【摘要】：研究背景及目的:非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指在無(wú)過量飲酒史[過去12個(gè)月每周飲用乙醇(酒精)男性210g,女性140g],未應(yīng)用導(dǎo)致脂肪肝的藥物,并排除病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝豆?fàn)詈俗冃�、全胃腸外營(yíng)養(yǎng)、乏β脂蛋白血癥、先天性脂質(zhì)萎縮癥、乳糜瀉等可以導(dǎo)致脂肪肝的特定疾病,由影像學(xué)或組織學(xué)確定肝臟內(nèi)過多的脂肪沉積,即可診斷非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。近年來(lái)隨著表觀遺傳學(xué)的發(fā)展,許多研究表明,微小RNA(microRNA,miRNA)與肝病的關(guān)系密切,且miRNA-29a在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,而非酒精性脂肪性肝病本質(zhì)是脂質(zhì)代謝的異常,因此探索miRNA-29a在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病過程中的表達(dá)情況及探索其作用靶點(diǎn)對(duì)于揭示miRNA在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的作用機(jī)制有著重要作用。本研究試圖構(gòu)建模擬人的脂肪肝形成過程的非酒精性脂肪性肝病動(dòng)物模型,觀察模型構(gòu)建過程中NAFLD的病理經(jīng)過,以定量PCR法檢測(cè)miRNA-29a在NAFLD中的表達(dá)情況,進(jìn)一步探索其在疾病發(fā)展中的生物作用。方法:選取8周齡C57BL/6小鼠共60只構(gòu)建NAFLD動(dòng)物模型,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各30只,實(shí)驗(yàn)組給予高脂飲食FF(fast food)與高果糖飲水,對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng),分籠喂養(yǎng)每籠5只編號(hào),間隔1周測(cè)量小鼠體重,于喂養(yǎng)4周,8周,12周,16周,20周,24周,28周分別處死實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各3-5只小鼠,麻醉并心尖穿刺取血0.8-1.0ml,分離血清,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)ALT、AST、DBIL、TBIL、LDL、HDL、TG、TBA、GLU 等生化指標(biāo)。取新鮮肝臟組織,稱取肝臟濕重,并選取右葉肝組織做病理切片,行HE、油紅、Masson染色,免疫組織化學(xué)測(cè):TGF-β31,α-SMA的表達(dá)情況。從各時(shí)間節(jié)點(diǎn)取的等質(zhì)量肝組織提取RNA,用SYBR Green Ⅰ Real Time PCR方法檢測(cè)小鼠肝組織樣本中目的miRNA-29a表達(dá)水平的變化情況。結(jié)果:我們成功構(gòu)建C57BL/6的NAFLD動(dòng)物模型,且在模型過程中第2個(gè)月起出現(xiàn)脂肪變,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相關(guān)生化指標(biāo)及病理表現(xiàn)出現(xiàn)明顯差異。在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組不同時(shí)間肝臟組織定量提取miRNA-29a的分析中,實(shí)驗(yàn)組第2個(gè)月水平較對(duì)照組顯著升高,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),在3-6個(gè)月miRAN-29a實(shí)驗(yàn)組水平較對(duì)照組均高,但并無(wú)顯著差異。結(jié)論:FF飲食與高糖飲水可以成功構(gòu)建NAFLD動(dòng)物模型,2個(gè)月后出現(xiàn)脂肪肝表現(xiàn),且隨時(shí)間呈現(xiàn)逐漸加重趨勢(shì),并出現(xiàn)肝纖維化的發(fā)生與進(jìn)展。miRNA-29a水平在非酒精性脂肪性肝病模型初期出現(xiàn)明顯升高,隨時(shí)間推移呈現(xiàn)適應(yīng)性改變。
【圖文】：

Ｂ勺間逡逑圖１小鼠體重變化趨勢(shì)逡逑從圖１可見，小鼠體重在起始６Ｗ內(nèi)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組并無(wú)明顯差異，這可能與小逡逑鼠初食高脂飼料，并不適應(yīng)符合高脂肪的飲食有關(guān)。６Ｗ后實(shí)驗(yàn)組小鼠體重逐漸逡逑升高平均體重超過對(duì)照組，兩組總體體重均呈上升趨勢(shì)，但實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組存在逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ＜0．0５），比較結(jié)果如表１逡逑邐表１對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組各節(jié)點(diǎn)體重比較（ｇ）邐逡逑時(shí)間邐對(duì)照組邐實(shí)驗(yàn)組邐Ｐ值逡逑１邐周邐２５．００±０．５６５９邐２４．８２±０．４５９０邐０．２０５４逡逑２邐周邐２６．１５士０．６３１３邐２５．９７士０．３３６１邐０．１９８７逡逑３邐周邐２７．牡０．６８９８邐２７．１２±０．３４９０邐０．３６１１逡逑４邐周邐２８．１７±０．２５２９邐２８．１０±０．２３３６邐０．１２７７逡逑５邐周邐２８．８５±０．７３３１邐２８．６０士０．４１２６邐０．１５３６逡逑６邐周邐２９．８０±０．３７３４邐２９．５３±０．４００４邐０．０２４７逡逑７邐周邐３１．２５±０．５６８０邐３３．５８±０．３１６８邐＜０．０００１逡逑８邐周邐３１．３７士０．２８２６邐３４．８７±０．２３８８邐＜０．０００１逡逑９邐周邐３１．２５±０．５１０１邐３５．４４±０．２６１６邐＜０

圖２邋ＡＬＴ實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組對(duì)比圖逡逑１６逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 Nadia Panera;Daniela Gnani;Annalisa Crudele;Sara Ceccarelli;Valerio Nobili;Anna Alisi;;MicroRNAs as controlled systems and controllers in non-alcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2014年41期

2 Serkan Dogan;Gokmen Zararsiz;Sebnem Gursoy;Kadri Guven;Omer Ozbakir;Munis Dundar;Mehmet Yucesoy;;Circulating microRNAs in patients with non-alcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Hepatology;2014年08期

3 Yu-Yuan Li;;Genetic and epigenetic variants influencing the development of nonalcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2012年45期

4 Gunter Maubach;Michelle Chin Chia Lim;Henry Yang;;miRNA studies in in vitro and in vivo activated hepatic stellate cells[J];World Journal of Gastroenterology;2011年22期

5 姜虹;李定國(guó);;TGF-β1與肝纖維化[J];世界華人消化雜志;2003年03期

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本文編號(hào)：2656110