【摘要】：目的通過(guò)脂質(zhì)體法干擾和過(guò)表達(dá)腸上皮細(xì)胞的熱休克轉(zhuǎn)錄因子2(heat shock factor 2,HSF2),探討其對(duì)腸上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響和涉及的信號(hào)通路,為潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制及診治靶點(diǎn)提供線索。方法選取結(jié)腸腫瘤上皮細(xì)胞Caco-2作為研究材料,采用脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染HSF2siRNA和pCMV-HSF2-FLAG重組質(zhì)粒,四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞生理特性的變化;并用脂多糖(LPS)刺激轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組細(xì)胞,Griess Reagent System測(cè)定各組細(xì)胞的NO濃度;RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞炎性酶iNOS、COX-2,炎癥因子TNF-α、IL-8mRNA轉(zhuǎn)錄水平;ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中TNF-α、IL-8含量;Western Blot檢測(cè)COX-2、IκB、NF-κB p65蛋白水平,以及ERK1/2、JNK和p38磷酸化水平。結(jié)果 MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染入siRNA或重組質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞活性無(wú)顯著影響;干擾HSF2后,LPS刺激Caco-2產(chǎn)生iNOS、COX-2、TNF-α及IL-8,在mRNA和蛋白水平均較對(duì)照組表達(dá)上調(diào)(P0.05),這一過(guò)程中信號(hào)通路IκB表達(dá)降低,而NF-κB p65表達(dá)升高,MAPK中ERK1/2磷酸化水平降低,而JNK和p38則呈增強(qiáng)趨勢(shì)。轉(zhuǎn)染入重組質(zhì)粒過(guò)表達(dá)HSF2后,結(jié)果則相反。結(jié)論 HSF2通過(guò)增強(qiáng)ERK1/2蛋白磷酸化水平,抑制JNK、P38及NF-κB表達(dá),能有效抑制LPS引起Caco-2細(xì)胞的炎性酶及炎性因子的表達(dá),在炎癥反應(yīng)中起保護(hù)性作用,對(duì)研究潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制提供線索,可能成為其治療新的靶點(diǎn)。
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表１ＭＴＴ比色法檢測(cè)脂質(zhì)體法干擾和過(guò)表達(dá)ＨＳＦ２后細(xì)胞的活性（s裕，

本文編號(hào)：2655970