【摘要】：目的:研究小白菊內(nèi)酯在重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷的作用及其分子機(jī)制。方法:50只健康雄性SD大鼠被隨機(jī)分為Sham組(假手術(shù)組腹腔內(nèi)注射tween 80,n=10)、Model組(重癥急性胰腺炎大鼠腹腔內(nèi)注射tween 80,n=10)、Low-P組(腹腔內(nèi)注射低劑量小白菊內(nèi)酯100μg/kg治療重癥急性胰腺炎大鼠組,n=10)、Middle-P組(腹腔內(nèi)注射中劑量小白菊內(nèi)酯200μg/kg治療重癥急性胰腺炎大鼠組,n=10)、High-P組(腹腔內(nèi)注射高劑量小白菊內(nèi)酯3000μg/kg治療重癥急性胰腺炎大鼠組,n=10)。Model組和Sham組腹腔內(nèi)均注射tween 80(0.05%)。采用腹腔內(nèi)注射水合氯醛麻醉SD大鼠。應(yīng)用3.5%�；悄懰徕c逆行注射入大鼠膽胰管制備重癥急性胰腺炎肝損傷動(dòng)物模型。Sham組僅剖腹探查,轉(zhuǎn)動(dòng)十二指腸,觸摸胰腺幾次后,還納十二指腸,逐層關(guān)腹。所有大鼠均術(shù)后12小時(shí)采集下腔靜脈血,應(yīng)用 ELISA kits檢測(cè)血清 amylase(AMY)、alanine aminotransferase(ALT)、aspartate aminotransferase(AST)、tumor necrosis factor-α(TNF-α)和interleukin-6(IL-6)。切取肝組織,一部分肝組織檢測(cè)NF-κB、p38MAPK、MKK3、caspase-3和 FasL 的變化;另一部分肝組織福爾馬林固定,HE染色,觀測(cè)其病理學(xué)形態(tài)。結(jié)果:1.Model組AMY(3456±51.17U/L)高于 Sham組(637.3±8.080U/L)(pp0.0001)。Model 組 ALT(203.2±4.123 U/L)高于 Sham 組(45.60±6.634 U/L)(pp0.0001)。Model組AST(520.1±9.768 U/L)高于 Sham 組(57.61±1.601U/L)(p0.0001))。Model 組 TNF-α(132.5±7.071pg/ml)高于 Sham組(37.64±3.915 pg/ml)(pp0.0001)。Model組IL-6(226.6±10.74 pg/ml)高于Sham組(32.68±3.486 pg/ml)(pp0.0001)。綜上述,Model 組 AMY、ALT、AST、TNF-α 和 IL-6均高于Sham組(p0.0001)。造模12小時(shí)后Sham組肝小葉完整,門脈區(qū)域少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。絕大多數(shù)肝細(xì)胞形態(tài)正常。HE染色顯示Model組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)成損傷明顯,細(xì)胞壞死的范圍增加,僅在部分肝小葉周圍有殘留的變性肝細(xì)胞。肝小葉門脈區(qū)較大范圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。2.Model組大鼠血清 AMY 為 3456±51.17U/L,High-P 組大鼠 AMY 為1689±72.43U/L,Middle-P組大鼠AMY為2327±56.67 U/L,Low-P組大鼠AMY為 2786±4.90U/L。High-P組、Middle-P大鼠血清AMY含量分別為 Model組大鼠 0.49倍(p0.001)和 0.67倍(p0.05),AMY顯著降低。Low-P組和Model組差異無顯著性(p0.05)。Model組大鼠ALT為 203.2±4.123U/L,High-P組ALT為 113.4±3.801U/L,Middle-P組ALT為 138.7±2.668 U/L,Low-P組ALT為 166.2±2.801U/L。High-P、Middle-P和 Low-P組ALT均高于Model組(p0.05)。Model組大鼠AST 為 520.1±9.768U/L。High-P 組 AST 為 268.0±8.675U/L,Middle-P組AST為375.0±9.402 U/L,Low-P組AST為461.8±6.349U/L。和Model組比較,High-P組AST明顯降低(p0.001),Middle-P也有下降(p0.05),而Low-P組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。Model組大鼠血清IL-6為226.6±10.74pg/mL,High-P組IL-6為 76.50±7.072U/pg/mL L,Middle-P組IL-6為 132.4±12.36 pg/mL,Low-P組IL-6為 174.7±10.74 pg/mL。和Model組比較,High-P組大鼠血清IL-6明顯降低(p0.001),Middle-P也有下降(p0.05),而Low-P組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。Model組大鼠血清TNF-α為 132.5±7.071 pg/mL,High-P組為 58.27±6.344 pg/mL,Middle-P組為 80.28±7.141 pg/mL,Low-P組為 101.7±10.28 pg/mL。和Model組比較,High-P組大鼠血清TNF-α明顯降低(p0.001),Middle-P組也有下降(p0.05),而Low-P組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。綜上述,與Model組比較,應(yīng)用小白菊內(nèi)酯干預(yù)后,小白菊內(nèi)酯治療組血清AMY、ALT、AST、IL-6和TNF-α均降低,并且降低程度與小白菊內(nèi)酯呈劑量依賴性。與Model組比較,小白菊內(nèi)酯組肝臟病理改變明顯減輕,并呈劑量相關(guān)性。中、低劑量一定程度上減輕了肝臟損傷。與中、低劑量組小白菊內(nèi)酯組比較,高劑量組肝細(xì)胞輕度水腫,肝竇輕度擴(kuò)張、充血,肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死或輕微灶性壞死,無明顯的片狀壞死,匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯,顯著改善了肝損傷狀況。3.Western blot顯示:與Model組比較,高、中劑量小白菊內(nèi)酯組肝組織NF-κB下降(p0.05),低劑量小白菊內(nèi)酯組肝組織NF-κB無差異(p0.05);3種劑量小白菊內(nèi)酯組肝組織磷酸化p38MAPK均下降(p0.05)。但是,與Model組比較,3種劑量小白菊內(nèi)酯磷酸化MKK3無差異(p0.05)。4.與Model組比較,高、中劑量小白菊內(nèi)酷組肝組織FasL、caspase-3均降低(p0.05),并且這種作用存在劑量相關(guān)性。低劑量小白菊內(nèi)酯處理SAP大鼠后,肝組織中FasL和caspase-3變化不大,跟Model組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(ppp0.05)。結(jié)論:1.�；悄懰徕c逆行注射入膽胰管制備重癥急性胰腺炎大鼠存在肝損傷。重癥急性胰腺炎大鼠炎癥因子TNF-α及IL-6被激活。小白菊內(nèi)酯降低重癥急性胰腺炎大鼠血清TNF-α及IL-6并減輕肝損傷。2.小白菊內(nèi)酯降低重癥急性胰腺炎大鼠肝臟p38MAPK、NF-κB、FasL以及caspase-3表達(dá),提示小白菊內(nèi)酯可能通過抑制以上因子表達(dá)從而減輕重癥急性胰腺炎肝損傷。3.小白菊內(nèi)酯不能降低重癥急性胰腺炎大鼠肝臟MKK3表達(dá),提示MKK3可能不是小白菊內(nèi)酯作用靶點(diǎn);小白菊內(nèi)酯可能通過抑制p38MAPK磷酸化從而抑制NF-κB、FasL表達(dá),抑制肝細(xì)胞凋亡,減輕肝細(xì)胞炎癥損傷,從而減輕重癥急性胰腺炎肝損傷。
【圖文】：

大部分肝細(xì)胞形態(tài)正常。Ｍｏｄｅｌ組大鼠可見肝小葉結(jié)構(gòu)明顯破壞，逡逑肝細(xì)胞片狀壞死，僅在部分肝小葉周圍有殘留變性的肝細(xì)胞。肝竇充血逡逑明顯，肝小葉及匯管區(qū)較大范圍炎細(xì)胞浸潤(rùn)（圖１）。逡逑＃ｒ邋＇邐：邐Ｓ邐＾邋：ｉ邐焌邐，，備邐？邋＞＞邐＃邋Ｖ邐％邐＊邐？逡逑＊邐；＇，－邐奈＊邋Ａ邋？—邐考邐ｆ＇ｆ邋？邐？邋３邐？逡逑心邋Ｖ邋二…－一邋ｖ邋￥．＂p邐。邐」逡逑？…＇

本文編號(hào)：2651695