【摘要】：研究背景及目的:非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指在無過量飲酒史[過去12個月每周飲用乙醇(酒精)男性210g,女性140g],未應(yīng)用導(dǎo)致脂肪肝的藥物,并排除病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝豆?fàn)詈俗冃�、全胃腸外營養(yǎng)、乏β脂蛋白血癥、先天性脂質(zhì)萎縮癥、乳糜瀉等可以導(dǎo)致脂肪肝的特定疾病,由影像學(xué)或組織學(xué)確定肝臟內(nèi)過多的脂肪沉積,即可診斷非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。近年來隨著表觀遺傳學(xué)的發(fā)展,許多研究表明,微小RNA(microRNA,miRNA)與肝病的關(guān)系密切,且miRNA-29a在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,而非酒精性脂肪性肝病本質(zhì)是脂質(zhì)代謝的異常,因此探索miRNA-29a在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病過程中的表達情況及探索其作用靶點對于揭示miRNA在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的作用機制有著重要作用。本研究試圖構(gòu)建模擬人的脂肪肝形成過程的非酒精性脂肪性肝病動物模型,觀察模型構(gòu)建過程中NAFLD的病理經(jīng)過,以定量PCR法檢測miRNA-29a在NAFLD中的表達情況,進一步探索其在疾病發(fā)展中的生物作用。方法:選取8周齡C57BL/6小鼠共60只構(gòu)建NAFLD動物模型,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機分為對照組和實驗組各30只,實驗組給予高脂飲食FF(fast food)與高果糖飲水,對照組給予普通飼料喂養(yǎng),分籠喂養(yǎng)每籠5只編號,間隔1周測量小鼠體重,于喂養(yǎng)4周,8周,12周,16周,20周,24周,28周分別處死實驗組和對照組各3-5只小鼠,麻醉并心尖穿刺取血0.8-1.0ml,分離血清,實驗室檢測ALT、AST、DBIL、TBIL、LDL、HDL、TG、TBA、GLU 等生化指標(biāo)。取新鮮肝臟組織,稱取肝臟濕重,并選取右葉肝組織做病理切片,行HE、油紅、Masson染色,免疫組織化學(xué)測:TGF-β31,α-SMA的表達情況。從各時間節(jié)點取的等質(zhì)量肝組織提取RNA,用SYBR Green Ⅰ Real Time PCR方法檢測小鼠肝組織樣本中目的miRNA-29a表達水平的變化情況。結(jié)果:我們成功構(gòu)建C57BL/6的NAFLD動物模型,且在模型過程中第2個月起出現(xiàn)脂肪變,實驗組與對照組相關(guān)生化指標(biāo)及病理表現(xiàn)出現(xiàn)明顯差異。在實驗組與對照組不同時間肝臟組織定量提取miRNA-29a的分析中,實驗組第2個月水平較對照組顯著升高,且具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),在3-6個月miRAN-29a實驗組水平較對照組均高,但并無顯著差異。結(jié)論:FF飲食與高糖飲水可以成功構(gòu)建NAFLD動物模型,2個月后出現(xiàn)脂肪肝表現(xiàn),且隨時間呈現(xiàn)逐漸加重趨勢,并出現(xiàn)肝纖維化的發(fā)生與進展。miRNA-29a水平在非酒精性脂肪性肝病模型初期出現(xiàn)明顯升高,隨時間推移呈現(xiàn)適應(yīng)性改變。
【圖文】：

Ｂ勺間逡逑圖１小鼠體重變化趨勢逡逑從圖１可見，小鼠體重在起始６Ｗ內(nèi)對照組與實驗組并無明顯差異，這可能與小逡逑鼠初食高脂飼料，并不適應(yīng)符合高脂肪的飲食有關(guān)。６Ｗ后實驗組小鼠體重逐漸逡逑升高平均體重超過對照組，兩組總體體重均呈上升趨勢，但實驗組與對照組存在逡逑統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＜0．0５），比較結(jié)果如表１逡逑邐表１對照組與實驗組各節(jié)點體重比較（ｇ）邐逡逑時間邐對照組邐實驗組邐Ｐ值逡逑１邐周邐２５．００±０．５６５９邐２４．８２±０．４５９０邐０．２０５４逡逑２邐周邐２６．１５士０．６３１３邐２５．９７士０．３３６１邐０．１９８７逡逑３邐周邐２７．牡０．６８９８邐２７．１２±０．３４９０邐０．３６１１逡逑４邐周邐２８．１７±０．２５２９邐２８．１０±０．２３３６邐０．１２７７逡逑５邐周邐２８．８５±０．７３３１邐２８．６０士０．４１２６邐０．１５３６逡逑６邐周邐２９．８０±０．３７３４邐２９．５３±０．４００４邐０．０２４７逡逑７邐周邐３１．２５±０．５６８０邐３３．５８±０．３１６８邐＜０．０００１逡逑８邐周邐３１．３７士０．２８２６邐３４．８７±０．２３８８邐＜０．０００１逡逑９邐周邐３１．２５±０．５１０１邐３５．４４±０．２６１６邐＜０

圖２邋ＡＬＴ實驗組與對照組對比圖逡逑１６逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R575.5

【參考文獻】

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本文編號：2656110