發(fā)布時間：2020-05-09 09:58

【摘要】：目的通過脂質體法干擾和過表達腸上皮細胞的熱休克轉錄因子2(heat shock factor 2,HSF2),探討其對腸上皮細胞炎癥反應的影響和涉及的信號通路,為潰瘍性結腸炎發(fā)病機制及診治靶點提供線索。方法選取結腸腫瘤上皮細胞Caco-2作為研究材料,采用脂質體法分別轉染HSF2siRNA和pCMV-HSF2-FLAG重組質粒,四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測轉染前后細胞生理特性的變化;并用脂多糖(LPS)刺激轉染組及對照組細胞,Griess Reagent System測定各組細胞的NO濃度;RT-PCR檢測細胞炎性酶iNOS、COX-2,炎癥因子TNF-α、IL-8mRNA轉錄水平;ELISA檢測細胞培養(yǎng)基中TNF-α、IL-8含量;Western Blot檢測COX-2、IκB、NF-κB p65蛋白水平,以及ERK1/2、JNK和p38磷酸化水平。結果 MTT法檢測結果顯示,脂質體法轉染入siRNA或重組質粒對細胞活性無顯著影響;干擾HSF2后,LPS刺激Caco-2產生iNOS、COX-2、TNF-α及IL-8,在mRNA和蛋白水平均較對照組表達上調(P0.05),這一過程中信號通路IκB表達降低,而NF-κB p65表達升高,MAPK中ERK1/2磷酸化水平降低,而JNK和p38則呈增強趨勢。轉染入重組質粒過表達HSF2后,結果則相反。結論 HSF2通過增強ERK1/2蛋白磷酸化水平,抑制JNK、P38及NF-κB表達,能有效抑制LPS引起Caco-2細胞的炎性酶及炎性因子的表達,在炎癥反應中起保護性作用,對研究潰瘍性結腸炎的發(fā)病機制提供線索,可能成為其治療新的靶點。
【圖文】：

表１ＭＴＴ比色法檢測脂質體法干擾和過表達ＨＳＦ２后細胞的活性（s裕，

本文編號：2655970