【摘要】： 研究背景： 胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1(insulin-like growth-factor binding protein-related protein 1, IGFBPrP1)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種可溶性分泌蛋白,導師劉立新已有的研究發(fā)現(xiàn)：在肝纖維化、肝硬化患者肝組織中IGFBPrP1的表達較正常對照組明顯增強[’]；在體外培養(yǎng)的肝星狀細胞(hepatocyte stellate cell, HSC)中加入IGFBPrP1可使其合成細胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)增多；用抗IGFBPrP1抗體可逆轉由TGFβ1誘導的HSC產(chǎn)生的過多的Ⅰ型膠原(CollagenⅠ);抗IGFBPrP1抗體可通過抑制肝纖維化小鼠HSC的活化、減少ECM的主要成分CollagenⅠ與纖維連接蛋白(fibronectin, FN)的合成及減少肝細胞的凋亡等途徑發(fā)揮抗纖維化作用。以上研究結果表明IGFBPrP1可能是肝纖維化發(fā)生機制中新的致病因子。 那么,IGFBPrP1是否對肝臟具有直接的致纖維化作用呢?其作用機制為何?目前尚無研究報道。為了闡明此問題,設計了本課題。 目的： 明確外源性胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1(IGFBPrP1)對在體肝組織的影響,并探討其可能的機制。 方法： 24只雄性C57BL／6野生型小鼠隨機分為3組：正常對照組(8只),腹腔注射等量磷酸鹽緩沖液；rmIGFBPrP1 2周組(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持續(xù)2周；rmIGFBPrP1 4周組(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持續(xù)4周。分別在第2周、4周末處死小鼠。(1)取肝組織,肉眼觀察肝組織大體形態(tài)；(2)分別對肝組織石蠟切片做HE染色和苦味酸-天狼猩紅染色觀察肝組織病理變化及膠原纖維形成情況；(3)免疫組織化學染色檢測肝組織中Ⅲ型膠原(CollagenⅢ)、轉化生長因子β1 (transforming growth factorβ1, TGFβ1)、Smad3及p-Smad2/3的表達；(4)Western blot檢測肝組織中IGFBPrP1、纖維連接蛋白(Fibronectin, FN)、Ⅰ型膠原(CollagenⅠ)、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的相對表達量,并進行IGFBPrP1與其他各指標的相關性分析。 結果： (1)苦味酸-天狼猩紅染色分析結果：肝組織中膠原含量在rmIGFBPrP1 2周組較正常對照組明顯增多,rmIGFBPrP1 4周組較2周組明顯增多(0.45%±0.15% vs 0.21%±0.11%,1.02%±0.33% vs 0.45%±0.15%,P0.05)。 (2)免疫組織化學染色結果顯示：rmIGFBPrP1 2周組及4周組肝組織中CollagenⅢ、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表達均較正常對照組顯著增強,且4周組上述蛋白表達量較2周組高(CollagenⅢ:F=221.858, P0.01; TGFβ1:F=280.571, P0.01; Smad3: F=292.114, P0.01; p-Smad2/3:F=114.251, P0.01)。 (3) Western blot檢測結果顯示：rmIGFBPrP1 2周組及4周組肝組織中IGFBPrP1、CollagenⅠ、FN、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表達均較正常對照組顯著增強,且4周組強于2周組(F=20.136、F=6.029、F=17.282、F=7.484、F=20.957、F=87.713,P0.01)。肝組織中IGFBPrP1的表達變化與FN (r=0.890, P0.01)、CollagenⅠ(r=0.921,P0.01)、TGFβ1 (r=0.726, P0.01)、Smad3 (r=0.977, P0.01)及p-Smad2/3 (r=0.809, P0.01)的表達變化呈正相關。 結論： (1)外源性IGFBPrP1可通過增加細胞外基質(zhì)的主要成分CollagenⅠ,Ⅲ及FN的含量,導致肝組織中ECM過度沉積,對肝臟有直接的致纖維化作用。 (2)外源性IGFBPrP1對肝臟的致纖維化作用是通過TGFβ1/Smad3信號通路來實現(xiàn)的。
【圖文】：

觀察離體肝組織:正常對照組小鼠肝組織色澤紅潤，表面光滑，質(zhì)柔軟。n刀IGFBPrPI4周組小鼠肝組織色澤蒼白，體積略縮小，質(zhì)地略脆。n刀IGFBPrP12周組肝組織病理改變介于兩者之間(見圖1一1)。

n刀IGFBPrP14 rmIGFBPrP12周組病變較輕，匯管區(qū)周圍有細胞變性及炎細胞浸潤。周組大量肝細胞脂肪變性，且有少量肝細胞核碎裂壞死。(見圖2一1)。A:正常對照組B:rmIGFBPrP12周組C:rmIGFBPrP14周組圖2一1:各組小泉肝組織中RE染色 x400倍3.苦味酸一天狼猩紅染色結果該染色方法使膠原在普通顯微鏡下呈紅色。正常對照組小鼠肝組織僅匯管區(qū)和肝門靜脈周圍有少許紅色膠原纖維存在。肝組織中膠原含量在rmIGFBPrP12周組較正常對照組明顯增多，nn1GFBPrP14周組較2周組明顯增多(0.45%士0.巧 %vs0.21%士0.n%，1.02%士 0.33%vs0.45%士0.15%，P<0.05，，見圖3一l)。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R575.2

【參考文獻】

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1 劉毅;劉立新;郭曉紅;張騫騫;;IGFBP-rP1對肝星狀細胞活化及核因子-κB活性的影響[J];中國病理生理雜志;2008年09期

2 田小霞;秦桂秀;

本文編號：2659254