±0.01460.000肝纖維化組 9 0.2245±0.0128*肝纖維化+心理應(yīng)激組 9 0.3637±0.27530.000注：與正常組及橄欖油組相比，*P <0.001。3.3 腸道 occludin 蛋白表達情況腸組織 occludin 蛋白表達半定量結(jié)果顯示，occludin 蛋白表達量在心理應(yīng)激組、橄欖油+心理應(yīng)激組、肝纖維化+心理應(yīng)激組中分別較各自陰性對照組表達下調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05, 圖 3.4 B）。同正常組及橄欖油組相比，肝纖維化大鼠 occludin 蛋白表達下調(diào)，而施加慢性心理應(yīng)激后其 occludin 蛋白表達量進一步降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖 3.4 B）。各組腸道 occludin蛋白免疫組化定性結(jié)果見圖 3.2，相對定量結(jié)果見表 3.2。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575.2

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